目的:观察自体富血小板纤维蛋白Choukroun's PRF(Choukroun's pl at el et-ri ch fi bri n)对体外培养人脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st em cel l s,ADSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:取吸脂术者自愿捐献的脂肪组织...目的:观察自体富血小板纤维蛋白Choukroun's PRF(Choukroun's pl at el et-ri ch fi bri n)对体外培养人脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st em cel l s,ADSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:取吸脂术者自愿捐献的脂肪组织分离培养ADSCs,采用Choukroun法制备自体PRF备用,观察细胞生长情况。取第3代ADSCs分别向骨细胞、脂肪细胞、神经球细胞定向诱导分化鉴定,并行细胞表面抗原CD29、CD45、CD90流式检测鉴定。将第3代ADSCs分别采用含PRF的普通培养基(PRF组Ⅰ)和不含PRF的普通培养基(对照组Ⅰ)进行培养,观察细胞生长情况,培养1天、3天、5天、7天后采用CCK-8试剂检测细胞增殖活性。另外分别采用含PRF的成骨诱导培养基(PRF组Ⅱ)、不含PRF的成骨诱导培养基(对照组Ⅱ)及不含PRF的普通培养基(空白组)进行培养,第7天、14天、21天、28天行碱性磷酸酶活性(ALP活性)检测;诱导细胞培养后第7天、14天天各组分别行von Kossa染色观察钙结节形成情况。结果:第3代ADSCs倒置显微镜下观察大多呈梭形,向骨细胞、脂肪细胞、神经干细胞定向诱导鉴定均为阳性,流式检测鉴定CD29、CD90为阳性,CD45为阴性。CCK-8法示PRF组Ⅰ的OD值均大于对照组Ⅰ,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。ALP活性检测示PRF组Ⅱ第7天、14天、21天、28天细胞活性较对照组Ⅱ均大,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。PRF组Ⅱ成骨诱导7天后von Kossa染色阳性;14天后阳性细胞增多,对照组Ⅱ诱导7天未见钙结节,14天见少量阳性钙结节,空白组培养14天未见黑色钙结节。结论:Choukroun's PRF明显促进脂肪干细胞增殖及成骨分化,为骨组织工程提供了新的技术。PRF与干细胞共同培养可能还有许多潜在的临床及生物工程应用价值,值得进一步研究。展开更多
目的:初步探讨眼面心牙综合症(oculo-facio-cardio-dentalsyndrome,OFCD)患者牙根过度发育的机制。方法:分别取OFCD患者和正常人根尖牙乳头干细胞,通过MTT法检测增殖能力、碱性磷酸酶(alka line phosphatase,ALP)试剂盒法检测ALP活性、W...目的:初步探讨眼面心牙综合症(oculo-facio-cardio-dentalsyndrome,OFCD)患者牙根过度发育的机制。方法:分别取OFCD患者和正常人根尖牙乳头干细胞,通过MTT法检测增殖能力、碱性磷酸酶(alka line phosphatase,ALP)试剂盒法检测ALP活性、Western Blot检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和核心结合因子(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达量。结果:OFCD患者根尖牙乳头干细胞的增殖活性、ALP活性、DSP和Runx2蛋白表达量均高于正常人来源的根尖牙乳头干细胞。结论:根尖牙乳头干细胞的增殖及成牙成骨能力增强可能是导致OFCD患者牙根过度发育的原因。展开更多
目的研究iRoot BP Plus对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成牙/成骨分化的影响,初步探讨其与自噬的关系。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,制作iRoot BP Plus浸提液及条件培养基,Western b...目的研究iRoot BP Plus对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成牙/成骨分化的影响,初步探讨其与自噬的关系。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,制作iRoot BP Plus浸提液及条件培养基,Western blot筛选最佳作用浓度,碱性磷酸酶染色、qRT-PCR和Western blot观察细胞成牙/成骨相关指标的变化,Western blot检测自噬相关指标的变化。结果0.2g/L为iRoot BP Plus条件培养基的最佳作用浓度。用该浓度iRoot BP Plus条件培养基处理细胞后,细胞成牙/成骨相关指标上调。同时,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62表达下调。结论iRoot BP Plus可促进骨髓间充质干细胞成牙/成骨分化,其机制可能与激活细胞自噬水平有关。展开更多
目的检测负载骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)指节肽的二氧化钛(TiO_2)纳米管复合结构对骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响。方法通过阳极氧化法在钛片表面制备TiO_2纳米管阵列。全骨髓差速贴壁法分离培养Wis...目的检测负载骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)指节肽的二氧化钛(TiO_2)纳米管复合结构对骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响。方法通过阳极氧化法在钛片表面制备TiO_2纳米管阵列。全骨髓差速贴壁法分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞。实验组负载BMP-2指节肽TiO_2纳米管;对照组只采用TiO_2纳米管。2组纳米管钛片接种间充质干细胞培养,测定细胞增殖、碱性磷酸酶活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)RNA表达,并进行统计学分析。结果 2组细胞培养1、3、5天,细胞增殖实验组>对照组(P<0.05);2组细胞培养7、10、15天,碱性磷酸酶活性实验组>对照组(P<0.01);2组细胞培养21天后,骨钙素和骨桥蛋白的差异倍数(fold change)显示为实验组>对照组。结论 TiO_2纳米管负载BMP-2指节肽对骨髓间充质干细胞增殖和早期成骨分化的促进作用强于单纯TiO_2纳米管结构。展开更多
文摘目的:观察自体富血小板纤维蛋白Choukroun's PRF(Choukroun's pl at el et-ri ch fi bri n)对体外培养人脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st em cel l s,ADSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:取吸脂术者自愿捐献的脂肪组织分离培养ADSCs,采用Choukroun法制备自体PRF备用,观察细胞生长情况。取第3代ADSCs分别向骨细胞、脂肪细胞、神经球细胞定向诱导分化鉴定,并行细胞表面抗原CD29、CD45、CD90流式检测鉴定。将第3代ADSCs分别采用含PRF的普通培养基(PRF组Ⅰ)和不含PRF的普通培养基(对照组Ⅰ)进行培养,观察细胞生长情况,培养1天、3天、5天、7天后采用CCK-8试剂检测细胞增殖活性。另外分别采用含PRF的成骨诱导培养基(PRF组Ⅱ)、不含PRF的成骨诱导培养基(对照组Ⅱ)及不含PRF的普通培养基(空白组)进行培养,第7天、14天、21天、28天行碱性磷酸酶活性(ALP活性)检测;诱导细胞培养后第7天、14天天各组分别行von Kossa染色观察钙结节形成情况。结果:第3代ADSCs倒置显微镜下观察大多呈梭形,向骨细胞、脂肪细胞、神经干细胞定向诱导鉴定均为阳性,流式检测鉴定CD29、CD90为阳性,CD45为阴性。CCK-8法示PRF组Ⅰ的OD值均大于对照组Ⅰ,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。ALP活性检测示PRF组Ⅱ第7天、14天、21天、28天细胞活性较对照组Ⅱ均大,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。PRF组Ⅱ成骨诱导7天后von Kossa染色阳性;14天后阳性细胞增多,对照组Ⅱ诱导7天未见钙结节,14天见少量阳性钙结节,空白组培养14天未见黑色钙结节。结论:Choukroun's PRF明显促进脂肪干细胞增殖及成骨分化,为骨组织工程提供了新的技术。PRF与干细胞共同培养可能还有许多潜在的临床及生物工程应用价值,值得进一步研究。
文摘目的研究iRoot BP Plus对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成牙/成骨分化的影响,初步探讨其与自噬的关系。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,制作iRoot BP Plus浸提液及条件培养基,Western blot筛选最佳作用浓度,碱性磷酸酶染色、qRT-PCR和Western blot观察细胞成牙/成骨相关指标的变化,Western blot检测自噬相关指标的变化。结果0.2g/L为iRoot BP Plus条件培养基的最佳作用浓度。用该浓度iRoot BP Plus条件培养基处理细胞后,细胞成牙/成骨相关指标上调。同时,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62表达下调。结论iRoot BP Plus可促进骨髓间充质干细胞成牙/成骨分化,其机制可能与激活细胞自噬水平有关。
