非O1/O139群霍乱弧菌致肝硬化失代偿期患者血流感染1例

患者,男性,58岁,乙型肝炎后肝硬化失代偿期、2型糖尿病12年,近1个月再发腹胀、水肿,尿少入院。住院期间患者寒战、发热,取血标本进行培养,选用头孢哌酮/舒巴坦经验性抗感染治疗。确诊非O1/O139霍乱弧菌引起的血流感染,药敏试验提示头孢哌酮/舒巴坦敏感后,继续使用当前药物,头孢哌酮/舒巴坦由3 g q12h改为3 g q8h治疗。10 d后患者无发热,血培养和粪便霍乱弧菌培养阴性,好转出院。

miR-582-5p靶向调控FOXO1对新生大鼠缺血缺氧性脑病神经元损伤的影响

目的 探讨微小RNA-582-5p(miR-582-5p)靶向调控叉头框转录因子1(FOXO1)对新生大鼠缺血缺氧性脑病(HIE)神经元损伤的影响。方法 90只新生大鼠按照随机数字表法均分为对照(NC)组、模型(HIE)组、miRNA对照(LV-miRNA-NC)组、miR-582-5p过表达(LV-miR-582-5p)组、miR-582-5p过表达+mRNA对照(LV-miR-582-5p+LV-NC)组、miR-582-5p过表达+FOXO1过表达(LV-miR-582-5p+LV-FOXO1)组。除NC组外的各组大鼠建立HIE模型,对大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色测定脑梗死体积,Real-time PCR检测miR-582-5p和FOXO1表达,双萤光素酶报告基因实验检测miR-582-5p和FOXO1靶向关系,HE染色观察海马组织病理变化,TUNEL和Neu N荧光双标共定位检测海马组织神经元凋亡,免疫组化染色检测FOXO1、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达。结果miR-582-5p和FOXO1具有靶向关系,与NC组比较,HIE组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、FOXO1表达、神经元凋亡率、FOXO1、Caspase-3蛋白表达增加,miR-582-5p表达降低,海马组织出现病理损伤(P<0.05);与LVmiRNA-NC组比较,LV-miR-582-5p组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、FOXO1表达、神经元凋亡率、FOXO1、Caspase-3蛋白表达降低,miR-582-5p表达增加,海马组织病理损伤好转(P<0.05);LV-FOXO1可以逆转LV-miR-582-5p对于HIE大鼠神经元损伤的保护作用。结论 miR-582-5p可以直接靶向负调控FOXO1表达,减少HIE新生大鼠神经元凋亡,对神经损伤具有保护作用。

鹿茸多肽对骨质疏松模型大鼠的改善作用及对SIRT1/FOXO1信号通路的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组、中剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg^(-1))复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关。

沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-FOXO1组、AngⅡ+si-NC+Rap组和AngⅡ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+si-NC组比较,AngⅡ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ+si-FOXO1组比较,AngⅡ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高AngⅡ暴露下hVSMCs增殖活性,并抑制其凋亡,从而参与AAA的发病。

甲状腺功能亢进激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用

【目的】探究甲亢激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用和机制。【方法】通过甲状腺激素(T40.1 mg/kg/day;腹腔注射)连续给药30 d构建甲亢诱导心室重构大鼠体内模型。利用β-catenin抑制剂MSAB(14 mg/kg)同时给药30 d,通过Western-blot检测心肌肥厚主要标志物ANP以及β-catenin、FoxO1等蛋白的表达情况;免疫荧光检测β-catenin、FoxO1的核内外表达及分布情况。利用原代培养的乳鼠心肌细胞,使用甲状腺激素(T320 nmol/L)处理心肌细胞24 h构建体外甲亢诱导心肌细胞肥厚模型,利用β-cateninsiRNA(30 nmol/L)转染心肌细胞敲低β-catenin,Western-blot和免疫荧光检测抑制β-catenin对甲亢诱导乳鼠心肌细胞肥厚的影响。【结果】Wnt/β-catenin通路激活后β-catenin入核增多并于细胞核内的转录因子结合发挥转录调控作用。β-catenin在甲亢诱导的大鼠心室重构模型心肌细胞核内表达显著增加,而其经典下游转录因子TCF7l2表达无显著差异。我们的结果显示,MSAB抑制β-catenin明显改善甲亢诱导的大鼠心室重构。进一步研究表明甲亢诱导大鼠心肌肥厚过程中心肌细胞β-catenin/FoxO1表达明显增强,抑制心肌细胞β-catenin/FoxO1改善甲亢诱导大鼠心肌肥厚。【结论】甲亢性心肌肥厚心肌细胞β-catenin/FoxO1活化,抑制β-catenin/FoxO1改善甲状腺激素诱导的心肌细胞肥大。

白花丹素介导sirt1-FOXO1通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究白花丹素通过沉默信息调节因子2相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响。方法120只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527组(sirt1抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527组,每组20只。检测大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,DN组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05)。与DN组相比,白花丹素低、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白显著升高(P<0.05);EX-527组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用。结论白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤。

DNA高甲基化介导FOXO1转录表达下调促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力

目的:探索叉头盒O1(FOXO1)在鼻咽癌(NPC)中异常表达的分子机制,及其对NPC细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用GEO数据集分析NPC中FOXO1表达水平,采用R4.2.1软件进行基因集富集分析。构建FOXO1过表达的NPC细胞系5-8F、HONE1(FOXO1-5-8F、Ctrl-5-8F、FOXO1-HONE1、Ctrl-HONE1)。分别通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期。通过重亚硫酸氢盐基因测序技术进行DNA甲基化测序。结果:FOXO1 mRNA在NPC细胞和组织中表达下调。FOXO1过表达组的细胞增殖能力和细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.05),相同时间内,空白对照组的细胞侵袭数量高于FOXO1过表达组(P<0.05),FOXO1过表达抑制细胞周期(P<0.05)。在NPC组织中,FOXO1 DNA启动子区域存在甲基化位点,其甲基化水平明显高于非癌组织(P<0.05)。结论:NPC中FOXO1基因DNA高甲基化导致其转录下调,由此促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。FOXO1可能是NPC的肿瘤抑制基因。

非O1群非O139群霍乱弧菌血流感染的诊疗及防控2例报告

目的对2例血流感染患者血培养标本分离的弧菌属进行鉴定和药敏试验,分析非O1群非O139群霍乱弧菌(NOVC)的微生物学特性,为霍乱弧菌感染的诊断和防控提供依据。方法通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、API细菌生化反应鉴定卡、VITEK 2 Compact鉴定仪和16S rRNA基因测序鉴定2株弧菌分离株,并进行血清学分型、毒力基因分子检测和耐药表型检测。结果2株菌株均鉴定为霍乱弧菌,血清学试验确定为NOVC,毒力基因ctx AB检测阴性;药敏试验显示1株菌对氨苄西林、阿奇霉素、多西环素和氯霉素敏感,对四环素和复方磺胺甲口恶唑耐药,另一菌株对所有检测抗菌药物均敏感。结论NOVC所致的血流感染在中国少有报道,完善血培养标本分离霍乱弧菌的准确鉴定、分型和耐药表型检测,对诊断、治疗和防控霍乱弧菌感染具有重要价值。

电针对MPTP诱导帕金森病小鼠FoXO1/NLRP3通路介导神经炎症的影响

目的探究电针对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠的作用机制是否与叉头盒蛋白O1(FoXO1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路介导的神经炎症相关。方法将30只小鼠随机分为对照组(Ctrl)、模型组(MPTP)、电针组(EA),每组10只。连续7 d腹腔注射MPTP 30 mg/(kg•d)制备PD小鼠模型。采用旷场实验及爬杆实验观察小鼠行为学;免疫组化观察小鼠中脑黑质α-突触核蛋白(α-syn)表达水平;蛋白免疫印迹测定Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平;ELISA法检测中脑黑质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子表达水平。结果MPTP组小鼠出现显著的行为学障碍,中脑黑质α-syn明显增加(P<0.01),Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01),TNF-α、IL-1β含量明显增加(P<0.01)。EA治疗后能有效改善PD小鼠运动障碍,提高运动平衡及协调能力(P<0.01),减少α-syn的异常聚集(P<0.01),减轻小胶质细胞异常活化,缓解神经炎症(P<0.05)。结论电针可能通过调控FoXO1/NLRP3通路介导的神经炎症,在PD中发挥保护作用。

术前血清FOXO1、FABP4水平与非肌层浸润性膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤切除术后灌注治疗疗效的相关性分析

目的:探讨术前血清叉头框蛋白O1(Fork head box protein O1,FoxO1)和脂肪酸转运蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)与非肌层浸润性膀胱癌(Non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)患者灌注治疗疗效的关系。方法:选取2021年1月至2022年10月期间本院收治的68例NMIBC患者作为研究对象。所有患者进行经尿道膀胱肿瘤切除术(Transurethral resection of bladder tumor,TURBT)治疗,患者术后给予表柔比星膀胱灌注。随访12 m,根据最终的病理结果,将患者分为复发组和未复发组。检测对比两组术前血清FOXO1水平和FABP4水平。分析术前血清FABP4水平与TURBT术后膀胱灌注疗效的相关性及诊断价值。结果:68例患者TURBT术后给予表柔比星膀胱灌注,复发率22.1%。复发组术前血清FOXO1水平与未复发组无明显差异(P>0.05);复发组术前血清FABP4水平显著高于未复发组(P<0.05)。以术前血清FABP4水平预测TURBT术后给予表柔比星膀胱灌注治疗后复发的AUC=0.7052。结论:术前血清高FABP4水平提示TURBT术后给予表柔比星膀胱灌注治疗易复发,其用来预测表柔比星膀胱灌注治疗效果有较高价值。

滋阴明目方通过Akt/FoxO1/FasL通路抑制感光细胞凋亡治疗视网膜色素变性的机制研究

目的观察滋阴明目方对视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)小鼠视网膜组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、叉头框蛋白1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)以及凋亡相关因子配体(Fas ligand,FasL)表达的影响,探讨滋阴明目方抑制感光细胞凋亡的机制。方法将60只rd10小鼠随机分为模型组、滋阴明目方低剂量组[10 g/(kg·d)]、滋阴明目方中剂量组[20 g/(kg·d)]、滋阴明目方高剂量组[40 g/(kg·d)]、维生素A组[5 g/(kg·d)],每组12只;选取12只C57小鼠作为空白对照组(等量生理盐水),每组连续干预28 d。通过眼底照相观察小鼠眼底形态改变;进行视网膜电图检查并记录A波和B波振幅;HE染色观察病理形态学变化并测定外核层厚度;Western blot法检测小鼠视网膜组织p-Akt、FoxO1、FasL、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白(cysteine aspartate-specific protease,Caspase)-3和Caspase-8蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组小鼠视盘苍白、变形,血管萎缩,视网膜电图的A波与B波振幅均降低(P<0.01),视网膜结构模糊,各层界限不清,感光细胞大量丧失,外核层明显变薄(P<0.01),视网膜组织中p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方中、高剂量组及维生素A组小鼠眼底血管较清晰,无视盘苍白表现;视网膜各层结构清晰,细胞排列相对整齐。与模型组、滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方中、高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的B波振幅、视网膜外核层厚度明显升高(P<0.01);与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的A波与B波振幅均明显降低(P<0.01);与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方低、中、高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),FoxO1、FasL和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方高剂量组FoxO1、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01),维生素A组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论滋阴明目方可能通过调控Akt/FoxO1/FasL通路,增强p-Akt表达,抑制FoxO1及下游基因FasL、Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达,从而减少rd10小鼠视网膜细胞的凋亡,保护视网膜结构和功能,延缓RP的进展。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

基于Sirt1/FoxO1通路探讨瑞马唑仑减轻脓毒症小鼠脑损伤的机制研究

目的探究瑞马唑仑对脓毒症引起的脑损伤的影响及机制。方法雄性C57BL/6J小鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、瑞马唑仑组(8 mg/kg)、瑞马唑仑+Sirt1抑制剂(EX527)组(8 mg/kg瑞马唑仑+5 mg/kg EX527)、EX527组,每组38只。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠模型。给予相应的干预后,观察并记录术后7 d内小鼠存活率,采用Morris水迷宫检测小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;手术后24 h,通过伊文斯蓝(EB)渗漏量评估血脑屏障(BBB)通透性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脑组织白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β水平,化学比色法检测脑组织丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,HE染色观察海马组织病理学变化,TUNEL法检测神经元凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测海马组织沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD和CAT活性、Sirt1和胞质NF-κB p65蛋白水平显著下降,逃避潜伏期、脑组织EB含量、IL-6、TNF-α、IL-1β和MDA水平、海马神经元凋亡指数、乙酰化FoxO1(Ac-FoxO1)/FoxO1比值和乙酰化核因子-κB p65(Ac-NF-κB p65)、胞核NF-κB p65蛋白水平显著升高(均P<0.05);与模型组相比,瑞马唑仑组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD和CAT活性、Sirt1和胞质NF-κB p65蛋白水平显著升高,逃避潜伏期、脑组织EB含量、IL-6、TNF-α、IL-1β和MDA水平、海马神经元凋亡指数、Ac-FoxO1/FoxO1比值和Ac-NF-κB p65、胞核NF-κB p65蛋白水平显著降低(均P<0.05);EX527可抑制Sirt1表达,显著减弱瑞马唑仑对SAE小鼠的上述保护作用(均P<0.05)。结论瑞马唑仑可提高脓毒症小鼠存活率,通过维持BBB完整性、抑制神经炎症和氧化应激,减少神经元凋亡,减轻脓毒症引起的脑损伤;其作用机制可能与激活Sirt1/FoxO1通路,抑制NF-κB活化有关。

狼疮性肾炎患者血清TRIM27和FOXO1表达水平及其与自身免疫抗体和疾病活动的相关性分析

目的分析狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者血清三结构域蛋白27(tripartite motif-containing 27,TRIM27)和叉头转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FOXO1)表达水平及其与自身免疫抗体和疾病活动的相关性。方法选取宝鸡市人民医院2020年6月~2021年12月收治的系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者95例,根据是否并发LN将其分为LN组(n=39)和非LN组(n=56),另选取同期20例体检健康者作为对照组;测定三组血清TRIM27,FOXO1水平;对LN组、非LN组血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体进行定性检测。根据肾脏病变活动性指数(activity index,AI)将LN患者分为LN活动组(AI评分≥6分)和LN非活动组(AI评分<6分),比较两组血清TRIM27,FOXO1水平、血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性情况及AI评分;Spearman法分析LN患者血清TRIM27,FOXO1水平与自身免疫抗体阳性率、AI评分的相关性;ROC曲线分析血清TRIM27和FOXO1水平对LN患者的诊断价值。结果LN组血清TRIM27水平高于非LN组、对照组(87.63±5.28pg/ml vs 78.82±5.43pg/ml,42.56±5.19pg/ml),血清FOXO1水平低于非LN组、对照组(348.36±12.36ng/μl vs 367.15±12.19ng/μl,396.28±12.82ng/μl),差异有统计学意义(F=492.090,100.024,均P<0.05);LN组血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率高于非LN组(56.41%vs 35.71%,48.72%vs 28.57%,38.46%vs19.64%),差异均有统计学意义(χ^(2)=3.992,4.010,4.096,均P<0.05)。LN活动组血清TRIM27水平、AI评分高于LN非活动组(92.51±8.92pg/ml vs 85.19±3.46pg/ml,9.50±2.26分vs 3.00±1.15分),血清FOXO1水平低于LN非活动组(341.52±12.78ng/μl vs 351.78±12.15ng/μl),血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率高于LN非活动组(84.62%vs 42.31%,76.92%vs 34.62%,61.54%vs 26.92%),差异均有统计学意义(t=3.701,11.983,2.444;χ^(2)=0.012,0.013,0.036,均P<0.05)。LN患者血清TRIM27水平与血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率和AI评分均呈正相关(r=0.516,0.426,0.458,0.697,均P<0.05),而血清FOXO1水平与之均呈负相关(r=-0.613,-0.572,-0.482,-0.503,均P<0.05)。ROC曲线显示,与血清TRIM27曲线下面积(area under curve,AUC)(AUC=0.822,95%CI:0.740~0.903),FOXO1(AUC=0.804,95%CI:0.716~0.893)单项诊断相比,二者联合检测(AUC=0.899,95%CI:0.840~0.958)对LN的诊断价值较高(Z=1.698,0.079,均P<0.05)。结论LN患者血清TRIM27高表达、FOXO1低表达均与自身免疫抗体阳性率和AI评分相关,对LN患者有一定诊断价值。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

卵巢癌组织中miR-581、FOXO1表达与患者病理特征和预后的关系

目的探讨卵巢癌组织中微小RNA-581(miR-581)、叉头框转录因子O1(FOXO1)的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法选取97例卵巢癌患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-581、FOXO1mRNA表达。采用Pearson相关系数分析卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达的相关性。根据卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达均值分为高、低表达,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-581、FOXO1 mRNA表达卵巢癌患者生存曲线。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-581表达高,FOXO1 mRNA表达低(P均<0.05)。Pearson相关系数分析显示,卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达呈负相关(r=-0.728,P<0.05)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,死亡42例,3年累积生存率为56.70%(55/97)。K-M生存曲线分析显示,miR-581高表达者累积生存率低于miR-581低表达者,FOXO1 mRNA高表达者累积生存率低于FOXO1 mRNA低表达者(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中miR-581高表达和FOXO1 mRNA低表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

虎杖苷促进大鼠骨质疏松性骨折的作用及对SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的探究虎杖苷对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的效果及对沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头状转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法构建骨质疏松性骨折大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、虎杖苷低剂量(30 mg/kg)组、虎杖苷高剂量(60 mg/kg)组、阿仑膦酸钠组(0.5 mg/kg)。另取12只大鼠作为对照组,构建相同部位骨折模型。建模结束后,各组大鼠给予相应药物灌胃,每天1次,连续8周。对大鼠进行骨折愈合程度评分并检测骨折处骨密度(bone mineral density,BMD);运用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中I型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(OC)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;通过苏木素-伊红染色观察大鼠骨组织病理学;通过荧光定量PCR法检测大鼠骨组织中SIRT1、FoxO1信使RNA(mRNA)水平;通过蛋白印迹法检测大鼠骨组织中SIRT1、FoxO1蛋白水平。结果与模型组相比,虎杖苷低、高剂量组大鼠骨组织病理学变化程度依次减轻,骨折愈合程度评分、骨折处BMD、血清中OC、骨组织中SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白水平依次升高,CTX-Ⅰ、TNF-α、IL-1β水平依次降低(P<0.05);阿仑膦酸钠组和虎杖苷高剂量组大鼠骨组织病理学变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论虎杖苷可减轻骨质疏松性骨折大鼠炎症反应,提升BMD,促进骨折愈合,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

抗水产病原非O1/O139霍乱弧菌的中草药筛选及抑菌效果分析

为筛选能有效抑制水产病原非O1/O139霍乱弧菌(non-O1/O139 Vibrio cholerae)生长的中草药,本研究通过水煎法获得黄柏、五倍子等23味中草药的提取物,采用琼脂打孔法测定其对非O1/O139霍乱弧菌的抑制作用,并用试管二倍稀释法测定了抑制效果较强的8种中草药对非O1/O139霍乱弧菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC)。结果表明:五倍子、白芍、黄柏、诃子、山楂、石榴皮、地榆、木瓜等8种草药对非O1/O139霍乱弧菌具有较强的抑制作用,其中非O1/O139霍乱弧菌对五倍子、白芍和黄柏高度敏感,其抑菌圈直径分别为(19.92±1.24)mm、(19.50±0.74)mm和(18.92±2.12)mm。五倍子抑菌和杀菌作用最强,MIC和MBC均为7.81 mg/mL,其次是白芍,MIC为15.63 mg/mL,MBC为31.25 mg/mL。本研究为中草药防治由非O1/O139霍乱弧菌引起的水产动物疾病提供了理论参考。

大黄素调控sirt1/FOXO1通路减轻脑卒中相关性肺炎大鼠的肺损伤

目的观察大黄素对脑卒中相关性肺炎大鼠肺损伤的影响及对沉默信息调节因子(sirt)1/叉头框蛋白(FOX)O1通路的调控作用。方法取SD大鼠75只,分为假手术组、模型组、大黄素(50 g/kg)组、sirt1抑制剂-烟酰胺(NA,100 mg/kg)组、大黄素+NA组(50 g/kg大黄素+100 mg/kg NA)组,每组15只;采用四动脉阻断法制备脑卒中相关肺炎大鼠模型,于造模成功后连续给药7 d,1次/d。末次给药后观察大鼠一般行为;肺功能分析系统检测肺阻力(R)、肺顺应性(Cdyn),肺活量(FVC);血液分析系统检测肺泡灌洗液中淋巴细胞和巨噬细胞数量;流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆儿茶酚胺含量;苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理变化;烘干法检测肺湿/干重;免疫荧光共定位检测肺组织FOXO1磷酸化(p-FOXO1)与Ⅱ型肺泡上皮细胞标记蛋白-肺表面活性蛋白(SP)C阳性共表达水平;免疫组化法检测肺组织sirt1阳性表达水平;Western印迹检测肺组织α亚基上皮钠离子通道(αENaC)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平。结果与假手术组相比,模型组死亡、呼吸急促、喘息及肺泡损伤严重,FVC、Cdyn、sirt1阳性表达水平、p-FOXO1+SPC+表达水平、αENaC蛋白表达明显降低,R、Th17/Treg、儿茶酚胺水平、肺湿重/干重、肺泡灌洗液淋巴细胞和巨噬细胞数量、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,大黄素组无死亡,呼吸急促、喘息及肺泡损伤缓解,FVC、Cdyn、sirt1阳性表达水平、p-FOXO1+SPC+表达水平、αENaC蛋白表达明显升高,R、Th17/Treg、儿茶酚胺水平、肺湿重/干重、肺泡灌洗液淋巴细胞和巨噬细胞数量、IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05),而NA组大鼠死亡增加,呼吸急促、喘息及肺泡损伤进一步加重,FVC、Cdyn、sirt1阳性表达水平、p-FOXO1+SPC+表达水平、αENaC蛋白表达明显降低,R、Th17/Treg、儿茶酚胺水平、肺湿重/干重、肺泡灌洗液淋巴细胞和巨噬细胞数量、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与大黄素组比较,大黄素+NA组FVC、Cdyn、sirt1阳性表达水平、p-FOXO1+SPC+表达水平、αENaC蛋白表达明显降低,R、Th17/Treg、儿茶酚胺水平、肺湿重/干重、肺泡灌洗液淋巴细胞和巨噬细胞数量、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论大黄素可能通过激活sirt1/FOXO1通路,改善SAP大鼠肺损伤。

H_(2)S拮抗HUVEC衰老与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关

[目的]探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头转录因子O1(FOXO1)在H_(2)S拮抗H_(2)O_(2)诱导内皮细胞衰老过程中的作用。[方法]建立内皮细胞衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色在光学显微镜下观察到的蓝染细胞数(即衰老细胞)计算阳性细胞率。采用Western blot检测细胞P21、P53、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、叉头转录因子O1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(ac-FOXO1)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)及过氧化氢酶的蛋白表达水平,采用生物素转换法测定S-巯基化SIRT1的表达,采用活性氧(ROS)检测定量评估细胞内ROS水平。[结果]经100μmol/L H_(2)O_(2)处理可显著提高SA-β-gal染色阳性细胞率和P21、P53、PAI-1的蛋白表达,提示衰老细胞模型成功建立,而100μmol/L NaHS可明显拮抗这一作用,SA-β-gal染色阳性细胞数明显下降(P<0.01),P21、P53、PAI-1的蛋白表达显著降低(P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著增加(P<0.01),ROS水平明显升高(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,NaHS+H_(2)O_(2)组SIRT1、S-巯基化SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著升高((P<0.05或P<0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著下降(P<0.01),ROS水平明显降低(P<0.05)。[结论] H_(2)S可拮抗H_(2)O_(2)诱导的HUVEC衰老,其机制与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关。