oar-miR-143在绵羊卵巢不同发育时期表达研究及靶基因CDK2的验证

本研究前期通过高通量测序鉴定筛选出oar-miR-143在小尾寒羊卵巢不同发育时期发生差异表达并对其靶基因进行预测,通过GO和KEGG分析,推测其可能在卵巢发育过程中起到重要作用。本研究旨在对oar-miR-143预测到的靶基因进行验证,探究其影响和调控卵巢发育的可能分子机制。采用双荧光素酶检测系统,对筛选出的oar-miR-143与其候选靶基因CDK2的作用关系进行验证,首先进行miRNA与其候选靶基因结合位点的预测分析,然后构建含有靶位点的候选靶基因CDK2的野生型载体及突变型表达质粒载体,最后通过与oar-miR-143 minicis共转染293T细胞,进行双荧光素酶相对活性的检测。结果显示,oar-miR-143可抑制野生型CDK2-3’UTR载体的荧光素酶相对活性,而不影响突变型CDK2-3’UTR载体的荧光素酶相对活性,表明oar-miR-143可结合CDK2基因种子序列抑制CDK2的表达,CDK2被证实为oar-miR-143的靶向基因。这些数据将为阐明绵羊卵巢发育的分子调控机制,确定影响小尾寒羊繁殖性能的生物标志物提供了重要理论依据。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

miR-122-5p、miR-143-3p及炎症因子IL-6、IL-10在双酚A和高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义

目的探究双酚A(BPA)暴露对C57BL/6J小鼠肝脏脂质代谢的影响及作用机制。方法8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为单纯普通饲料组(ND组)、普通饲料低剂量BPA组(BPA-50 ND组)、普通饲料高剂量BPA组(BPA-500 ND组)、单纯高脂饲料组(HFD组)、高脂饲料低剂量BPA组(BPA-50 HFD组)、高脂饲料高剂量BPA组(BPA-500 HFD组),低剂量和高剂量BPA组干预剂量分别为50、500μg/(kg·d),连续灌胃12周。通过HE染色分析小鼠肝脏组织变化情况;采用qRT-PCR法和ELISA法检测肝脏中miR-122-5p、miR-143-3p及外周血清白细胞介素(IL)-6和IL-10的表达水平。结果HE染色:ND组小鼠肝小叶结构完整,其余各组小鼠呈现不同程度的脂滴浸润及肝小叶破坏。随着BPA的添加和浓度升高及高脂饮食摄入,外周血IL-6浓度逐渐上升,IL-10浓度逐渐下降。普通饲料组随着BPA的添加及浓度加大,miR-122-5p和miR-143-3p表达水平逐渐降低,但高脂饮食组中随着BPA的添加及浓度加大,二者表达水平呈逐渐上升趋势。Pearson相关分析显示:普通饲料组中miR-122-5p和miR-143-3p表达水平与IL-10浓度呈正相关(P<0.01);高脂饮食组中miR-122-5p表达水平与IL-6浓度呈正相关(P<0.05),miR-143-3p表达水平与IL-10浓度呈负相关(P<0.05)。结论双酚A可通过调控miR-122-5p、miR-143-3p的表达和调节炎症因子IL-6、IL-10的水平诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生及进展。

间充质干细胞来源的外泌体调控miR-143对大鼠颅内动脉瘤形成的影响机制

目的 研究间充质干细胞(MSCs)来源的外泌体调控miR-143对大鼠颅内动脉瘤(IA)形成的影响及机制。方法 原代分离大鼠骨髓MSCs(BMSCs)和脑血管平滑肌细胞(VSMCs)。将VSMCs分为PBS组、外泌体-miR-NC组(ExosomemiR-NC)、Exosome-miR-143组、Exosome-miR-143+GW4869组、过表达对照组(oeNC)、过表达KLF5组(oeKLF5)和oeKLF5+Exosome-miR-143组。超速离心法分离BMSCs来源的外泌体,并用透射电镜和纳米示踪分析鉴定外泌体。PKH26染色检测外泌体转移。miR-143 mimic和miR-NC转染BMSCs或VSMCs。实时荧光定量PCR检测miR-143和KLF5 mRNA的表达,Western blot检测相关蛋白的表达。CCK-8实验、EdU实验、流式细胞术实验、划痕实验和Transwell迁移实验检测VSMCs的活力、增殖、凋亡和迁移能力。双荧光素酶报告基因系统分析miR-143与KLF5的关系。构建大鼠IA模型,研究BMSCs来源的外泌体miR-143在体内对IA形成的影响。结果 与细胞裂解液组相比,miR-143在BMSCs外泌体中表达显著增加(P<0.01),且可通过外泌体转移到VSMCs中。与Exosome-miR-NC组相比,Exosome-miR-143组VSMCs的活力增加(P<0.01),而EdU阳性细胞数、S期细胞数、凋亡和迁移数显著减少(P<0.01);与Exosome-miR-143组相比,Exosome-miR-143+GW4869组细胞活力降低(P<0.01),而EdU阳性细胞数、S期细胞数、凋亡和迁移数明显增加(P<0.01)。与miR-NC或Control组相比,miR-143、Exosome-miR-143和ExosomemiR-NC组WT-KLF5的荧光素酶报告基因活性及KLF5的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),而MUT-KLF5的荧光素酶报告基因活性不变(P>0.05)。与oeNC组相比,oeKLF5组细胞活力显著降低(P<0.01),EdU阳性细胞数、S期细胞数、凋亡和迁移数明显增加(P<0.01);与oeKLF5组相比,oeKLF5+Exosome-miR-143组细胞活力明显增加(P<0.01),而EdU阳性细胞数、S期细胞数、凋亡和迁移数明显减少(P<0.01)。体内实验结果与细胞实验相一致。结论 BMSCs来源的外泌体miR-143通过靶向KLF5抑制大鼠IA的形成。

灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ_(25~35)诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)_(25~35)诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用Aβ_(25~35)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,anti-miR-NC、anti-miR-143-3p分别转染至PC12细胞后进行Aβ_(25~35)处理24 h,miR-NC、miR-143-3p mimics分别转染至PC12细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ_(25~35)处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量。结果 Aβ_(25~35)作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染anti-miR-143-3p后Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞活力和SOD、CAT活性明显升高,细胞凋亡率及MDA水平明显降低(P<0.05);转染miR-143-3p mimics可明显逆转灵芝提取物对Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论 灵芝提取物可通过抑制miR-143-3p表达减轻Aβ_(25~35)诱导的PC12细胞损伤。

慢性牙周炎患者龈沟液miR-143、miR-375表达及与疾病严重程度的关系

目的探讨慢性牙周炎患者龈沟液微小核糖核酸(miR)-143、miR-375表达及与疾病严重程度的关系。方法选取2022年1月至2023年7月在呼和浩特市第一医院确诊的135例慢性牙周炎患者作为研究组,根据疾病严重程度分为轻度组(n=58)、中度组(n=37)和重度组(n=40)。另选同期在该院体检的健康志愿者127例作为对照组。实时荧光定量PCR检测miR-143、miR-375相对表达水平,酶联免疫吸附试验试剂盒测定龈沟液炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)]水平。Pearson相关性分析龈沟液miR-143、miR-375表达与临床指标及炎症因子水平的相关性。结果对照组与研究组年龄、性别、刷牙次数、吸烟占比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,研究组龈沟液miR-143相对表达水平显著升高,miR-375相对表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与中度组比较,重度组出血指数(BI)、牙龈指数(GI)、牙周袋探针深度(PD)、附着丧失(AL)显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与中度组比较,重度组IL-6、TNF-α、CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性牙周炎患者龈沟液miR-143相对表达水平与BI、GI、PD、AL及龈沟液CRP、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05);龈沟液miR-375相对表达水平与BI、GI、PD、AL及龈沟液CRP、TNF-α、IL-6水平均呈负相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者龈沟液miR-143、miR-375表达可评估患者疾病严重程度,对慢性牙周炎病情判断具有参考价值。

microRNA-143-3p在脑胶质瘤中的表达及其作用

目的通过检测miR-143-3p(microRNA,miR)在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达差异,探讨其表达水平与脑胶质瘤的临床病理特征之间的相关性及其对脑胶质瘤生物学行为的潜在影响。方法收集2021年10月至2023年10月在河北医科大学第四医院神经外科手术切除的55例神经胶质瘤组织与15例来源于脑外伤及脑出血患者的正常脑组织。通过荧光定量逆转录聚合酶链反应检测miR-143-3p在胶质瘤组织与正常脑组织及人星形胶质细胞与胶质瘤细胞系(T98、U87、U251)中的表达水平。通过划痕实验、Transwell实验、细胞计数试剂盒8实验及流式细胞术检测过表达miR-143-3p后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期及细胞凋亡等功能的影响。结果在脑胶质瘤组织中,miR-143-3p的表达水平显著低于正常脑组织(P<0.0001)。miR-143-3p的低表达与胶质瘤的分化程度密切相关(P<0.001),而与年龄、性别、KPS评分等其他病理特征无显著关联(P>0.05)。miR-143-3p在T98、U87、U251胶质瘤细胞系中的表达显著低于人星形胶质细胞(P<0.01)。miR-143-3p的过表达显著抑制了肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01),肿瘤细胞周期在G_(0)/G_(1)期阻滞,其增殖指数显著下降、细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论miR-143-3p在神经胶质瘤组织中低表达并与胶质瘤的恶性程度有一定关系,miR-143-3p可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡。

膀胱癌病人血清miR-143-3p、ATG2B水平与临床病理及预后生存的关系

目的探讨miR-143-3p、ATG2B在膀胱癌病人血清中的表达及其与临床病理和病人预后的关系。方法2017年1月~2019年1月在我院进行膀胱癌根治术的病人88例为研究组,本院行健康体检的志愿者80例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测病人术前、术后4周静脉血miR-143-3p、ATG2B水平;pearson分析二者的相关性。通过受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-143-3p、ATG2B对膀胱癌的预测价值。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;通过多因素Cox回归分析膀胱癌根治术病人预后的影响因素。结果miR-143-3p在膀胱癌病人血清中表达水平较对照组降低(0.68±0.12 vs.0.87±0.26),ATG2B表达水平升高(1.02±0.30 vs.0.61±0.18),差异有统计学意义(P<0.05);病人术后血清中miR-143-3p水平较术前升高(0.77±0.23 vs.0.68±0.12),ATG2B水平较术前降低(0.85±0.26 vs.1.02±0.30),差异有统计学意义(P<0.05);研究组miR-143-3p与ATG2B表达呈负相关(r=-0.454,r=-0.407,P<0.01);miR-143-3p对膀胱癌的诊断AUC为0.846(95%CI:0.783~0.897),敏感度、特异度分别为79.55%、78.75%;ATG2B对膀胱癌诊断AUC为0.883(95%CI:0.824~0.927),敏感度、特异度分别为78.41%、81.25%;二者联合诊断膀胱癌的AUC为0.939(95%CI:0.891~0.970),敏感度、特异度分别为87.50%、88.75%。miR-143-3p低表达组3年生存率(34.88%,15/43)低于高表达组(77.78%,35/45),ATG2B高表达组3年生存率(40.91%,18/44)低于低表达组(72.73%,32/44),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=18.055,8.658,P=0.000,0.003)。多因素Cox回归分析表明,淋巴结转移、远处转移、肿瘤病理分级、TNM分期、miR-143-3p、ATG2B是膀胱癌病人生存状况的影响因素。结论膀胱癌病人血清中miR-143-3p呈低表达,ATG2B呈高表达,二者表达与膀胱癌病人临床病理特征和预后密切相关。

老年性白内障患者泪液中miR-223和miR-143-3p水平表达与术后干眼症的相关性研究

目的探究老年性白内障患者术后干眼与泪液中miR-223,miR-143-3p水平表达的相关性。方法选取2022年5月~2023年2月于贵港东晖医院眼科行白内障术的92例老年性白内障患者作为研究对象,根据术后7天内有无发生干眼将其分为干眼症组(n=42)和无干眼症组(n=50),另选取同期体检的92例健康者作为健康对照组。采用Pearson法分析泪液miR-223,miR-143-3p表达水平与干眼诊断指标:泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、角膜荧光素染色(corneal fluorescein staining,FL)评分和泪液分泌试验(schirmers test,SIt)的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响白内障术后干眼发生的相关因素;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析泪液miR-223和miR-143-3p对白内障术后干眼的预测价值。结果无干眼症组患者BUT(12.27±1.69s)及SIt(9.17±1.66mm)高于干眼症组(8.95±1.02s,4.36±0.97mm),FL(0.74±0.11分)则低于干眼症组(2.52±0.37分),差异具有统计学意义(t=11.136,16.546,32.386,均P<0.05)。干眼症组患者泪液miR-223(0.87±0.08)表达水平低于健康对照组(1.02±0.03)和无干眼症组(0.92±0.13),泪液miR-143-3p(1.37±0.32)表达水平高于健康对照组和无干眼症组(1.01±0.02,1.15±0.26),差异具有统计学意义(t=15.772,2.170;10.793,3.638,均P<0.05)。泪液中miR-223表达水平与BUT,SIt呈正相关(r=0.587,0.503,均P<0.001),与FL呈负相关(r=-0.442,P<0.001),miR-143-3p与BUT,SIt呈负相关(r=-0.714,-0.549,均P<0.001),与FL呈正相关(r=0.667,P<0.001)。干眼症组有角结膜疾病史、手术切口长度≥3 mm的患者所占比例高于无干眼症组(χ2=12.583,6.505,均P<0.05),且干眼症组患者泪液miR-223表达水平低于无干眼症组,miR-143-3p表达水平则高于无干眼症组,差异具有统计学意义(t=2.170,3.638,均P<0.05)。角结膜疾病史(OR=1.982)、手术切口长度(OR=2.036)及miR-143-3p(OR=1.653)为白内障患者术后发生干眼的危险因素,miR-223(OR=0.574)则为保护因素(P<0.05);泪液miR-223和miR-143-3p单独检测预测白内障术后干眼发生的曲线下面积(area under the cure,AUC)分别为0.692,0.719,而二者联合检测的AUC为0.880,二者联合检测优于miR-223和miR-143-3p各自单独检测(Z=3.869,3.810,均P<0.001)。结论老年性白内障术后干眼的发生与泪液中miR-223和miR-143-3p表达水平有关。

外周血miRNA-126与miRNA-143表达对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值

目的:探讨外周血微小RNA-126(miRNA-126)、miRNA-143表达水平对颅内动脉瘤介入术后患者复发的预测价值。方法:选取113例行介入栓塞术治疗的颅内动脉瘤患者为研究对象,根据术后不同Raymond分级分为RaymondⅠ级组(n=88)、RaymondⅡ级组(n=13)和RaymondⅢ组(n=12);根据不同预后分为复发组(n=19)和未复发组(n=94)。比较不同分级患者、不同预后患者外周血miRNA-126、miRNA-143表达水平,分析其与Raymond分级的相关性及其对颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的预测价值。结果:与RaymondⅠ级组相比,RaymondⅡ级组和RaymondⅢ级组患者miRNA-126表达水平均升高(P<0.05),miRNA-143表达水平均降低(P<0.05)。相关性分析显示,miRNA-126水平与Raymond分级正相关(r=0.364,P<0.05),miRNA-143水平与Raymond分级负相关(r=-0.347,P<0.05)。复发组患者外周血miRNA-126表达水平高于未复发组(P<0.05),miRNA-143表达水平低于未复发组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-126、miR-143及其联合预测颅内动脉瘤患者介入栓塞术后复发的曲线下面积分别为0.767、0.826、0.968,联合检测预测的价值高于两者单独预测(P<0.05)。结论:外周血miRNA-126、miRNA-143联合检测能提高颅内动脉瘤介入术后复发的预测价值。

血清miR-486、miR-143表达水平与特发性肺纤维化患者预后的相关性

目的探究血清微小RNA-486(miR-486)、微小RNA-143(miR-143)与特发性肺纤维化(IPF)患者预后的关系。方法收集2019年10月至2021年10月本院收治的114例IPF患者(IPF组),体检健康人员110例(对照组)。检测血清miR-486、miR-143表达;收集临床资料、血气和肺功能指标、肺高分辨率CT(HRCT)评分和临床-影像-生理(CRP)评分;随访2年并评判预后。分析miR-486、miR-143与吸烟史、血气和肺功能指标、HRCT评分、CRP评分的相关性,影响预后不良的因素,miR-486、miR-143对发生预后不良的预测价值。结果IPF组miR-486显著高于对照组,miR-143显著低于对照组(P<0.05);预后不良组有吸烟史患者比例、HRCT评分、CRP评分、miR-486显著高于预后良好组,血氧饱和度(SaO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))、第一秒用力呼气量占预计值百分比(FEV 1%pred)、最大通气量占预计值百分比(MVV%pred)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(D LCO%pred)、miR-143显著低于预后良好组(P<0.05);IPF患者miR-486与miR-143呈负相关,二者均与吸烟史、血气和肺功能指标、HRCT评分、CRP评分存在相关性(P<0.05);吸烟史、HRCT评分、CRP评分、miR-486是IPF患者发生预后不良的独立危险因素,FEV 1%pred、MVV%pred、D LCO%pred、miR-143是保护因素(P<0.05);miR-486和miR-143联合对IPF患者发生预后不良的预测价值大于单独预测。结论IPF患者血清miR-486表达升高,miR-143表达降低,二者可用于评估IPF预后。

雌激素介导circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊成肌细胞增殖

【背景】雌激素是雌性哺乳动物卵巢组织分泌的主要激素,其对肌肉的生长发育起着重要的调控作用,circRNA已被发现参与多种与肌肉生长发育相关的信号通路。【目的】根据团队前期卵巢摘除苏尼特羊与假手术苏尼特羊全转录组整合分析发现circZNF423可作为内源性竞争RNA(ceRNA)调控oar-miR-541-3p/CALM3的表达。为进一步探究雌激素在绵羊肌肉生长中分子机制,通过体外培养绵羊原代成肌细胞,检测成肌细胞中外源添加雌激素介导circZNF423调控oar-miR-541-3p/CALM3对成肌细胞增殖的影响,为进一步研究雌激素及circRNA在绵羊生长发育性状中的作用机制提供理论依据,为绵羊分子设计育种提供新的研究思路。【方法】采集绵羊背最长肌组织,对绵羊原代成肌细胞进行体外分离培养,通过免疫荧光染色、RNA原位杂交(FISH)和核质分离试验确定circZNF423在成肌细胞中的表达位置;RNAhybrid在线软件预测circZNF423、oar-miR-541-3p和CALM3存在结合关系,通过双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验验证circZNF423和oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p和CALM3结合情况;体外构建合成circZNF423过表达或干扰载体、oar-miR-541-3p的模拟物(mimics)或抑制剂(inhibitor)、CALM3过表达或干扰载体,在绵羊原代成肌细胞中进行转染,利用RT-qPCR、Western blot、EdU和CCK-8检测绵羊成肌细胞增殖标志因子的表达和成肌细胞增殖情况;为进一步明确雌激素在绵羊肌肉生长发育中的作用,体外添加不同浓度的外源性雌二醇(E2),利用RT-qPCR、Western blot、CCK-8和EdU检测绵羊肌细胞增殖标志基因的表达变化。【结果】免疫荧光染色显示分离的原代细胞为绵羊成肌细胞,可用于后续功能验证;RNA原位杂交和核质分离试验表明,circZNF423主要在绵羊成肌细胞质中表达。RNAhybrid、双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验结果表明,circZNF423与oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p与CALM33’UTR之间均存在显著的结合关系;抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后,绵羊成肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7 mRNA与蛋白表达水平一致,均显著上调(P<0.05或P<0.01);EdU和CCK8结果表明,抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后,绵羊成肌细胞增殖率显著上升(P<0.05);过表达circZNF423/CALM3或抑制oar-miR-541-3p后则相反。添加不同浓度外源雌二醇(E2)后,在浓度为10 nmol·L^(-1)时绵羊成肌细胞增殖标志因子表达最高,显著高于1和100 nmol·L^(-1)的添加浓度(P<0.05或P<0.01);绵羊肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7mRNA和蛋白表达水平一致,均显著上调,circZNF423和CALM3的表达量显著降低,oar-miR-541-3p的表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);EdU和CCK8结果显示,体外添加雌二醇后绵羊成肌细胞增殖率显著升高(P<0.05)。【结论】绵羊成肌细胞中circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p和CALM3的结合及表达,添加外源雌激素可通过抑制circZNF423/oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊肌肉细胞的增殖。这些结果为揭示雌激素及circZNF423在绵羊骨骼肌发育性状中的分子机制提供理论基础。

多囊卵巢综合征患者血清miR-23a、miR-143表达及与胰岛素抵抗的相关性分析

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-23a(miR-23a)、微小RNA-143(miR-143)表达及其与胰岛素抵抗的相关性分析。方法:选取2022年1月至2023年6月枣庄市妇幼保健院收治的68例PCOS患者(PCOS组)和50例健康体检女性(对照组)为研究对象,均采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-23a、miR-143表达,PCOS患者根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为胰岛素抵抗组(HOMA-IR≥2.69)40例和非胰岛素抵抗组(HOMA-IR<2.69)28例,比较各组血清miR-23a、miR-143表达水平,并采用Pearson相关分析血清miR-23a、miR-143表达与胰岛素抵抗的相关性。结果:PCOS组血清miR-23a、miR-143表达水平均高于对照组(P<0.05)。胰岛素抵抗组PCOS患者血清miR-23a、miR-143表达水平均高于非胰岛素抵抗组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,PCOS患者血清miR-23a、miR-143表达水平与HOMA-IR均呈正相关(P<0.05)。结论:PCOS患者血清miR-23a、miR-143均呈异常高表达,且表达水平与HOMA-IR有关,可作为PCOS病情评估的有效生物学标志物。

脂肪酸代谢紊乱通过上调ZNF143促进胰腺癌进展的机制研究

目的·通过肿瘤转录组学筛选,明确在胰腺癌中因脂肪酸代谢紊乱引起上调的关键基因,并探究其中的锌指蛋白143(zinc finger protein 143,ZNF143)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法·运用R语言整合Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中GSE164760数据集、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中179例胰腺癌组织和4例癌旁组织及GTEx(Genotype-Tissue Expression)数据库中167例胰腺正常组织的转录组数据;筛选分析胰腺癌中脂肪酸紊乱可能会诱导表达的潜在差异基因;qRT-PCR检测使用棕榈酸(palmitic acid,PA)或油酸(oleic acid,OA)处理24 h后胰腺癌细胞中筛选基因的mRNA水平变化。按照筛选基因ZNF143表达水平的中位数,将TCGA数据库中胰腺癌患者分为高低表达2组,并将2组分析所得的差异基因进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路和基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析;通过细胞划痕实验、侵袭实验检测使用siRNA敲低ZNF143对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的影响;使用蛋白质印迹法(Western blotting)检测敲低ZNF143对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及Wnt/β-catenin通路的影响。结果·分析了胰腺癌和肝癌中脂质代谢紊乱上调的关键基因,其中ZNF143是胰腺癌脂肪酸蓄积诱导的潜在基因之一;体外实验验证棕榈酸或油酸处理胰腺癌细胞后,ZNF143的mRNA水平均明显上调;KEGG和GO富集分析均显示ZNF143相关差异基因主要富集于细胞黏附相关通路;功能实验表明,转染ZNF143 siRNA的胰腺癌细胞迁移与侵袭能力均被下调,且EMT相关蛋白的表达也降低,可能与Wnt/β-catenin通路激活有关。结论·脂肪酸蓄积上调ZNF143在胰腺癌细胞中的mRNA表达含量,且ZNF143可能通过激活Wnt/β-catenin通路介导EMT,进而增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

miR-210、miR-143在支气管哮喘患儿血清中的表达及与气道炎性反应的关系

目的分析miR-210、miR-143在支气管哮喘患儿血清中的表达及与气道炎性反应的关系。方法选取2020年1月—2022年7月廊坊市人民医院儿科收治的支气管哮喘患儿186例为支气管哮喘组,另收集同期体检健康儿童100例为健康对照组,qRT-PCR法检测血清miR-210、miR-143水平,Pearson法分析支气管哮喘患儿miR-210、miR-143水平与TNF-α、IL-4、IL-6、EOS、FeNO、IL-10、IL-12、IgE、IFN-γ间相关性;Logistic回归分析儿童发生支气管哮喘的影响因素。结果支气管哮喘患儿血清miR-210水平显著高于健康儿童,miR-143水平显著低于健康儿童(t=8.317,9.545,P均<0.001),轻度、中度、重度哮喘患儿血清miR-210水平依次升高,miR-143水平依次降低(F=7.566,19.914,P均<0.001)。支气管哮喘患儿FVC、FEV_1、VE、PEF、IL-10、IL-12、IgE、IFN-γ水平显著低于健康儿童,Raw、IL-4、IL-6、TNF-α、EOS、FeNO水平显著高于健康儿童(P<0.05)。Pearson法分析表明,血清miR-210与miR-143水平呈负相关(r=-0.362,P<0.001),血清miR-210水平与TNF-α、IL-4、IL-6、EOS、FeNO呈正相关(r=0.326、0.359、0.315、0.334、0.312,P均<0.001),与IL-10、IL-12、IgE、IFN-γ呈负相关(r=-0.406、-0.303、-0.317、-0.453,P均<0.001);miR-143水平与TNF-α、IL-4、IL-6、EOS、FeNO呈负相关(r=-0.336、-0.324,-0.323、-0.424、-0.397,P均<0.001),与IL-10、IL-12、IgE、IFN-γ呈正相关(0.338、0.338、0.327、0.467,P均<0.001);Logistic回归分析结果表明,miR-210、TNF-α、IL-4、IL-6、EOS、FeNO升高均为儿童发生支气管哮喘的危险因素[OR(95%CI)=1.025(1.015~1.035)、1.034(1.020~1.048)、1.136(1.059~1.219)、1.243(1.147~1.347)、1.349(1.151~1.581)、1.408(1.178~1.683)],而miR-143、IL-10、IL-12、IgE、IFN-γ升高均为其保护因素[OR(95%CI)=0.857(0.788~0.932)、0.932(0.900~0.965)、0.473(0.312~0.718)、0.671(0.549~0.820)、0.583(0.437~0.778)]。结论支气管哮喘患儿血清miR-210水平升高,miR-143水平降低,与患儿气道炎性反应的进展具有密切关系。

蛇床子素下调miR-143-3p抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的 观察蛇床子素对小鼠肺成纤维细胞(MLF)增殖和胶原合成的影响并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养MLF,将其分为对照组、TGF-β1组、低剂量蛇床子素组、中剂量蛇床子素组、高剂量蛇床子素组、anti-miR-NC组、anti-miR-143-3p组、高剂量蛇床子素+miR-NC组、高剂量蛇床子素+miR-143-3p组;RTqPCR检测微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)的表达水平;MTT检测细胞活力;Western blotting检测蛋白表达。结果 与对照组比较,TGF-β1组MLF的miR-143-3p表达水平、增殖和胶原合成能力显著升高,细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达水平显著升高(P <0.05);与TGF-β1组比较,中、高剂量蛇床子素组MLF的miR-143-3p表达水平、增殖和胶原合成能力显著降低,CyclinD1、PCNA、ColⅠ和ColⅢ表达水平显著降低(P <0.05);下调miR-143-3p显著降低MLF的增殖和胶原合成能力,CyclinD1、PCNA、ColⅠ和ColⅢ表达水平显著降低(P <0.05);上调miR-143-3p逆转了蛇床子素对MLF增殖和胶原合成的影响(P <0.05)。结论 蛇床子素可能通过下调miR-143-3p表达抑制小鼠MLF的增殖和胶原合成。

miR-143-3p靶向调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的研究miR-143-3p对LPS+ATP诱导HCT-116细胞焦亡的影响。方法双荧光素酶检测miR-143-3p与TLR2基因靶向关系。转染miR-143-3p mimic后建立焦亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡,生化法检测Caspase-1活性及LDH含量;ELISA法检测IL-1β、IL-18含量。q-PCR检测NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA水平;免疫荧光检测NLRP3、ASC蛋白表达;Western blot检测TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1蛋白表达。结果双荧光素酶检测发现miR-143-3p靶向调控TLR2表达。miR-143-3p mimic组和si TLR2组较模型组细胞中NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA表达及TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低;Caspase-1活性及LDH、IL-1β、IL-18含量降低。结论miR-143-3p靶向TLR2基因调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路调控溃疡性结肠炎细胞焦亡。

miR-143-5p和miR-335-5p在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的分析微小核糖核酸-143-5p(miR-143-5p)和miR-335-5p在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法选择2018年7月—2020年6月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院肿瘤妇科二科手术治疗的宫颈癌患者120例,随访期间失访5例,根据随访结果将患者分为预后良好组78例和预后不良组37例;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测宫颈癌组织及其癌旁组织中miR-143-5p、miR-335-5p的相对表达量;多因素Logistic回归分析影响宫颈癌患者预后的因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-143-5p、miR-335-5p预测宫颈癌患者预后的价值。结果癌组织中miR-143-5p、miR-335-5p水平低于癌旁组织(t/P=22.710/<0.001、22.950/<0.001);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者癌组织中miR-143-5p、miR-335-5p水平低于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、无淋巴结转移的患者(miR-143-5p:χ^(2)/P=3.041/0.003、3.573/0.001、3.443/0.001;miR-335-5p:χ^(2)/P=5.769/<0.001、2.890/0.005、2.738/0.007);预后不良组癌组织miR-143-5p、miR-335-5p水平低于预后良好组(t/P=3.718/<0.001、3.150/0.002);预后良好组患者FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比例高于预后不良组(χ^(2)/P=18.261/<0.001、9.635/0.002);FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期是影响宫颈癌患者预后的危险因素[OR(95%CI)=4.105(1.484~11.353)],而miR-143-5p高、miR-335-5p高是其保护因素[OR(95%CI)=0.196(0.084~0.458)、0.220(0.088~0.549)];癌组织miR-143-5p、miR-335-5p及二者联合预测宫颈癌患者预后的AUC分别为0.743、0.726、0.879,二者联合优于各自单独预测价值(Z/P=2.346/0.019、2.601/0.009)。结论miR-143-5p、miR-335-5p在宫颈癌组织中呈下调表达,二者联合预测宫颈癌患者预后的价值较高。

黄芩汤调控miR-143/TLR2/NF-κB/NLRP3通路对湿热型溃疡性结肠炎大鼠细胞焦亡的影响

目的 探究黄芩汤调控miR-143/TLR2/NF-κB/NLRP3通路对湿热型溃疡性结肠炎大鼠细胞焦亡的影响。方法 采用“DSS+复合因素”对大鼠进行溃疡性结肠炎湿热证模型的构建,实验分为正常组、模型组、黄芩汤低剂量组、黄芩汤中剂量组、黄芩汤高剂量组。HE染色观察病理学改变,ELISA检测血清IL-1β和IL-18因子表达,Western blot检测TLR2、NF-κB(p-p65)、GSDMD蛋白表达水平,qPCR检测结肠组织miR-143、TLR2、NLRP3、NF-κB、Caspase-1和GSDMD mRNA水平。结果 与正常组相比,模型组结肠病理组织有所损伤,IL-1β、IL-18炎症因子水平及TLR2、p-p65、GSDMD蛋白表达量显著升高,NLRP3、GSDMD、TLR2、NF-κB、caspase-1 mRNA水平明显升高,miR-143明显降低;与模型相比,中高剂量黄芩汤组结肠病理组织损伤有所改善,其中低剂量组血清IL-1β水平、中高剂量组血清中IL-1β和IL-18水平明显降低。低剂量组p-p65蛋白表达量明显降低,中高剂量组TLR2、p-p65和GSDMD蛋白表达量明显下降。低剂量组NF-κB和NLRP3 mRNA表达量明显降低;中剂量组TLR2、NF-κB、caspase-1、GSDMD mRNA明显降低;高剂量组miR-143显著升高,TLR2、NF-κB、GSDMD、NLRP3 mRNA显著降低。结论 黄芩汤可能是通过调控miR-143/TLR2/NF-κB/NLRP3通路抑制湿热型溃疡性结肠炎大鼠细胞焦亡,从而发挥对湿热型UC作用。

卵巢上皮性癌组织miR-143-3p、TIMELESS mRNA表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨卵巢上皮性癌(EOC)组织微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)、永恒昼夜节律调节器(TIME⁃LESS)mRNA表达与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取EOC患者106例,术中收集EOC组织及对应癌旁组织,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-143-3p、TIMELESS mRNA。通过TargetScan、StarBase、miRWalk等在线数据库预测miR-143-3p与TIMELESS的结合位点,Pearson相关法分析miR-143-3p与TIMELESS mRNA表达的相关性。分析miR-143-3p、TIMELESS mRNA表达与EOC患者临床病理特征的关系。对EOC患者随访3年,统计累积生存率,根据miR-143-3p、TIMELESS mRNA相对表达量均值,将患者分为miR-143-3p、TIMELESS mRNA高/低表达者,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,进行生存分析;多因素Cox回归分析miR-143-3p、TIMELESS表达对EOC患者预后的影响。结果与癌旁组织比较,EOC组织中miR-143-3p相对表达量低,TIMELESS mRNA相对表达量高(P均<0.05)。miR-143-3p与TIMELESS在3′-非翻译区1453~1460处存在结合位点。EOC组织中miR-143-3p表达与TIMELESS mRNA表达呈负相关(r=-0.748,P<0.05)。miR-143-3p、TIMELESS mRNA表达与肿瘤国际妇产科联盟(FIGO)分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移有关(P均<0.05)。随访3年,106例EOC患者3年累积生存率为69.81%(74/106)。miR-143-3p高表达者3年累积生存率高于miR-143-3p低表达者(P<0.05),TIMELESS mRNA高表达者3年累积生存率低于TIMELESS mRNA低表达者(P<0.05)。影响EOC患者预后的独立危险因素为FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、淋巴结转移、远处转移、TIMELESS mRNA≥1.11(P均<0.05),独立保护因素为miR-143-3p≥0.97(P<0.05)。结论EOC组织miR-143-3p低表达、TIMELESS mRNA高表达,二者表达变化与EOC的FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移和预后密切相关。