蠖蛛比对游猎蛛种间竞争作用的影响

为明确茶尺蠖与天敌比值对天敌竞争作用的影响,得出优势种天敌,以期为茶尺蠖的生物防治提供有效依据,利用灰色关联度分析法、竞争系数分析法、竞争强度指数法、方差分析法和t检验法对安吉白茶、龙井43、平阳特早和农抗早4个茶园中茶尺蠖高峰日时的7种蜘蛛天敌取食茶尺蠖的竞争作用进行分析。灰色关联度分析结果表明,粽管巢蛛、黑色跳蛛和三突花蟹蛛是与茶尺蠖数量关系最为密切的前3位天敌;竞争系数分析结果表明鞍型花蟹蛛和斜纹猫蛛是竞争强度受比值影响最大的2种天敌;竞争强度指数分析结果表明鞍型花蟹蛛、三突花蟹蛛和斜纹猫蛛是竞争强度受比值影响最大的3种天敌。综合上述分析得出鞍型花蟹蛛和斜纹猫蛛是竞争能力受蠖蛛比影响较强的2种天敌,因此在茶尺蠖的防治过程中可根据害虫与天敌比值的高低分别加强对这2种天敌的保护与利用。研究结果可为合理保护与利用茶尺蠖天敌提供科学依据。

茶树γ-氨基丁酸代谢途径对早期茶尺蠖取食为害的响应

茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)为害会诱导茶树释放大量挥发性代谢物,这些代谢物作为重要信号物质在趋避害虫或吸引天敌方面的研究已被广泛报道,但茶尺蠖为害对茶树叶片中非挥发性代谢物质空间变化的影响及其作用尚不清楚。以茶树叶片为材料,限制茶尺蠖仅在叶尖部取食,再采集叶尖部、叶中部、叶基部3个位点组织,基于超高效液相色谱-四极杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive/MS)的分析方法对这3个位点组织的非挥发性代谢物质进行鉴定和分析。结果表明,与空白对照和机械损伤相比,茶尺蠖为害可诱导6种二聚儿茶素类、3种氨基酸类(包括γ-氨基丁酸)、1种黄酮和黄酮苷类、1种酚酸类共11种差异代谢物。与空白对照相比,茶尺蠖为害后,茶树叶片3个位点的γ-氨基丁酸相对含量均明显增加,在叶中部和叶基部均增加了1.99倍,且γ-氨基丁酸生物合成途径中的关键基因在这3个位点均上调表达。茶尺蠖为害后,在叶片叶尖部和叶基部,γ-氨基丁酸的相对含量与其前体物质谷氨酸的相对含量呈显著正相关(P<0.05)。茶尺蠖取食添加了0.2、0.5、2.0 mg·g^(-1)γ-氨基丁酸的人工饲料后,其体质量和体长均显著小于对照组(P<0.05)。本研究表明,γ-氨基丁酸代谢途径在茶树抵御茶尺蠖为害的早期防御反应中发挥了重要作用,为进一步揭示茶树的生化抗性机制奠定基础。

茶尺蠖羧酸酯酶EoCarE592的重组表达及其对农药的降解能力测定

【目的】原核表达茶尺蠖Ectropis obliqua羧酸酯酶(carboxlesterase,CarE)基因EoCarE592,并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体pET-32a-EoCarE592,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21异源表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,并对包涵体蛋白变复性;通过固蓝B盐比色法的含量标准曲线测定重组EoCarE592酶活性以及温度、pH和金属离子对酶活性的影响;利用气相色谱检测EoCarE592在30℃pH 7.0和0,4,8,12,16,20及24 h时对200 mg/L的高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲基对硫磷(methyl-parathion)和异丙威(isoprocarb)降解能力。【结果】通过大肠杆菌异源表达得到重组EoCarE592包涵体蛋白,经尿素变复性后得到酶活性29.8 U的重组EoCarE592,其最适温度30℃左右、最适pH 7.0~8.0左右、Mg^(2+)和K^(+)对酶活有促进作用;重组EoCarE592能在30℃,pH 7.0,24 h内对初始浓度为200 mg/L的高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威降解率分别为81.30%,83.94%和79.83%。【结论】羧酸酯酶EoCarE592能降解高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威,可能参与茶尺蠖的解毒过程。本研究为环境和果蔬中农药残留的降解奠定了基础。

Development of synthetic volatile attractant for male Ectropis obliqua moths

The tea geometridEctropis obliquais one of the most serious leaf-feeding insect pests in tea （Camelia sinensis） in East Asia. Although several volatile chemicals emitted from tea plants have been reported to be attractive toE. obliqua moths, no synthetic attractants for E. obliqua moths have been developed. By measuring the behavioral responses of the moth to a series of chemicals in the lab, we found that a blend containing a ternary mixture containing （Z）-3-hexenal, （Z）-3-hexenyl hexanoate and benzyl alcohol clearly attracted toE. obliqua moths of both sex and that （Z）-3-hexenyl acetate could enhance the attractiveness of the ternary blend. Moreover, we found that the volatiles emitted from the plant-E. obliqua larva com-plex have the same attractiveness as： 1） the blend of volatiles containing the ternary mixture and 2） the blend containing （Z）-3-hexenyl acetate plus the ternary mixture to both male and female moths. In a ifeld bioassay, more male moths were observed on traps that were baited with the blend containing （Z）-3-hexenyl acetate plus the ternary mixture than on control traps. Our study raises the tantalizing possibility that synthetic blends could be deployed as attractants for pests in the ifeld.

Triterpenoids from Fuscoporia obliqua

Two new lanosta triterpenoids, 3 beta,22 a -dihydroxy-lanosta-8,24E-diene-25-peroxide 3 beta,22 a,25-trihydroxy lanosta-8,24E-diene were isolated from the petroleum ether extracts of Fuscoporia obliqua and their structures had been determined by spectral data, chemical method and X-ray crystallographic analysis.

灰茶尺蠖核型多角体病毒对两种尺蠖的致病性

灰茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis grisescens Nucleopolyhedrovirus,EgNPV)是灰茶尺蠖幼虫的重要病原微生物。为明确其对茶树重要害虫尺蠖类的两个近缘种灰茶尺蠖Ectropis grisescens Warren和茶尺蠖E.obliqua Prout的致病性,进行了一系列的生物测定。结果表明,EgNPV对2龄灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫的剂量对数-死亡机率值回归方程和LC50分别为y=0.943x+0.3582,LC50=8.3×10^(4) PIB/mL;y=0.663x+1.614,LC50=1.3×10^(5) PIB/mL。当使用不同浓度EgNPV处理不同龄期灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫时发现,两种幼虫致死率趋势大致相同;在虫龄一致时,达到相同的致病率,灰茶尺蠖所需的时间比茶尺蠖平均短一天。使用2×106 PIB/mL浓度处理不同代别灰茶尺蠖和茶尺蠖2龄幼虫,在第1、2和第6代,EgNPV对两种幼虫的致死率均大于80%。上述结果表明灰茶尺蠖核型多角体病毒对灰茶尺蠖、茶尺蠖的幼虫都比较敏感,具有致死能力。这为灰茶尺蠖核型多角体病毒的合理应用提供理论基础。

不同茶园灰茶尺蠖和茶尺蠖对5种杀虫剂的抗药性监测

为了明确茶园暴食性害虫灰茶尺蠖Ectropis grisescens和茶尺蠖E.obliqua抗药性现状,制定有效的防治措施,本研究采用浸叶法分别测定了5种茶园常用杀虫剂对5个地理种群灰茶尺蠖和2个地理种群茶尺蠖的抗药性。结果表明,不同茶园灰茶尺蠖和茶尺蠖对供试药剂的抗性水平存在差异:浙江兰溪、浙江金华、河南南阳地区的灰茶尺蠖种群和浙江杭州、浙江安吉的茶尺蠖种群对联苯菊酯产生了中高等抗性;浙江杭州的茶尺蠖种群对苦参碱的抗性达到中等水平,其余供试种群对苦参碱抗性处于敏感水平;所有供试种群对虫螨腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和茚虫威这3种药剂的抗性均处于敏感水平。从化学防治的角度来看,目前茶园灰茶尺蠖和茶尺蠖对虫螨腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和茚虫威敏感性高,抗性低,推荐合理科学使用,并避免长期使用单一农药。

六种茶园茶尺蠖与其蜘蛛类天敌的空间和数量关系

探讨蜘蛛类天敌与茶尺蠖(Ectropis obliqua hypulina)的空间关系和数量关系,为茶园茶尺蠖的综合治理提供科学依据。于2021年7月8日至2021年9月17日对安徽农业大学国家高新技术农业园安吉白茶、黄山大叶种、龙井43、农抗早、平阳特早和乌牛早茶园的茶尺蠖及其天敌进行种群数量调查。运用地学统计学方法结合角余弦系数法、密切指数和灰色关联度法对6种茶园茶尺蠖幼虫及其天敌种群动态进行分析,研究蜘蛛类天敌与茶尺蠖空间和数量关系的密切程度。根据密切指数之和得出,6种茶园中与茶尺蠖幼虫空间关系密切的前2位蜘蛛依次是鳞纹肖蛸(Tetragnatha squamata)和三突花蟹蛛(Misumenops tricuspidatus),与茶尺蠖幼虫数量关系密切的前2位蜘蛛依次是草间小黑蛛(Erigonidium graminicolum)和鳞纹肖蛸。综合分析得出,与茶尺蠖幼虫在空间和数量上关系密切的前3位蜘蛛依次是鳞纹肖蛸、八点球腹蛛(Theridion octomaculatum)和三突花蟹蛛,鳞纹肖蛸是6种茶园中茶尺蠖幼虫最主要的自然蜘蛛类天敌。研究结果可以为合理保护和利用蜘蛛类天敌提供重要科学依据。

游猎蛛在茶尺蠖高峰日的种间竞争作用

为了合理保护和充分利用天敌,明确茶园游猎蛛天敌捕食茶尺蠖Ectropis obliqua hypulina的种间竞争力及其差异。本文运用通经分析法、灰色关联度分析法、竞争系数分析法及竞争强度指数分析法对龙井43、黄山大叶种、乌牛早、安吉白茶、平阳特早和农抗早6类茶园中茶尺蠖高峰日时的7种游猎蛛捕食茶尺蠖的种间竞争作用进行分析。结果表明,按相关系数比较,乌牛早茶园茶尺蠖与条纹蝇虎Plexippus setipet的相关系数为-0.888,平阳特早茶园茶尺蠖与三突花蟹蛛Misumenops tricuspidatus和斜纹猫蛛Oxyopes Sertatws的相关系数分别为0.981和-0.902,均达相关水平,天敌间鞍型花蟹蛛Xysticus ephippiafus、三突花蟹蛛、斑管巢蛛Clubiona reichlini和斜纹猫蛛均与黑色跳蛛Plexippus paykulli相关,鞍型花蟹蛛、粽管巢蛛Clubiona japonicola和黑色跳蛛均与三突花蟹蛛相关。用灰色关联度法分析,与茶尺蠖数量上关系密切的前4种天敌依次是三突花蟹蛛、粽管巢蛛、黑色跳蛛和鞍型花蟹蛛。按竞争系数大小比较,前4种天敌依次是黑色跳蛛、粽管巢蛛、斑管巢蛛和三突花蟹蛛。按竞争强度指数大小比较,前4种天敌依次是黑色跳蛛、粽管巢蛛、斑管巢蛛和三突花蟹蛛。综合分析4种方法的结果,各类茶园中7种游猎蛛中竞争力强的前4种天敌分别是黑色跳蛛、粽管巢蛛、斑管巢蛛和三突花蟹蛛。本研究结果可为合理保护和充分利用游猎蛛绿色防控茶尺蠖提供重要的科学依据。

外源茉莉酸甲酯处理茶树对茶尺蠖幼虫生长的影响

研究了应用外源茉莉酸甲酯处理茶树后,对茶树叶片中脂氧合酶、多酚氧化酶和蛋白酶抑制素活性,以及对茶尺蠖幼虫中肠蛋白酶活性和生长的影响。结果表明,应用外源茉莉酸甲酯喷雾法或暴露法处理茶树,都能够诱导茶树叶片脂氧合酶、多酚氧化酶和蛋白酶抑制素活性增加,茶尺蠖幼虫中肠强碱性类胰蛋白酶活性和类胰凝乳蛋白酶活性受抑制,但弱碱性类胰蛋白酶活性未受抑制,从而导致茶尺蠖幼虫中肠内各种蛋白酶间的协调性遭到破坏,生长受阻,这可能是茉莉酸甲酯诱导茶树对茶尺蠖幼虫产生直接抗性作用的一种机制。

茶尺蠖生物学习性研究

本试验对茶尺蠖的生活习性作了进一步的研究。结果表明，茶尺蠖成虫羽化后，大多于次日晚20：00～凌晨01：00交尾，交尾高峰集中在22：00～23：00，翌日黄昏开始产卵，20：00～00：00产卵最多。不同叶位饲养幼虫对其生长发育影响很大。咀食嫩叶的幼虫生长最快，化蛹率较高；食成老叶的生长较快，化蛹率最高；而食芽头的生长最慢，化蛹率最低。

14种植物精油对茶尺蠖行为的影响

为获得能够应用于茶园茶尺蠖Ectropis obliqua"推—拉"策略的行为调节剂,在室内测定了茶尺蠖成虫对14种植物精油的趋性反应,及植物精油对茶尺蠖雌虫产卵行为的干扰作用,并采用叶碟法测定了植物精油对茶尺蠖幼虫的拒食作用。结果表明,罗勒、迷迭香、肉桂、茴香及天竺葵5种植物精油对茶尺蠖成虫表现出一定的驱避活性,并且迷迭香油和天竺葵油还能显著干扰雌虫的产卵活动。在3个浓度处理下,茴香、罗勒和藿香植物精油对茶尺蠖3龄幼虫表现出显著的拒食活性。随着精油处理浓度的升高,茶尺蠖幼虫的拒食率升高,生长率随之下降。试验结果证明迷迭香、罗勒、茴香及天竺葵等植物精油对茶尺蠖具有显著的行为调控功能,具备作为茶尺蠖防控剂开发的潜力,值得进一步研究。

应用zNose^(TM)分析被害茶树的挥发物

与传统的植物挥发物分析手段相比,zNoseTM具有采样时间短、快速分析、便于携带等不可比拟的优势。以茶树为研究对象,应用GC-MS、zNoseTM对茶尺蠖取食诱导的茶树挥发物进行了同步分析;并发挥zNoseTM采样时间短、快速分析的优势,研究了机械损伤茶树叶片后,4甲-基-3戊-烯醛、顺-3己-烯醇、顺-3-己烯醇醋酸酯等3种绿叶气味物质的释放规律。结果表明:GC-MS与zNoseTM对茶尺蠖取食诱导的茶树挥发物的定性分析结果差别不大;但两者测定茶尺蠖取食诱导的茶树挥发物中顺-3己-烯醇、苯乙腈、吲哚、反-石竹烯等4种组分的相对含量有一定差异。在此基础上,通过zNoseTM测定发现,无论磨损还是针扎损伤新叶,机械损伤的程度越大,3种绿叶气味物质的释放量越大;新、老叶片在遭受同样的机械损伤后,3种绿叶气味物质的释放不完全相同;新叶经针扎损伤后,3种绿叶气味物质释放高峰的出现时间不同。就zNoseTM在植物挥发物分析中的应用前景进行了讨论。

草间钻头蛛、大草蛉和中华通草蛉对茶尺蠖、小绿叶蝉的选择效应

室内研究了草间钻头蛛Hylyphantes graminicola雌蛛对茶尺蠖Ectropis oblique1龄幼虫和小绿叶蝉Em-poesca flavescens成虫、大草蛉Chrysopa pallens和中华通草蛉Chrysoperla sinica的2龄幼虫对茶尺蠖卵、1龄幼虫的选择捕食作用。对试验数据应用Ivelev指数、Jacobs指数和Manly指数及Murdoch作图法进行了比较分析。结果显示,草间钻头蛛对茶尺蠖1龄幼虫和小绿叶蝉成虫的选择性不明显,选择性不因猎物数量的增加而转移。而大草蛉和中华通草蛉对茶尺蠖卵均有明显的正选择效应。

不同温度下鞍形花蟹蛛亚成蛛对茶尺蠖3日龄幼虫的捕食功能

鞍形花蟹蛛(Xysticus ephippiatus Simon)是茶园害虫的重要捕食性天敌,为了明确它对茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)的控制能力,在20、25、30℃3种不同温度条件下,研究了鞍形花蟹蛛亚成蛛对茶尺蠖3日龄(1龄末2龄初)幼虫的捕食反应。结果表明,鞍形花蟹蛛雌蛛和雄蛛对茶尺蠖3日龄幼虫的捕食功能反应均符合HollingⅡ型方程,在相同温度下,捕食量随着猎物密度的增大而增加。在25℃和30℃时,雌虫的捕食上限均为68头;雄虫的捕食上限以30℃时最大,为67头。相同条件下雌、雄蛛之间的捕食量没有明显差别,而温度对鞍形花蟹蛛的捕食量有明显影响。

浙江茶尺蠖地理种群已分化成为不同种

【目的】明确茶尺蠖Ectropis obliqua Prout不同地理种群的种群分化和生殖隔离程度。【方法】对分别在浙江杭州和衢州两地田间采集的茶尺蠖杭州种群(H)和衢州种群(Q)两个种群,进行形态学鉴定、生物学特征观察以及正反交试验。【结果】形态学与生物学观察结果表明,除Q种群的体形较大和体翅颜色略深外,两个种群的外部形态、生殖器解剖结构和雌蛾产卵量等基本相同。遗传杂交试验结果表明,无论是正交还是反交,杂交后均能获得子一代(F1);与种群内自交相比,杂交后雌成虫的产卵量下降,卵的孵化率显著降低;幼虫的历期明显缩短且化蛹时间分布不规则,蛹重变轻;蛹的羽化率降低,羽化的成虫雌雄性比严重失调。【结论】茶尺蠖杭州种群(H)和衢州种群(Q)两个种群存在生殖隔离,有明显的种群分化,应属于不同种。

桦褐孔菌化学成分的研究

目的 对桦褐孔菌 Fuscoporia obliqua Fr. Te. LáT的化学成分进行系统研究。方法 采用硅胶柱层析进行分离 ,通过理化常数测定和波谱 (MS、1 H,1 3CNMR、IR)技术进行结构鉴定。结果 分析鉴定了 9个化合物 ,它们分别为 :桦褐孔菌素 (fuscoporine, )、lanosterol( )、3β- hydroxy- lanosta- 8,2 4- diene- 2 1- al( )、3β,2 1- dihydroxy- lanosta- 8,2 4- diene( )、3β- hydroxy- lanosta- 8,2 4- diene- 2 1- acid( )、3β,2 2 R- dihydroxy- lanosta- 8,2 4- diene( )、ergosterolperoxide( )、analog of sphingin( )和 mannitol( )。结论 化合物 为一新化合物 。

茶尺蠖和灰茶尺蠖幼虫及成虫的鉴别方法

茶尺蠖Ectropis obliqua和灰茶尺蠖Ectropis grisescens是茶园主要害虫,两者为近缘种,外形十分相似,难以区分。为了便于茶叶技术人员识别这两种尺蠖,本研究通过饲养观察,比较了这两种尺蠖幼虫和成虫的形态差异,提出了一种鉴别方法,即通过幼虫第2腹节背面八字形黑色斑纹的形态及该节上2对小黑点的位置进行幼虫鉴别,通过前后翅上外横线的形态进行成虫鉴别。采用分子鉴定对该方法进行了验证,结果表明该方法判别准确,且易于掌握,能准确区分茶尺蠖和灰茶尺蠖。本研究结果对这两种尺蠖的正确识别和田间防治十分有益。

苏云金杆菌与EoNPV混用的增效作用

采用生物测定方法测定茶尺蠖核型多角体病毒（Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus，EoNPV）和苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）的联合作用。5组不同含量EoNPV制剂（1．50×10^7 PIB／ml、1．25×10^7PIB／ml、1．00×10^7PIB／ml、7.50×10^6PIB／ml和5.00×10^6PIB／m1）中混合2000IU／mg Bt制剂后共毒系数在106．02至128．03之间，表明Bt与EoNPV混用具有增效作用。其中以1．00×10^7PIB／ml EoNPV制剂与2000IU／mgBt制剂混用增效作用最明显，LC50为817．03μg/ml。对2龄茶尺蠖的杀虫速度，EoNPV＋Bt制剂（1．00×10^7 PIB／ml EoNPV＋2000IU／mg Bt）的LT50较单独使用EoNPV（2．00×10^7 PIB／ml）缩短了2d，且EoNPV＋Bt制剂对茶尺蠖具有拒食作用，茶尺蠖对EoNPV＋Bt制剂处理茶树的食叶量比单独使用EoNPV制剂的食叶量减少65．9％。EoNPV＋Bt制剂对茶刺蛾、茶银尺蠖等茶树鳞翅目害虫的兼治作用分别达85．8％和88．7％。多点田间药效试验结果表明，EoNPV＋Bt制剂药后10d对茶尺蠖防效达81．80％～93．24％。

茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)的PCR检测方法及其生物活性研究

根据茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)多角体蛋白基因建立了PCR检测方法,在茶尺蠖子代卵和蛹内检测到EoNPV存在,灵敏度达到1 fg,此方法可用于田间施用EoNPV后茶尺蠖种群带毒检测。PCR方法由于操作简单、检测灵敏度高、特异性好、重复性好等优点,值得应用。利用EoNPV感染茶尺蠖2龄幼虫,幼虫对EoNPV的敏感性很高,测得LC50为2.2×104PIB.mL-l,EoNPV感染浓度越高,则幼虫死亡越快,幼虫死亡时间与感染浓度呈正相关。