基于网络药理学和体内实验探究白鲜皮致急性肝损伤的机制

目的通过网络药理学与动物体内实验,探究白鲜皮致急性肝损伤的机制。方法通过TCMSP、TCMIP和SwissTargetPrediction数据库得到白鲜皮的化学成分和作用靶点,GeneCards和CTD数据库获取肝损伤疾病的相关靶点。利用STRING数据库对交集靶点进行蛋白质互作网络分析并筛选出核心靶点,利用DAVID数据库完成GO功能和KEGG通路富集分析,使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点”多层次关联网络图。动物实验中,通过灌胃给予小鼠92.7 g/(kg·d)白鲜皮,7 d后取材。采用苏木精-伊红(HE)、Masson、油红O染色观察肝脏病理学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的表达情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织蛋白激酶B1(AKT1)、IL-6、TNF-α、肿瘤蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)、IL-1β的m RNA表达。应用分子对接验证潜在毒性成分与靶点的结合情况。结果通过筛选共得到白鲜皮化学成分14个,预测靶点244个;与肝损伤的交集靶点202个。GO生物过程分析主要涉及基因表达正向调控、凋亡过程的负向调控等。KEGG通路富集分析主要包括癌症途径、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶、TNF、IL-17等信号通路等。病理片结果显示,给予白鲜皮后,HE染色小鼠肝组织中可见重度出血,较大量的肝细胞坏死,核碎裂或溶解;Masson染色显示肝组织出现明显纤维化;油红O染色结果有大量脂滴生成。ELISA结果显示与空白组相比,给药组小鼠血清AST、ALT、ALP、LDH及肝脏MDA、TNF-α、IL-1β水平显著上升(P<0.05),肝脏SOD水平显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示给药组小鼠肝脏组织相关m RNA表达量均显著升高(P<0.05)。分子对接显示黄柏酮、白鲜碱、梣酮3个白鲜皮的潜在毒性成分与AKT1、IL-6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β靶点结合性、亲和力良好。结论黄柏酮、白鲜碱、梣酮、柠檬苦素可能是白鲜皮致小鼠急性肝损伤潜在毒性成分,白鲜皮可能是通过改变AKT1、IL6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β等蛋白的表达,影响能量代谢、细胞分化、炎症、氧化应激及免疫等多种途径来作用于肝脏,导致肝损伤。

HPLC波长切换法测定除脂生发片4种中成药成分含量

目的:建立了HPLC波长切换法测定除脂生发片中成药胡薄荷酮等4种成分含量的方法。方法:色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18(4.6×250mm,5μm);以乙腈(A)-0.3%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱,洗脱程序为:0~6min 89%A,6~27min 89%~31%A,27~30min 31%~89%A,31~35min 89%A;柱温30℃;柱流量1.0mL/min;检测波长:丹皮酚(274nm)、黄柏酮(236nm)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(254nm)和胡薄荷酮(252nm);进样体积:10μL,HPLC-DAD定量检测。结果:丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮分别在浓度范围0.01996~1.996、0.5868~5.868、0.997~9.97、0.0998~9.98μg/mL内具有良好的线性,平均回收率分别为100.92%、100.54%、101.14%、100.93%;精密度和重复性RSD均在5.0%以内。结论:此方法具有前处理简单等优点,适用于除脂生发片制剂的质量控制。

高效液相色谱测定除脂生发片中丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮

建立高效液相色谱波长切换法测定除脂生发片中丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮成分含量。色谱柱为Agilent EclipsePlus C18(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(流动相A)-0.3%磷酸(流动相B)为流动相,梯度洗脱;柱温30℃;柱流量1.0 mL/min;丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮的检测波长分别为274、236、254和252 nm;进样体积:10μL,高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测。丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮分别在质量浓度0.01996~1.996、0.5868~5.868、0.997~9.97、0.0998~9.98μg/mL内与其色谱峰面积呈线性关系,相关系数分别为0.9996、0.9980、0.9997和0.9999,平均回收率分别为100.92%、100.54%、101.14%、100.93%;测定结果的相对标准偏差均小于5.0%(n=6)。该方法具有样品处理简单、分析时间短、检测结果准确等优点,适用于除脂生发片制剂的质量控制。

白鲜皮主要药效成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮的抗皮炎作用比较及机制研究

目的:比较中药白鲜皮的3种主要活性成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)治疗中的作用并探讨其机制。方法:利用2,4⁃二硝基氟苯(2,4⁃dinitrofluorobenzene,DNFB)构建小鼠皮炎模型,观察白鲜皮醇提物、白鲜碱、黄柏酮、梣酮、地塞米松对AD小鼠引起的慢性瘙痒的作用;采用皮损评分评估小鼠皮损严重程度。苏木精⁃伊红(hematoxy⁃lin⁃eosin,HE)和甲苯胺蓝染色评估小鼠表皮厚度和肥大细胞数目。酶联免疫吸附试验(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠皮损组织中白介素(interleukin,IL)⁃4、IL⁃31、IL⁃10水平;Western blot检测Janus激酶(janus kinase,JAK)1、p⁃JAK1、信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3、p⁃STAT3、STAT6、p⁃STAT6的蛋白水平。结果:AD小鼠引起的慢性瘙痒能明显被白鲜皮醇提物抑制。与模型组相比,白鲜皮的3种主要活性成分中:白鲜碱和梣酮能明显抑制AD小鼠引起的慢性瘙痒,改善皮损症状和炎症细胞浸润,下调IL⁃4、IL⁃31水平,上调IL⁃10水平,并抑制JAK1⁃STAT3/STAT6信号通路,但黄柏酮组与模型组比较差异无统计学意义。结论:白鲜碱和梣酮可能是白鲜皮发挥抗皮炎作用的主要活性成分。

黄柏酮对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾间质纤维化及铁死亡的影响

目的研究黄柏酮对单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾间质纤维化的改善作用,并基于核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路介导的铁死亡探讨其作用机制。方法将30只小鼠随机分为假手术组、模型组、厄贝沙坦组(阳性对照,20 mg/kg)和黄柏酮低、高剂量组(10、40 mg/kg),每组6只。除假手术组外,其余各组小鼠均通过结扎单侧输尿管建立UUO模型。术后,给药组小鼠腹腔注射相应药物,假手术组、模型组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。检测小鼠血清中肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平,丙二醛(MDA)含量,总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和肾脏组织中Fe^(2+)浓度;苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察小鼠肾脏组织形态和纤维化情况;免疫组化法检测小鼠肾脏组织中纤连蛋白(Fn)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GPx4、Nrf2的表达,Western blot法和实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肾脏组织中Fn、α-SMA、Nrf2、GPx4、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白及mRNA的表达水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠血清中Cr、BUN水平,MDA含量,肾脏组织中Fe^(2+)浓度以及Fn、α-SMA蛋白和mRNA的表达水平均显著升高(P<0.05);血清中T-SOD活力,肾脏组织中Nrf2、GPx4、SLC7A11蛋白和mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肾脏组织中肾小管扩张,胶原沉积明显,纤维条索较粗且着色较深,肾间质炎症细胞浸润明显。经黄柏酮干预后,小鼠血清或肾脏组织中上述指标(黄柏酮低剂量组SLC7A11 mRNA除外)水平均显著逆转(P<0.05),肾脏组织病理损伤、胶原沉积均有所减轻。结论黄柏酮可改善UUO模型小鼠的肾间质纤维化,具体作用机制可能与激活Nrf2/GPx4信号通路、抑制铁死亡有关。

高效液相色谱法测定关黄柏叶中黄柏酮的含量

目的:采用高效液相色谱法建立关黄柏叶中黄柏酮的含量测定方法。方法:高效液相色谱法,WondaSil C18 Superb色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%醋酸水(V∶V=49∶51)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为215 nm,柱温为30℃。结果:黄柏酮在1.68~52.74μg/mL范围内,线性关系良好(R2=0.9999)。供试品溶液在24 h内稳定性良好,方法的精密度高,平均加样回收率为102.2%,RSD为2.27%。关黄柏叶中黄柏酮的含量为1.604 mg/g。结论:所建立的方法可用于测定关黄柏叶中黄柏酮的含量。

HPLC法测定两种黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮

目的建立同时测定黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮的高效液相色谱方法。方法以Agilent C18为分析色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水-磷酸(45∶55∶0.2)为流动相,检测波长为205 nm,柱温为35℃,体积流量:1.0mL/min作为色谱条件。结果黄柏内酯和黄柏酮分离良好,线性范围依次为0.720～14.40μg、0.0524～1.048μg;平均加样回收率(n=6)依次为100.2%和99.9%;RSD分别为1.7%、1.9%;关黄柏和川黄柏经炮制后,黄柏内酯及黄柏酮的量均有所下降。结论该方法准确,操作较为简便易行,精密度及重复性良好,可用于黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮的质量控制。

不同生长阶段白鲜皮中黄柏酮和梣酮累积量的变化规律

连续2 a采集白鲜皮样品,采用加热回流法提取白鲜皮中的黄柏酮和梣酮,通过高效液相色谱法测定其质量分数。结果表明:白鲜皮中黄柏酮和梣酮累积量,均与生长年限呈正相关,同一种成分的年变化基本相同。黄柏酮与梣酮的年变化规律差异较大,2种成分在一个生育期的不同生长阶段,积累量差异显著;果期的黄柏酮和花期的梣酮累积量最大。白鲜春季或秋季采收均可,3年生以上的适宜采收。

柑橘果实中柠檬苦素及类似物功能活性研究进展

柠檬苦素类似物是一类三萜系化合物,包括柠檬苦素、诺米林、奥巴叩酮等物质。主要存在于柑橘类果实的核、内果皮和囊衣等部位,尤其在种子中含量丰富。本文介绍柠檬苦素及类似物的化学结构,综述其抗肿瘤、抗氧化及防治植物病虫等功能活性的研究进展,展望在医疗、食品及农作物病虫害防治方面的应用前景,并提出今后的研究方向。

白鲜营养器官黄柏酮和梣酮的组化定位及含量的动态变化

采用组织化学和高效液相色谱法(HPLC法)对秦岭产药用植物白鲜(Dictamnus dasycarpus)营养器官白鲜皮(根皮)、木质部、茎和叶中萜类物质的组织定位及黄柏酮和梣酮含量的动态变化规律进行了研究。组织化学测试结果表明:在根中,萜类物质主要分布在多年生根的周皮、次生韧皮部、韧皮部的油细胞、维管形成层以及木质部的薄壁组织中;在茎中,萜类物质主要分布在茎的表皮、紧贴表皮的分泌囊、皮层、韧皮部和木质部的薄壁细胞、髓部以及紧贴茎表皮的分泌囊中;在叶中,萜类物质主要分布在叶的表皮、头状腺毛、栅栏组织、海绵组织及维管束位置的薄壁组织中。HPLC测试结果表明:白鲜植物体除药用部位白鲜皮外,在木质部、茎和叶中均含有萜类物质黄柏酮和梣酮;试验测试样本白鲜皮中黄柏酮和梣酮的含量均符合药典标准(2015);在除营养生长期外几个生长阶段的木质部以及盛花期、成熟前期和成熟期I的茎和叶中,其黄柏酮含量亦均符合药典标准,其中盛花期白鲜茎和叶中黄柏酮的含量为药典最低含量标准的2~4倍多。秦岭终南山产白鲜皮品质优良,白鲜的根木质部、茎和叶用来提取黄柏酮,具有较好的应用价值,建议实践中针对不同需求综合利用白鲜非药材部位。

HPLC法同时测定白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量

目的：建立RP-HPLC同时测定白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮和腀酮含量的方法。方法：采用RP-HPLC,70%乙醇超声提取,色谱条件：色谱柱AlltimaC18（4.6mm×250mm,5μm）,保护柱All-GuardTM C18（4.6mm×7.5mm,5μm）,流动相乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速1.0mL/min,进样量10μL,柱温25℃,检测波长238nm。结果：该3种成分分离良好,线性范围依次为0.4～16.0,10～400和1.6～64.0mg/L,加样回收率分别为99.95%,98.91%,100.02%,RSD分别为：1.81%,1.83%,2.62%。结论：本方法简单、快捷,重现性好,准确率高,可用于白鲜皮药材的质量控制。

中药白鲜皮的化学成分研究

用硅胶柱层析、重结晶等手段从中药白鲜皮(DictamnusdasycarpusTurcz)乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分分离得到5个单体(A、B、C、E和G)。通过碳谱、氢谱等核磁手段鉴定出,A为梣酮(Fraxinellone),E为白鲜碱(Dictamine);G为黄柏酮(Obacunone),其余化合物正在鉴定之中。

白鲜皮药材的质量标准研究

目的:建立白鲜皮药材的质量标准,为该药材及其制剂的质量控制提供有效方法。方法:采用TLC法鉴别,建立白鲜皮药材的高效液相特征图谱,对10批不同来源白鲜皮药材的杂质、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、水分、重金属含量进行测定。结果:10批不同来源白鲜皮药材的薄层色谱中与对照品黄柏酮、白鲜碱、梣酮色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。10批不同来源的白鲜皮药材的高效液相色谱检出6个共有特征峰,不同批次药材特征图谱相似度均大于0.9,但相对峰面积有明显差异。结论:该方法操作简单,重现性好,准确可靠,可较全面地控制白鲜皮药材及其制剂的质量。

HPLC法同时测定白鲜皮配方颗粒中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量

目的:建立同时测定白鲜皮配方颗粒中白鲜碱、黄柏酮和梣酮含量的方法。方法:色谱柱为Agilent Extend C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(55:45),流速为1.0 m L·min-1,检测波长为236 nm,柱温为室温,自动进样器进样,进样量10μL。结果:白鲜碱在2.505-40.08μg·m L-1质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(R2=0.999 7,n=5),平均回收率为99.04%(RSD=1.51%,n=6);黄柏酮在26.12-418.0μg·m L-1质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(R2=0.999 8,n=5),平均回收率为99.48%(RSD=2.25%,n=6);梣酮在7.540-120.6μg·m L-1质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(R2=0.999 8,n=5),平均回收率为99.54%(RSD=2.09%,n=6)。结论:本法操作方便,结果准确,精密度好,专属性强,可用于白鲜皮配方颗粒的质量控制。

东北地区野生白鲜皮3种药用成分含量分析

为了科学评价东北地区野生白鲜皮的药材质量,以产自吉林、内蒙古、黑龙江和辽宁4个省域8个地区的野生白鲜皮为试验药材,采用高效液相色谱法,测定了白鲜皮中梣酮、黄柏酮和白鲜碱3种药用成分的含量。结果表明:参试药材样品的梣酮和黄柏酮含量均明显高于《中国药典》规定标准,但白鲜碱含量与全国平均水平差异不大,其中吉林梅河口药材样品的梣酮、黄柏酮和白鲜碱含量均最高,分别为0.226 1%、0.612 9%和0.032 3%。东北地区野生白鲜皮的药材质量普遍较好,其中吉林梅河口所产药材质量最佳。

市售白鲜皮黄柏酮和梣酮含量分析

目的测定市售白鲜皮中黄柏酮、梣酮的含量,评价目前该饮片市场规范情况。方法以白鲜皮中黄柏酮和梣酮的含量为评价指标,以C18为固定相,色谱乙腈-0.2%磷酸水（45∶55）为流动相,检测波长为228 nm,流速为0.8 mL·min-1,柱温为室温,采用HPLC法测定白鲜皮中黄柏酮和梣酮的含量。结果黄柏酮、梣酮含量分别在0.24%~1.46%和0.02%~0.11%之间,梣酮和黄柏酮的达标率分别为62.5%,100%。结论咸阳市场上62.5%的药店出售的白鲜皮达到2010版《中国药典》标准。

白鲜皮药理作用的研究进展

白鲜皮具有清热燥湿、祛风解毒等功效,主治湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹、风疹、疥癣疮癞、风湿热痹、黄疸尿赤。综述了白鲜皮近20年来在抗菌、抗肿瘤、抗炎与抗变态反应、抗溃疡、抗冠状动脉粥样硬化、保护肝脏和神经等药理作用以及白鲜皮中活性成分——白鲜碱、梣皮酮(fraxinellone)和黄柏酮研究进展。

白鲜根皮与木心活性成分比较研究

目的:比较白鲜根皮和木心的活性成分,为白鲜产地加工是否需要去心提供理论依据.方法:采用HPLC法测定白鲜根皮与木心中梣酮和黄柏酮含量,并比较HPLC指纹图谱相似度.结果:根皮中的梣酮和黄柏酮含量分别为0.7731﹪、0.3029﹪,木心中的梣酮和黄柏酮含量分别为0.4712﹪、0.1785﹪;根皮与木心指纹图谱的相似度达0.923,有12个共有峰.结论:以梣酮和黄柏酮为指标,白鲜根皮中两者含量均大于木心中的两者含量;根皮与木心中两者含量均达到了中国药典要求,二者HPLC指纹图谱的吻合程度较高,活性成分相似.白鲜根皮可不去木心入药.

反相液相色谱法制备纯化柠檬苦素类似物配糖体

利用反相制备液相色谱结合吸附树脂柱色谱和离子交换色谱方法 ,从甜橙种子的提取物中纯化制备了一种柠檬苦素类似物配糖体 ,经 NMR测定为奥巴叩酮配糖体。

甜橙种子中柠檬苦素类似物配糖体的测定

利用液质联用 (LC ESI MS)技术对甜橙种子的乙醇提取物进行了检测 ,从中发现了两种柠檬苦素类似物的配糖体———奥巴叩酮配糖体和诺米林配糖体 .采用13C和1H核磁共振谱法对化合物的结构进行了进一步证实 .