鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53和Bcl-2表达影响的实验研究

目的:研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53和bcl-2表达的影响。方法:将实验大鼠随机分为4组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行含药血清作用的Western-blot蛋白表达分析即p53蛋白表达和Bcl-2蛋白的表达。结果:鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组p53蛋白表达增强,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组p53蛋白表达增强,三者无明显差异(P>0.05)。从数据上看,含药大鼠血清对p53蛋白表达增强的作用,中西药结合用药组最好,鳖甲煎丸灌胃组次之,最后是西药组。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组Bcl-2蛋白表达减弱,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组Bcl-2蛋白表达减弱,三者无明显差异(P>0.05)。从数据上看,含药大鼠血清对Bcl-2蛋白表达减弱的作用,中西药结合用药组最好,鳖甲煎丸灌胃组次之,最后是西药组。结论:鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53蛋白表达有增强作用,对Bcl-2蛋白表达有减弱作用。

阪崎肠杆菌培养蛋白对乳鼠肝组织及HepG2肝细胞损伤的实验研究

目的分析阪崎肠杆菌培养产物中粗提蛋白质对乳鼠肝组织的损伤作用,探索阪崎肠杆菌新的致病因子。方法采用酪蛋白氨基酸酵母浸膏培养液(CAYE)培养基培养阪崎肠杆菌,饱合硫酸铵沉淀法粗提培养上清;纯化后的上清蛋白质以0.1μg/100μL浓度给予乳鼠灌胃,无菌取肝组织,制作病理切片并染色,镜下分析肝组织病理变化特征;以相同浓度的粗提蛋白质体外侵袭HepG2肝细胞,观察细胞生长变化情况。结果阪崎肠杆菌经隔夜培养,从其培养上清中纯化得到分子量为69kDa蛋白质,以0.1μg/100μL浓度对乳鼠灌胃,病理切片分析表明乳鼠肝组织呈现点状坏死特征;侵袭的HepG2肝细胞形态发生变化,并伴有大量细胞死亡。结论从阪崎肠杆菌培养上清中分离纯化的蛋白质,在体内和体外条件下均可对肝细胞产生损伤,推测该蛋白质具生物活性,在一定条件下能够对机体产生损伤,可能在阪崎肠杆菌致病过程中起到重要作用。

脂多糖干预ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:肥胖是牙周炎及机体其他疾病的易感因素,因肥胖与瘦素密切相关,目前尚无通过瘦素基因突变小鼠骨髓间充质干细胞的分化情况探索相关机制的研究。目的:通过研究ob/ob遗传性肥胖小鼠骨髓间充质干细胞在脂多糖刺激下的成骨能力及成骨相关分子的表达,从分子及细胞水平探讨肥胖与成骨能力的相关机制。方法:选用8周龄雄性肥胖ob/ob小鼠、8周龄雄性C57小鼠(由中国医学科学院实验动物研究所提供)各8只,取两组小鼠双侧股骨,采用全骨髓法分离培养纯化得到ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞及C57小鼠骨髓间充质干细胞,加入含有100μg/L脂多糖的成骨诱导液进行成骨诱导分化,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测观察比较两组小鼠骨髓间充质干细胞成骨能力。采用RT-PCR检测两组小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn、Nf-κb mRNA表达水平。结果与结论:(1)成骨诱导1周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶染色减弱,碱性磷酸酶活性显著降低(P <0.01);成骨诱导液中添加脂多糖后,碱性磷酸酶活性较未添加脂多糖组显著下降(P <0.01),ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性亦较C57小鼠骨髓间充质干细胞显著降低(P <0.05);(2)成骨诱导2周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞茜素红染成橘红色的矿化结节减少,而成骨诱导液中添加脂多糖后,两组骨髓间充质干细胞均未见矿化结节形成;(3)成骨诱导后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn mR NA表达降低(P <0.05);诱导液中加入脂多糖后,Alp、Runx2、Ocn表达较未添加脂多糖组均显著减少(P <0.05),且在ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Ocn、Runx2表达较C57小鼠骨髓间充质干细胞明显降低(P <0.05);(4)结果表明,瘦素缺乏的肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化发生障碍。在低浓度脂多糖刺激下,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化能力较C57小鼠骨髓间充质干细胞下降更明显。

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖的影响。[方法]将实验大鼠随机分为四组，生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血，分离血清。将同组大鼠血清混匀，冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好，加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清，培养后取材制作标本。对标本进行OD值测定，计算细胞增殖抑制率。[结果]鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组血清作用人肝癌HEPG2细胞48H后与灌服生理盐水组相比较细胞增殖抑制率有明显差异，差别有统计学意义（P〈0．05）。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组细胞增殖抑制率三者无明显差异（P〉0．05）。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖有抑制作用。

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响。[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析。[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用。

MiR-122在AldoA介导的ob/ob小鼠肝脏代谢中的作用研究

本实验室前期研究发现,2型糖尿病动物模型ob/ob小鼠血清中miR-122的含量较正常C57BL/6小鼠显著升高.本文进一步研究肝脏特异性miR-122及其靶蛋白AldoA(果糖1,6-二磷酸醛缩酶A)在ob/ob小鼠肝脏代谢中的作用.首先,经qRT-PCR技术检测发现ob/ob小鼠肝脏miR-122水平较C57BL/6小鼠显著下降,而Western blotting分析发现ob/ob小鼠肝脏其靶蛋白AldoA的表达水平显著上升.进一步以miR-122分子转染293T细胞后收集其分泌的微囊泡(microvesicles,MVs),经qRT-PCR检测确认后采用特异性荧光染料DiI-C18标记MVs,以不同剂量尾静脉注射BALB/c小鼠体内,不同时间点取肝组织做冰冻切片.在荧光显微镜下观察证实,包裹有miR-122的MVs通过循环系统进入肝脏,同时qRT-PCR定量分析发现肝组织中miR-122含量显著升高,而蛋白质印迹检测发现其靶蛋白AldoA在肝脏中表达显著下降.AldoA主要催化糖酵解途径中果糖1,6-二磷酸和磷酸二羟丙酮及甘油醛-3-磷酸之间的转变,miR-122靶向作用AldoA可能在2型糖尿病的发生发展中发挥重要作用.

鼠尾草酸通过激活AMPK降低游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪积累

目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate activated protein kinase,AMPK)抑制剂(2μmol/L)处理细胞24h后,通过测定细胞内脂肪含量、细胞活力、总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,脂肪代谢相关基因的转录表达水平以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶的表达水平,研究鼠尾草酸的降脂作用机制。结果:15、20μmol/L的鼠尾草酸,1mmol/L的FFAs单独或共同处理细胞24h对细胞的活力没有显著性影响;与正常组相比FFAs处理细胞24h,油红O染色结果显示,FFAs能显著增加细胞内的脂肪含量;FFAs能增加细胞内TC、TG含量,增加脂肪合成相关基因的表达水平,降低脂肪分解相关基因的表达水平(P<0.05)。油红O染色结果显示,与FFAs处理组相比,鼠尾草酸可以降低细胞内的脂肪含量;鼠尾草酸能显著降低TC、TG含量,显著下调脂肪合成相关基因的表达,且使脂肪氧化相关基因的表达水平呈上升趋势,并显著上调磷酸化AMPK的表达量(P<0.05)。使用AMPK抑制剂共同处理细胞24h,对细胞的活力没有影响,但可明显逆转鼠尾草酸的降脂作用(P<0.05)。结论:鼠尾草酸能通过调控脂肪相关基因的转录水平和AMPK磷酸化激酶的表达来改善FFAs诱导的HepG2细胞的脂肪积累。

Tg-visfatin×ob/ob小鼠表型特征与内脂素表达

目的研究Tg-visfatin×ob/ob小鼠的表型特征并探讨内脂素的作用。方法将visfatin转基因小鼠与ob(+/-)小鼠杂交,获取visfatin转基因ob/ob小鼠(Tg-visfatin×ob/ob),以ob/ob小鼠为对照,测定两种小鼠1～9月龄的体重变化,分别在3、5、9月龄测定其腹腔糖耐受和胰岛素耐受情况,并对其从9月龄～11月龄的死亡率进行统计。结果两种小鼠在1～9月龄的体重差异无显著性。腹腔糖耐受和胰岛素耐受实验显示,与ob/ob小鼠相比,3月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的糖耐受受损及胰岛素耐受情况得以改善;5月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠仅糖耐受受损得以改善;9月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠具有更严重的糖耐受受损及胰岛素耐受。统计结果显示,从9月龄到11月龄之间,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的死亡率比ob/ob小鼠提高了44.4%。结论 visfatin体内的高表达对ob/ob小鼠糖耐受和胰岛素耐受有影响,作用效果随着小鼠的年龄不同而变化,在早期起到代偿性的缓解ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受的作用,到后期表现为失代偿性的加重了ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受,并增加了小鼠的死亡率。

人着色性干皮病基因D对HepG2细胞Mdm2和Mdm4表达的影响

目的:探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞鼠双微体2(murine double minute 2,Mdm2)和鼠双微体4(murine double minute 4,Mdm4)表达的影响。方法:用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2,实验分为3组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组。用MTT法观察细胞的增殖活力;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Mdm2、Mdm4和P53表达量的变化。结果:MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了肝癌细胞的增殖活力;流式细胞术结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了G1期细胞增加,S期减少,凋亡率增加。RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高,同时使得Mdm2和Mdm4表达降低,P53表达增高。结论:XPD能下调肝癌细胞中Mdm2和Mdm4的表达,上调P53表达,并能抑制肝癌细胞增殖及诱导其凋亡。

SUMO-1对p53基因诱导HepG2细胞凋亡的增强作用

目的研究小分子泛素样修饰体1(smallubiquitin likemodifier1,SUMO1)在野生型p53基因诱导HepG2细胞凋亡中的作用。方法用含人野生型p53基因质粒pcDNA3wtp53(pwtp53)、含人双微粒体基因2〔(humandoubleminutegene2(HDM2);鼠同源基因为MDM2〕质粒pCMV HDM1B(pMDM2)、含人SUMO1基因质粒pcDNA3His6SUMO1(pSUMO1)和空质粒pcDNA3分别或同时转染HepG2细胞,获得各转染细胞系,应用Westernblot检测转染后细胞中质粒蛋白的表达及流式细胞技术检测细胞凋亡比例。结果转染pwtp53和pMDM2质粒的HepG2细胞均可见p53及MDM2蛋白条带,同时转染pSUMO1质粒的细胞分别可见被SUMO1修饰的相对分子量较大的p53和MDM2蛋白条带,在未转染任何质粒、仅转染空质粒和pSUMO1质粒的细胞中只检测到少量p53蛋白表达。转染pwtp53及pwtp53+pSUMO1质粒的HepG2细胞凋亡比例分别为(16.79±1.62)%和(18.15±1.36)%,转染pwtp53+pMDM2+pSUMO1质粒的细胞凋亡比例为(14.06±1.84)%,转染pwtp53+pMDM2质粒的细胞凋亡比例则下降至(5.17±1.23)%,与前三者比较差异有显著性意义(P<0.01);其他转染系细胞中的细胞凋亡比例均≤2%,差异无显著性意义。结论SUMO1通过与p53蛋白的结合或翻译后修饰,抑制MDM2等癌基因蛋白对p53蛋白的降解,可增强p53抑癌基因诱导的细胞凋亡。

冠心康通过miRNA干预HepG2细胞胆固醇代谢的研究

目的研究冠心康对不同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导HepG2细胞后胆固醇水平及胆固醇代谢相关miR-33a、miR-122以及低密度脂蛋白受体(LDLR)的影响。方法制备冠心康和辛伐他汀含药血清,将HepG2细胞随机分为空白对照组、模型组、辛伐他汀组和冠心康组,分别用20、40、80、160 mg/L浓度的ox-LDL诱导HepG2细胞24 h后,再用各组含药血清孵育48 h。采用油红O染色法观察HepG2胆固醇代谢模型的细胞形态,实时荧光定量PCR法检测miR-33a、miR-122、LDLR基因表达水平,Western blot法检测LDLR蛋白表达。结果与模型组比较,冠心康可显著减少不同浓度ox-LDL诱导后HepG2细胞中橙色脂滴含量,上调ox-LDL诱导后细胞中LDLR基因和蛋白的表达,并抑制miR-33a和miR-122的表达(P<0.05,P<0.01)。结论冠心康可通过上调LDLR基因和蛋白的表达,抑制miR-33a和miR-122的表达,从而降低细胞中胆固醇含量,缓解胆固醇代谢失衡进程。

胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型

目的采用胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615小鼠皮下移植瘤模型。方法小鼠前胃癌细胞株(MFC)在无菌环境下培养制成浓度1×10~7个/mL细胞悬液,然后将悬液接种于小鼠右腋下,建成胃癌动物皮下移植瘤模型,利用瘤块进行体内传代3次,胸膜穿刺针法进行穿刺移植建立615小鼠皮下移植瘤模型。同时建立对照组(未放瘤块)用于对比,小鼠成瘤情况利用外观形态学和HE染色方法评价。结果模型组小鼠体质量减轻。模型组肿瘤在第12天后生长较快,模型成功率为100%。外观形态学观察,模型组10只小鼠成瘤率100%,平均瘤重为(7.7160±0.2937)g;对照组成瘤率为0,模型组与对照组差异明显(P<0.01)。病理结果显示:模型组的瘤块体积较大,表面不规则,细胞核呈圆形、卵形或异形,核仁不显现,核分裂相较明显,是比较典型的胃癌组织的形态特征。结论胸膜穿刺针联合OB吻合胶法构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型成功率高、并且具有高效、便利等特点,值得推广应用及研究。

胆固醇代谢障碍影响ob/ob小鼠室管膜下区神经发生

目的检测胆固醇对ob/ob肥胖小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响,探讨肥胖引起中枢神经系统功能障碍的可能机制。方法选取4月龄ob/ob和野生型(WT)小鼠各6只,运用细胞增殖抗原(Ki67)和双皮质素(DCX)免疫荧光染色检测ob/ob小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经发生水平;分离培养18只4月龄ob/ob和WT小鼠SVZ的NSCs,运用BrdU掺入实验和β-Ⅲ-微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色检测NSCs的自我更新和分化能力。运用基质辅助激光解飞行时间质谱(MALDI-MS)分别检测3只ob/ob和WT小鼠脑组织的脂质分布,并分析胆固醇(ST)含量和胆固醇合成相关基因的表达变化。体外培养15只WT新生鼠(P0)SVZ的NSCs,并通过电穿孔法转染胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr)的小干扰RNA(siRNA),验证敲减效率,并通过BrdU掺入实验和Tuj1免疫荧光染色检测Hmgcr基因敲减对NSCs的影响。结果与WT小鼠相比,ob/ob小鼠SVZ部位Ki67+和DCX+细胞数量均显著下降(P<0.05)。体外实验结果显示,ob/ob小鼠NSCs的BrdU阳性率(P<0.05)和Tuj1阳性率(P<0.05)较WT小鼠NSCs显著下降。MALDI-MS结果显示,在ob/ob小鼠SVZ部位,ST(26∶0)和ST(27∶3)分布较WT小鼠明显减少;同样,试剂盒检测结果显示,与WT小鼠相比,ob/ob小鼠SVZ组织及NSCs的胆固醇含量显著降低(P<0.05);Real-time PCR结果显示,ob/ob小鼠SVZ组织和NSCs的胆固醇合成相关基因Hmgcr、羊毛甾醇14α-脱甲基酶(Cyp51)、3-β-羟基类固醇-Δ8,Δ7-异构酶(Ebp)和角鲨烯合酶(Fdft1)的mRNA表达水平均较WT小鼠显著下降(P<0.05),提示ob/ob小鼠SVZ的胆固醇合成障碍。Real-time PCR结果显示,Hmgcr-siRNA的干扰效率为55.27%±8.768%(P<0.05),Western blotting结果显示,Hmgcr-siRNA的干扰效率为32.69%±8.056%(P<0.05);BrdU掺入实验结果显示,Hmgcr-siRNA组的BrdU阳性率较对照(control)组显著下降(P<0.05);1%FBS诱导分化后,Hmgcr-siRNA组Tuj1阳性率较control组也显著下降(P<0.05),提示胆固醇合成受损抑制神经干细胞的自我更新和分化能力。结论ob/ob小鼠脑内胆固醇水平下降可影响SVZ部位NSCs增殖分化能力。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝细胞膜蛋白MRP3与核受体RXRα蛋白表达关系的研究

目的通过体外细胞培养和建立大鼠胆管结扎(b ile duct ligation,BDL)所致阻塞性胆汁淤积动物模型,在蛋白水平观察多耐药相关蛋白MRP3(mu ltidrug resistance-assoc iated prote in 3,MRP3)和核受体RXRα(retinoid-X receptor al-pha,RXRα)表达的关系。方法用鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic ac id,CDCA)或苯巴比妥(phenobarb ital,PB)分别刺激培养的肝癌细胞HepG2并建立DBL阻塞性胆汁淤积大鼠模型后,分别抽提HepG2细胞总蛋白、核蛋白和大鼠肝脏细胞膜蛋白和核蛋白,W estern b lot方法检测MRP3和RXRα蛋白表达水平的变化。结果在细胞水平,CDCA和PB可诱导HepG2细胞膜MRP3蛋白表达增高,并抑制细胞核RXRα蛋白表达;在动物体内,BDL大鼠肝脏MRP3明显增加,同时RXRα表达明显下降。结论肝细胞膜蛋白MRP3表达的上调可能与核受体RXRα表达抑制有关。

重组人成纤维细胞生长因子21降糖作用研究

目的利用肝细胞、肌肉细胞,前脂肪细胞及ob/ob小鼠进行rhFGF21体内外降糖作用研究。方法培养人正常肝细胞(HL-7702),大鼠肌肉细胞(L-6),小鼠前脂肪细胞(3T3-L1),用GOD-POD试剂盒测定细胞葡萄糖吸收量;FGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射7d,分别在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测空腹血糖,以生理盐水做对比;rhFGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射9 d,末次给药后1 h开始口服糖耐量实验,灌胃给予2 mg.g-1的葡萄糖溶液,分别于给予葡萄糖溶液后30、60、120 min检测血糖;rhFGF-21按照每天2.5μg·g-1的剂量颈部皮下注射连续7 d,在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测餐后血糖。结果在3.9 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进HL-7702细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);在0.3 mg·L-1～250 mg·L-1间rhFGF21促进L6肌细胞对葡萄糖的吸收,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);在12.6 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进分化的3T3-L1细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);ob/ob小鼠血糖测试证明,rhFGF-21具有降血糖和改善葡萄糖耐受量的作用。结论 rhFGF21体外可促进肝细胞、肌肉细胞及脂肪细胞葡萄糖的吸收;rhFGF-21可降低ob/ob小鼠空腹血糖及餐后血糖,具有改善其葡萄糖耐受量的作用。

重组Osf2定向调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的研究成骨细胞特异性因子(Osf2)调控骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为成骨细胞(OB)的分子机制。方法用Percoll密度梯度离心法分离获得大鼠的MSCs,通过细胞免疫化学、免疫荧光、透射电镜及流式细胞仪等方法进行鉴定。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Osf2,通过脂质体系统转染传代培养后的MSCs,用Northern Blot检测三种OB细胞外基质蛋白mRNA的表达情况。结果转染后的MSCs都表达OB特异性基质蛋白骨钙素、骨桥接蛋白和I型胶原。结论Osf2在转录水平定向调控MSCs分化为成骨细胞,可应用于骨质疏松、骨缺损等疾患的基因治疗。

SUMO-1、MDM2和P53对5-Fu诱导细胞凋亡的影响

目的:探讨SUMO-1、MDM2和P53对化疗药5-Fu诱导的HepG2细胞凋亡的影响.方法:5-Fu诱导HepG2细胞产生凋亡,以质粒pCMV-HDM1B(pMDM2)和pcDNA3-His6-SUMO-1(pSUMO-1)转染细胞,应用Westernblot检测经药物诱导及转染前后细胞中内源性P53蛋白的表达强度,流式细胞仪检测细胞凋亡比例变化.结果:HepG2细胞内源性P53蛋白表达强度与空白对照组相比明显增高,于1×10-3mol/L浓度处最强(90.15%±4.22%vs11.27%±1.18%,P<0.05).随5-Fu浓度的增加,HepG2细胞凋亡率逐渐升高,于1×10-2mol/L浓度处凋亡率最高(33.61%±3.15%vs3.22%±0.60%,P<0.05).转染pMDM2的细胞具有明显的抗凋亡特性,与同浓度未转染细胞相比,P53蛋白表达强度和细胞凋亡率均明显下降(51.80%±0.78%vs90.15%±4.22%;20.45%±2.23%vs33.61%±3.15%,均P<0.05).共转染pSUMO-1的细胞其浓度-蛋白表达强度-凋亡率曲线又接近未转染细胞,与单纯转染pMDM2细胞相比,P53蛋白表达强度和细胞凋亡率显著上升,差异有统计学意义(78.85%±2.43%vs51.80%±0.78%,29.83%±0.53%vs20.45%±2.23%,均P<0.05).只转染pSUMO-1细胞的P53蛋白表达和凋亡率与未转染细胞相似,两者间差异无统计学意义.结论:SUMO-1通过抑制MDM2对P53在胞质的降解及增强P53在细胞核内的表达,可促进化疗药物诱导的细胞凋亡,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,在药物诱导的细胞凋亡中具有显著协同效应.

胰岛素抵抗细胞与大鼠模型的建立及其应用

目的探讨胰岛素抵抗模型的建立方法和二苯乙烯对血糖的调节作用。方法①给予Wistar大鼠自制脂肪乳建立胰岛素抵抗动物模型。②给予HepG2细胞胰岛素,建立胰岛素抵抗（HepG2/IR）细胞模型。③分别给予模型大鼠和HepG2/IR细胞二苯乙烯,观察二苯乙烯对血糖的调节作用。结果给予脂肪乳后,大鼠的血糖和TG、TC、LDL、HDL分别升高了72.87%和16.21%、139.93%、56.93%、18.32%,与建模前比,差异有显著性（P〈0.01）;给予二苯乙烯,模型组动物血糖和血脂水平比给药前明显降低（P〈0.05~0.01）;HepG2/IR葡萄糖消耗量比对照组（HepG2）明显增加。结论给予Wistar大鼠自制脂肪乳或给予HepG2细胞胰岛素,可建立胰岛素抵抗模型;二苯乙烯具有降低模型动物血糖和血脂、增加HepG2/IR葡萄糖消耗量的作用。

地塞米松对HepG2细胞OB-Ra及OB-Rb mRNA表达的调节

观察不同浓度的地塞米松对HepG2细胞内瘦素受体mRNA表达的影响 ,发现地塞米松对瘦素短型受体 (OB Ra)及长型受体 (OB Rb)的mRNA表达均有增强性调节作用。