大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少(P<0.05),2 d达到最低;CBD干预1 d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调(P<0.05);免疫荧光染色实验与Western blot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少(P<0.05),CBD干预2 d后Occludin和ZO-1表达水平上调(P<0.05);荧光素钠实验结果表明,TBI后脑组织BBB完整性遭到破坏,通透性升高(P<0.01),CBD干预后BBB通透性下降(P<0.05)。结论TBI后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达下降,BBB通透性升高,CBD干预可逆转TBI对BBB的破坏。

Occludin基因在猪肠道屏障中的研究进展

紧密连接蛋白与肠道疾病密切相关,由Occludin基因编码的蛋白质是紧密连接蛋白中具有代表性的蛋白之一,在维持肠道屏障功能完整中发挥重要作用。在猪肠道中,Occludin基因表达的下降会导致细胞膜通透性增加,使肠道屏障功能受损,从而引发多种肠道疾病。文章综述了肠道屏障的构成、紧密连接蛋白的分类及Occludin基因编码蛋白质的结构和生物学功能,介绍了Occludin基因在猪肠道中的表达情况和营养调控的研究进展,为预防猪腹泻、肠道炎症等疾病提供参考。

食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织(P<0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用。

大鼠心脏骤停心肺复苏后脑Occludin蛋白表达及其对血脑屏障的影响

目的 探讨大鼠心脏骤停心肺复苏后脑Occludin蛋白表达及其对血脑屏障的影响.方法 将200只Sprague-Dawley雄性大鼠根据随机数字表法分为对照组和复苏组,各100只.对照组未进行窒息及心肺复苏,仅进行麻醉和动静脉及气管插管;复苏组制作心脏骤停模型,常规心肺复苏.对照组50只大鼠术后稳定10min后和复苏组50只大鼠自主呼吸恢复（ROSC）后于2、6、12、24、48 h（每个时点10只）断头处死取脑组织,采用免疫组织化学染色方法检测脑组织Occludin蛋白的表达;对照组余50只大鼠术后稳定10 min后和复苏组余50只大鼠ROSC后于0、4、10、22、46 h（每个时点10只）经大鼠尾静脉按3 mg/kg标准注射20 g/L伊文氏蓝,在相应时点2h后断头处死取脑组织,用荧光分光光度计计算血脑屏障对伊文氏蓝的通透性.结果 对照组术后各时点Occludin蛋白表达阳性细胞数和伊文氏蓝含量差异均无统计学意义（均P＞0.05）.复苏组在ROSC后2、6、12、24、48 h Occludin蛋白表达阳性细胞数先降低后升高,各时点均明显低于对照组[（68.2±1.0）个/高倍视野比（86.8±1.3）个/高倍视野、（42.1±1.6）个/高倍视野比（85.1±2.7）个/高倍视野、（18.1 ±1.1）个/高倍视野比（84.9±2.8）个/高倍视野、（37.8±0.7）个/高倍视野比（82.1 ±3.1）个/高倍视野、（61.2±1.0）个/高倍视野比（83.8±2.5）个/高倍视野],伊文氏蓝含量先升高后降低,各时点均明显高于对照组[（0.496±0.042） μg/g比（0.245±0.012） μg/g、（0.704±0.021） μg/g比（0.236 ±0.016） μg/g、（0.898±0.047） μg/g比（0.239±0.011）μg/g、（0.874±0.035）μg/g比（0.251±0.019） μg/g、（0.692±0.036）μg/g比（0.232±0.043）μg/g],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.复苏组大鼠脑Occludin蛋白表达阳性细胞数与伊文氏蓝含量呈负相关（r=-0.862,P＜0.01）.结论 大鼠心脏骤停心肺复苏后脑Occludin蛋白表达降低,紧密连接结构受损,导致血脑屏障通透性增加.

急进高原与平原大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin表达的对比研究

目的:探讨急进高原与平原大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin在肠上皮细胞中的表达变化。方法:48只Wistar大鼠随机分为平原组(n=24)和高原缺氧组(n=24),每组再按2、4、6 d时间点随机分为3个亚组(n=8)。各组均用免疫组织化学法检测occludin蛋白表达,RT-PCR法检测occludin mRNA含量。结果:与平原组各时间点比较,高原缺氧组occludin蛋白及occludin mRNA含量显著降低(P<0.01)。结论:急进高原可使大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin表达减少,导致肠黏膜屏障损伤。

紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组（即假手术组）,每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖（LPS）浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低（P均〈0.01）.相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关（P均〈0.05）.光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.

暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降

目的:研究暴发性肝衰竭小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化.方法:BALB/c小鼠150只随机分为生理盐水对照组(n=30)、内毒素(LPS)对照组(n=30)、D-氨基半乳糖(D-GalN)对照组(n=30)和暴发性肝衰竭(LPS+GalN)组(n=60).采用D-GalN和LPS联合ip制备暴发性肝衰竭小鼠动物模型.应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中,小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位、表达及mRNA的变化.结果:occludin蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在暴发性肝衰竭组小鼠,6h时occludin的阳性染色开始减少,9h时更为明显.Westernblot结果与免疫组织化学结果相一致,6h时开始下降(0.48±0.07),9h达到最低值(0.36±0.05),与生理盐水对照组(0.71±0.09)相比差异显著(P<0.05).实时定量PCR结果显示,暴发性肝衰竭小鼠2h时occludinmRNA即开始下降(0.85±0.12),6h时达到最低值(0.72±0.04),与生理盐水对照组(1.00±0.05)相比有明显差异(P<0.05),9h时有所恢复(0.93±0.10).结论:在暴发性肝衰竭过程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降,其mRNA也呈下调趋势.

通腑理肺汤对脓毒症肠屏障损伤大鼠肠黏膜组织闭锁小带蛋白-1、闭合蛋白mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨通腑理肺汤(TFL)对脓毒症肠屏障损伤大鼠肠黏膜组织闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)mRNA及蛋白表达影响的实验研究。方法:随机抽取纯种SD大鼠40只,依次分为假手术组、模型组、TFL低剂量组和TFL高剂量组,共四组,每组10只。应用盲肠结扎穿孔(CLP)的造模方式制作脓毒症肠屏障损伤大鼠模型;假手术组只暴露盲肠,不做穿孔处理。TFL低剂量组造模成功后给予3.6 g/kg体重TFL灌胃;TFL高剂量组采用相同方法造模后,按7.2 g/kg体重TFL进行灌胃处理;模型组和假手术组按蒸馏水10 ml/kg体重灌胃,以上各组均每天干预1次,共7 d。7 d后处死各组大鼠,分离肠黏膜组织,采用RT-qPCR法检测肠黏膜组织ZO-1、Occludin mRNA基因,Western blot检测ZO-1、Occludin蛋白表达;同时取出各组相同部位的肠黏膜组织,光镜及透射电镜下观察肠黏膜组织病理及超微结构变化。结果:模型组大鼠肠黏膜组织中ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白表达对比假手术组均显著降低(P<0.05)。TFL低剂量组、高剂量组大鼠肠黏膜组织中ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白表达对比模型组均显著升高(P<0.05)。光镜下观察肠黏膜组织病理显示TFL低剂量组及高剂量组肠黏膜上皮细胞水肿、肠黏膜绒毛受损以及基底层、固有层水肿、淋巴细胞及中性粒细胞浸润明显减轻。透射电镜下肠黏膜组织超微结构亦显示TFL低剂量组及高剂量组微绒毛密集且规则,肠细胞间呈锯齿状和互锁模式,线粒体清晰,紧密连接轻微受损。结论:脓毒症肠屏障损伤大鼠模型病理损害的减轻,可能是TFL上调了肠黏膜组织紧密连接ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白的表达,改善肠上皮细胞间的紧密连接作用来实现的。

EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

目的研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对血肿瘤屏障(BTB)紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用。方法提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ0.5 h组、EMAP-Ⅱ1 h组、EMAP-Ⅱ2 h组、EMAP-Ⅱ3h组、EMAP-Ⅱ6 h组和EMAP-Ⅱ12 h组。应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性。结果与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的跨内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用1 h时效果最显著(P<0.01);同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用1 h时达峰值(P<0.01)。结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

NO体外对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响,以研究NO对肠黏膜屏障的作用机制.方法:将NO的供体Sin1与肠上皮细胞株Caco-2共培养24 h,采用MTT方法观察NO对肠上皮细胞的作用,并分别提取细胞蛋白和总RNA,采用免疫蛋白印迹(Westem blot)蛋白半定量方法和实时定量聚合酶链式反应(RO-PCR)方法检测不同NO浓度对Caco-2细胞表达紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达的影响.结果:随着Sin1浓度升高(125,250,500和1000μmol/L)NO对细胞的杀伤作用产生并逐渐增大,Occludin蛋白表达量和mRNA的相对表达量与无Sin1刺激时蛋白及mRNA的表达量相比明显降低(蛋白:375±0.5,374±0.8,363±0.3.363±0.7 vs 398±0.7;mRNA:0.689±0.01,0.578±0.09,0.554±0.03,0.619±0.04 vs 1,均P<0.01).结论:NO可直接损伤肠上皮细胞,同时以剂量依赖形式在蛋白和分子水平影响紧密连接蛋白Occludin的表达.

补肾祛痰活血汤对缺血再灌注损伤大鼠Occludin、ZO-1蛋白的调节作用

目的观察补肾祛痰活血汤对预处理脑缺血再灌注损伤的大鼠脑组织水肿、血脑屏障通透性及损伤区咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)的影响。方法 SD成年雄性大鼠50只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、治疗组、对照组,每组10只。治疗组给补肾祛痰活血汤、对照组给消栓通络胶囊,正常组、模型组、假手术组给与相应量的双蒸馏水。采用线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,72 h后,干湿重法测定脑含水量反映脑水肿程度,用免疫组织化学方法测定损伤区Occludin、ZO-1蛋白的表达量,并对各结果进行相关性分析。结果与正常组、假手术组比较,模型组、治疗组、对照组72 h时间点大鼠脑组织含水量较正常组、假手术组要增高一些,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。脑组织含水量与脑组织损伤程度正相关,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白与脑组织损伤程度呈负相关。结论补肾祛痰活血汤对缺血性脑损伤发生后损伤区Occludin、ZO-1蛋白含量降低有抑制作用,抑制血脑屏障通透性增高,减轻脑水肿形成。

黄连肉桂对自发性2型糖尿病小鼠胆汁酸代谢、肠上皮Occludin蛋白表达及小肠形态结构改变的影响

目的观察黄连肉桂通过对自发性2型糖尿病(diabetes mouse,db/db)小鼠胆汁酸代谢、肠上皮紧密连接蛋白(Occludin)表达及小肠形态结构改变的降糖机制。方法以6只db/m小鼠为空白组,30只db/db小鼠随机分成5组,每组6只;实验组分别用二甲双胍、黄连、肉桂及黄连肉桂进行干预,对照组给予等量的生理盐水,在8周测量每组小鼠的血糖同时测量小鼠空腹胰岛素;利用液相色谱法检测小鼠粪便胆汁酸的代谢含量、蛋白免疫印迹法检测回肠Occludin蛋白的表达、电镜扫描小鼠小肠形态学的改变。结果黄连肉桂可以有效改善db/db小鼠的高血糖状态、降低小鼠血糖,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05),同时可以增加db/db小鼠胆汁酸中胆酸(cholic acid,CA)、鹅去氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA)分泌,减少熊去氧胆酸(Ursodeoxy cholic acid,UDCA)分泌,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。黄连肉桂能够增加小鼠回肠Occludin蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05);还能够改善db/db小鼠肠道超微状态、增强肠道屏障作用、降低其通透性。结论黄连肉桂可以改善db/db小鼠高血糖状态,其机制可能与其可以调节胆汁酸分泌和增加肠Occludin蛋白表达,增强肠道屏障作用、降低其通透性有关。

去氢骆驼蓬碱对炎症性肠病模型小鼠的防护作用

目的探讨去氢骆驼蓬碱对炎症性肠病(IBD)模型小鼠肠道屏障的防护作用。方法将64只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白对照组(等体积水)、药物对照组(0.05 mg/mL去氢骆驼蓬碱)、模型组(等体积水)及药物观察组(0.05 mg/mL去氢骆驼蓬碱),各16只。在小鼠饮水中添加2%硫酸葡聚糖钠连续喂养7 d以复制IBD小鼠模型;期间2个对照组小鼠均饮水。建模成功后,各组小鼠连续4 d予相应药物或水。观察小鼠生存率、体质量及结肠长度变化情况。采用苏木素-伊红染色,观察小鼠结肠组织病理改变,并评分。采用Western blot法检测小鼠肠道ZO-1和Occludin蛋白表达水平。结果与模型组比较,药物观察组小鼠生存率明显升高,体质量变化率明显减小,结肠长度明显增加(P<0.05);结肠黏膜和黏膜下层上皮损伤明显减轻,炎性细胞浸润明显减少,且病理学评分明显降低(P<0.05);肠道ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论去氢骆驼蓬碱对IBD模型小鼠肠道屏障具有防护作用,其机制可能为提高ZO-1和Occludin蛋白的表达水平。

缓激肽对脑胶质瘤大鼠occludin和ZO-1 mRNA的调节和机制

目的研究缓激肽(BK)对血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白occludin和zonula occluden-1(ZO-1)mRNA表达的影响,以及转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达水平的变化,探讨CREB在缓激肽调节occludin和ZO-1转录中的作用。方法雌性Wistar大鼠112只,随机分为7组,即假手术组、模型组、BK5min组、BK10min组、BK15min组、BK30min组、BK60min组。每组16只。建立大鼠C6胶质瘤模型,颈动脉灌注BK,应用RT-PCR法检测肿瘤微血管上紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1mRNA表达水平的变化;应用Western blot法检测肿瘤微血管中CREB和p-CREB蛋白表达水平的变化。结果与假手术组和模型组相比,BK显著降低了紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1mRNA的表达水平,BK作用15min时降低最明显(P<0.01);同时发现BK作用后CREB的表达水平明显降低,BK作用15min时降低最显著(P<0.01);p-CREB的表达水平显著升高,在BK作用15min时达到峰值(P<0.01)。结论缓激肽可在转录水平上调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达;激活CREB可能是缓激肽调节occludin和ZO-1转录的机制之一。

大鼠心肺复苏后脑Occludin蛋白表达与血脑屏障及脑水肿的关系

目的探讨大鼠心搏骤停心肺复苏后脑Occludin蛋白表达的变化及其与血脑屏障和脑水肿的关系。方法选取200只雄性SD大鼠，采用随机数字表法分为A组（对照组，100只，仅行麻醉、动静脉置管及气管插管）及B组（心肺复苏组，100只，制作心搏骤停与心肺复苏模型）；A组再分为A1、A2组，B组再分为B1、B2组，各50只。A1组于术后稳定10min后、B1组于自主循环恢复（ROSC）后2、6、12、24、48h各处死10只大鼠取脑组织，用免疫组化方法检测脑组织中Occludin蛋白表达，用干湿重法测脑组织含水量。A2组于术后稳定10min后、B2组于ROSC后即刻及4、10、22、46h各取10只大鼠于经尾静脉注射伊文思兰来示踪血脑屏障，注射后2h处死大鼠取脑组织，测定脑组织中伊文氏蓝含量。结果B，组ROSC后2、6、12、24、48h，脑Occludin蛋白阳性细胞数、脑组织含水量各时点之间差异均有统计学意义[Occludin蛋白阳性细胞数：（68．2±1．0）、（42．1±1．6）、（18.1±1．1）、（37．8±0．7）、（61．2±1．0）个／高位视野，脑组织含水量：（77．4±0．7）％、（79．2±0．8）％、（80．2±0．7）％、（79．6±0．5）％、（77．2±1．2）％]（P〈0．01），各时点与A．组[Occludin蛋白阳性细胞数：（86．8±1．3）、（85．1±2．7）、（84．9±2．8）、（82．1±3．1）、（83．8±2．5）个／高位视野，脑组织含水量：（76．0±0．9）％、（75．9±0．9）％、（76．2±1．0）％、（75．9±0．9）％、（75．8±0．9）％]比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；B，组脑组织伊文氏蓝含量各时点之间差异均有统计学意义[（0．50±0．04）、（0．70±0．02）、（0．90±0．04）、（0．87±0．03）、（0．69±0．03）μg／g]（P〈0．01），各时点与A2组[（0．24±0．01）、（0．23±0．01）、（0．23±0．01）、（0．25±0．01）、（0．23±0．04）μg/g]比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。脑Occludin蛋白阳性细胞数与脑组织伊文氏蓝含量、脑组织含水量呈负相关（r=-0．862、-0．668，P〈0．01），脑组织伊文氏蓝含量与含水量呈正相关（r=0．672，P〈0．01）。结论大鼠心肺复苏后脑Occludin蛋白表达下降，血脑屏障通透性增加，脑水肿形成，ROSC后12h最明显；脑Occludin蛋白表达与血脑屏障通透性及脑水肿程度呈负相关。

血清血脑屏障标志物水平与创伤性脑损伤患儿病情严重程度及预后的相关性分析

目的 探讨并分析血清血脑屏障标志物水平与创伤性脑损伤(TBI)患儿病情程度及预后的相关性。方法 选取2019年5月至2022年8月徐州市儿童医院收治的TBI患儿92例,根据入院时格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分将其分为轻度组(28例,13~15分)、中度组(39例,9~12分)和重度组(25例,3~8分)。另选取同期该院因诊断需要行腰椎穿刺检查而脑脊液结果正常的患儿46例作为对照组。比较各组血清S100钙化蛋白B(S100B)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、紧密连接蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(claudin)-5、水通道蛋白(AQP)-4、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达水平。采用Spearman相关性分析上述指标与病情严重程度的关系。采用格拉斯哥预后量表(GOS)评分评估随访6个月后患儿预后情况,比较不同预后患儿的血清血脑屏障标志物水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价上述指标对TBI患儿预后的预测价值。结果 轻度组、中度组和重度组血清NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9和Occludin水平均高于对照组,血清claudin-5水平低于对照组(P<0.05);重度组血清NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9和Occludin水平高于轻、中度组(P<0.05),血清claudin-5水平低于轻、中度组(P<0.05);中度组和重度组血清S100B水平高于对照组和轻度组(P<0.05),重度组血清S100B水平高于中度组(P<0.05),但轻度组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman等级相关性显示,疾病严重程度均与血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、Occludin水平呈正相关(r=0.221、0.215、0.328、0.335、0.344、0.222,均P<0.05),与claudin-5呈负相关(r=-0.371,P<0.05)。随访6个月,预后良好组血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、Occludin水平均低于预后不良组(P<0.05),claudin-5水平高于预后不良组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、claudin-5、Occludin及联合检测预测TBI患儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.756、0.779、0.781、0.765、0.785、0.777和0.923,均具有较高的诊断价值。结论 血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、claudin-5、Occludin可能参与了TBI患儿病情的发展,可为TBI患儿预后评估的辅助指标。

糖尿病大鼠脑组织紧密连接蛋白Occludin表达的变化

目的研究糖尿病大鼠脑组织紧密连接蛋白Occludin表达的变化。方法 30只雄性SD大鼠随机分为糖尿病1个月组、糖尿病3个月组及正常对照组。腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,采用逆转录PCR和Western blot法检测大鼠脑组织Occludin mRNA和蛋白的水平。结果糖尿病1个月组和3个月组大鼠脑组织Occludin mRNA水平[（0.20±0.21）,（0.06±0.02）]均较正常对照组（1.00±0.00）显著降低（均P〈0.05）,且糖尿病3个月组Occludin mRNA水平明显低于糖尿病1个月组（P〈0.05）。糖尿病1个月组和3个月组大鼠脑组织Occludin蛋白水平[（0.58±0.01）,（0.29±0.01）]比正常对照组（1.02±0.06）显著降低（P〈0.05~0.01）,且糖尿病3个月组Occludin蛋白水平明显低于糖尿病1个月组（P〈0.05）。结论糖尿病大鼠脑组织Occludin表达明显降低,并随着病程延长其降低更明显;提示糖尿病使血-脑屏障受到损害。

慢病毒介导Occludin过表达影响BVDV感染BALB/c小鼠的研究

为研究紧密连接蛋白(occludin,OCLN)是否影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)在BALB/c小鼠体内的复制。构建慢病毒表达载体pLVML-Myc-bOCLN-linker-GFP-IRES-Puro,连同辅助质粒pSPAX2和pMD2.G共同转染至HEK-293T细胞中,转染48 h后收集OCLN-GFP慢病毒悬液并测定其滴度,同时以pLVML-Myc-Mcs-linker-GFP-IRES-Puro载体包装的慢病毒作为阴性对照(GFP);将4-5周龄BALB/c小鼠随机分为A(0 d)、B(4 d)、C(8 d)、D(10 d)、E(15 d)五组,每组6只,分别注射5×10^(7)IU OCLN-GFP和GFP慢病毒悬液,连续注射两次,间隔48 h,第二次注射后96 h时以1.68×10^(5) TCID_(50)/只BVDV攻毒BALB/c小鼠,分别于攻毒后0、4、8、10、15 d时,解剖小鼠并采集肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠等组织,使用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blot检测OCLN过表达情况,qRT-PCR检测不同组织中BVDV病毒载量;制作组织病理切片观察各组织病变情况。成功包装OCLN-GFP和GFP慢病毒;慢病毒感染BALB/c小鼠96 h后,OCLN-GFP慢病毒感染后OCLN mRNA和蛋白表达水平显著增加;与GFP慢病毒感染的对照组相比,OCLN-GFP慢病毒感染实验组各组织脏器中BVDV病毒载量从攻毒4 d后出现显著性增加;同时与对照组相比,BVDV攻毒后4 d,实验组小鼠肺脏及肝脏器官最早出现明显病变;BVDV攻毒8 d后,肝脏、脾脏、肺脏等器官病变程度较对照组更加严重。研究表明OCLN过表达能显著性增加BVDV在BALB/c小鼠体内的复制,BVDV感染造成的病理变化更为严重,为阐明OCLN介导BVDV复制等分子机制提供重要依据。

紧密连接蛋白Occludin表达与小鼠肠屏障功能障碍和炎性出血的关系

目的探讨紧密连接蛋白Occludin表达与小鼠肠屏障功能障碍和炎性出血的关系。方法以15只C57BL/6新生小鼠为研究对象,通过交替饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液和去离子水建立炎症性肠病模型,并根据实验设置分为对照组(正常小鼠+腹腔注射生理盐水)、模型组(模型小鼠+腹腔注射生理盐水)和Occludin转染组(模型小鼠+腹腔注射50μL Occludin过表达慢病毒载体)。注射1周后通过蛋白印迹分析各实验组小鼠体内紧密连接蛋白Occludin的表达。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒分析提取组织中促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的水平。通过异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)方法和血液中脂多糖(LPS)的浓度评估小鼠的肠屏障功能。通过免疫组织化学对小鼠肠组织进行评分。通过比较小鼠结肠长度与体重比评估结肠发育。通过逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)实时分析凋蛋白p53、Bax和Bcl-2的mRNA表达。结果模型组较对照组中Occludin的蛋白表达降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组Occludin的蛋白表达升高(P<0.05)。模型组较对照组中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组TNF-α、IL-6和IL-1β的水平降低(P<0.05)。模型组较对照组中FITC-D和LPS升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组FITC-D和LPS降低(P<0.05)。模型组较对照组中组织学评分和粪便出血评分升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组相应评分降低(P<0.05)。模型组较对照组结肠长度与体重之比值降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组比值升高(P<0.05)。模型组较对照组p53、Bax的mRNA表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组Bax的mRNA表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论紧密连接蛋白Occludin的过表达减轻了DSS引起的小鼠肠黏膜损伤,促进体内肠道形态和肠屏障完整性的更新。