冷藏条件下肉源莓实假单胞菌nuoB对其生物被膜形成和细胞代谢的影响

【目的】研究nuoB对莓实假单胞菌生物被膜形成和细胞代谢的影响,进一步揭示nuoB对莓实假单胞菌介导的冷鲜肉腐败的调控机制,为优化冷鲜肉保鲜体系提供理论基础。【方法】以莓实假单胞菌NMC25野生株和nuoB突变株作为研究对象,利用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察生物被膜空间结构的差异;通过菌落细胞计数、胞外聚合物的表征解析生物被膜组分变化;基于超高效液相色谱联合质谱的非靶向代谢组学方法探寻与nuoB相关的代谢产物水平变化。【结果】CLSM显示,原位条件下野生株生物被膜细胞呈现密集排列、垂直化定殖的状态,而ΔnuoB生物被膜显示为相对无序、松散的结构。菌落中细胞计数结果显示,不同生长环境下的野生型菌株和突变型菌株的生物被膜细胞数量均无显著性差异,表明突变株在TSA或肉表面上以生物被膜形式生长的能力没有发生大的变化。与野生株相比,原位培养时突变株的蛋白质(P<0.01)和总糖(P<0.05)含量都显著升高,表明nuoB影响了莓实假单胞菌胞外聚合物的分泌。代谢组结果显示,野生组与突变组在正交偏最小二乘法判别分析模型中有明显的分离(R^(2)X=0.481,R^(2)Y=0.977,Q2=0.909),说明原位培养时突变株的代谢产物发生了明显变化。模型中组间差异显著的代谢物包括2-羟基肉桂酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、DL-色氨酸、17-羟基-二十碳四烯酸、5-OxoETE等。这些代谢物经过通路分析后发现,它们主要与脂肪酸的生物合成、不饱和脂肪酸的生物合成、核黄素代谢、2-氧代羧酸代谢、嘌呤代谢、氰基氨基酸代谢、苯丙氨酸代谢等有关。【结论】nuoB的破坏会导致莓实假单胞菌原位培养时生物被膜空间结构发生变化,促进胞外聚合物的生物合成,影响细胞内碳代谢、核苷酸代谢、脂质代谢和氨基酸代谢。

结核分枝杆菌耐多药相关蛋白筛选及诊断价值研究

目的筛选耐多药结核分枝杆菌菌体差异表达蛋白并分析其诊断耐药结核病的价值。方法采用比较蛋白质组学技术,将临床分离的耐多药结核分枝杆菌菌体蛋白与标准株H37Rv进行比较,通过质谱分析和数据库鉴定差异表达蛋白点,在大肠杆菌中克隆、表达和纯化其中的NuoB (NADH脱氢酶I B链),采用ELISA法测定NuoB抗原在耐多药结核分枝杆菌感染患者、敏感结核分枝杆菌感染患者和正常对照者血清Ig G抗体水平。结果共发现重复性较好的耐多药结核分枝杆菌菌株差异蛋白点11个,经质谱分析鉴定出8个蛋白,其中NuoB在耐多药结核分枝杆菌中表达上调,并具有B细胞强结合表位,免疫原性较强。纯化获得的NuoB抗原在耐多药结核分枝杆菌感染患者血清中Ig G阳性率为43.86%(25/57),在药物敏感结核分枝杆菌感染患者中为15.62%(5/32),在正常对照者中为10.00%(3/30),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NuoB抗原对耐多药结核病患者具有一定的区分度,具有耐多药结核病血清学鉴别诊断价值。