大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立

利用BALB／c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸（okadaic acid，OA）的单克隆抗体，并以此抗体为探针建立了0A的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法——直接和间接竞争抑制性ELISA方法，2种检测方法的回归方程和相关系数分别为：y=-38．678χ＋130．01，R^2=0．9886和y=-34．212x＋83．49，R^2=0．9784，线性范围为1.56～75μg／L和0.4425μg／L，对OA的最低检出质量浓度为0．6μg／L和0．18μg／L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测，样品回收率分别为84．72％和98．38％。结果表明，此方法可满足海产品中贝类样品0A限量标准检测。

胶体金免疫层析方法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的初步研究

建立了赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的快速胶体金免疫层析检测方法。通过细胞融合,制备抗软海绵酸单克隆抗体,胶体金标记抗体,建立快速检测软海绵酸的免疫层析试纸条方法。检出限500 ng/mL(50 ng/条),探讨了影响测试方法的因素和提高灵敏度的可能手段。

腹泻性贝毒软海绵酸单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立

采用细胞融合技术制备抗赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的单克隆抗体,应用此抗体发展建立了软海绵酸的间接竞争酶联免疫检测方法。采用碳二亚胺法,将半抗原与载体蛋白偶联,得到免疫抗原和包被抗原。免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA方法筛选阳性克隆,经多次克隆化,获得了4株能稳定分泌抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠体内诱生腹水方法获得单克隆抗体,建立分析检测软海绵酸的间接竞争酶联免疫方法。最低检出限为31.2ng/ml,批内平均变异系数8.1%,回收率为87%-112%。

抗软海绵酸单克隆抗体的制备

目的 利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗软海绵酸 (OA)的单克隆抗体 (McAb)。方法 用碳化二亚胺法将半抗原OA与牛血清白蛋白 (BSA)制备成完全抗原OA -BSA ,用OA -BSA免疫BALB/c小鼠 ,使小鼠脾细胞产生抗OA的抗体。在聚乙二醇的作用下 ,使脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合在一起 ,融合后的细胞用HAT选择培养 ,最后用ELISA法筛选出分泌抗OAMcAb的杂交瘤细胞株。结果 用碳化二亚胺法成功地将微量半抗原OA与BSA和卵清白蛋白 (OVA)制成了完全抗原OA -BSA和OA -OVA。免疫小鼠血清中抗OA的抗体呈现阳性反应 ,表明小鼠脾细胞产生了抗OA的抗体。经 3次抗体检测筛选出 3株分泌抗OAMCAb的杂交瘤细胞株。结论 抗OAMcAb的成功制备为建立快速、经济的软海绵酸ELISA检测方法打下了坚实的物质基础 ,也为其它贝毒素检测方法的研究提供了可借鉴的经验。

大田软海绵酸人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

采用活化酯法将大田软海绵酸(OA)与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备免疫抗原(OA-KLH),用还原聚丙烯酰胺凝胶电泳法和红外光谱法对人工抗原的偶联效果进行分析,通过免疫兔子制备抗体,所得抗血清经Protein A凝胶层析柱纯化处理后,用紫外全波长扫描和间接竞争ELISA法验证纯化效果。结果表明,免疫抗原偶联成功并获得了高亲和力的多克隆抗血清,抗血清纯化后浓度为2.16 mg/mL,间接竞争ELISA测定其滴度为12 800、IC15为3.41 ng/mL,为建立快速、经济的检测方法打下了基础。

软海绵酸胶体金免疫检测法的建立与应用

目的建立并应用软海绵酸(OA)胶体金免疫层析检测法。方法通过纯化抗OA单抗、制备胶体金、标记单抗、制备胶体金试剂条、样品模拟提取与加标回收检测、贝类染毒提取及检测,建立和优化金标免疫层析法。结果选择30nm胶体金颗粒用于单抗标记,金标单抗浓度为200μg/mL,金标单抗包被量为2.5μL/cm,二抗包被浓度为1.0mg/mL,反应时间为3～5min,对加标贝肉和染毒贝类的检测灵敏度为25ng/mL。结论建立了可用于OA检测的胶体金免疫层析检测法,满足规定的贝类OA含量安全阈值,为腹泻性贝毒检测与食品安全检验提供了新的技术方法。

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的制备了赤潮毒素大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法用人工抗原大田软海绵酸-小牛血清蛋白偶联物(OA-BSA)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术经初筛、复筛和亚克隆,筛选到1株可稳定分泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3H4。对抗体效价、亚型、特异性、敏感性进行免疫学鉴定与分析。结果抗体亚型为IgG2b;腹水效价为1∶1.28×106;50%抑制质量浓度为2.852 ng/ml;最低检测限为0.45 ng/ml;电泳结果显示抗体,由1条重链和1条轻链组成;与OA同系物PTX1、GYM、SPT1、YTX交叉反应率为0。结论制备的OA单抗效价和特异性均较好,可用于OA的免疫学检测。

抗腹泻性贝毒软海绵酸多克隆抗体的制备与检测

制备了腹泻性贝毒软海绵酸(okadaic acid,0A)的多克隆抗体,鉴定了抗体特性。利用半抗原BSA偶联小分子毒素OA,制备完全抗原OA-BSA,免疫两只新西兰白兔,分离、纯化抗血清。用间接ELISA方法测定抗体效价,两个兔抗血清效价均达到128,000以上。IC50为2.852ng/mL。DOT BLOT测定抗体特异性,结果表明,抗体与抗原有特异性反应。试验表明,抗OA多克隆抗体制备成功,其质量较好,可用于将来的免疫检测研究。

人心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及定量检测试剂盒的研制

目的：利用抗心肌型脂肪酸结合蛋白单抗，研制定量检测心肌型脂肪酸结合蛋白（ H-FABP ）的ELISA试剂盒。方法使用基因重组H-FABP免疫小鼠，以杂交瘤技术制备特异性抗H-FABP单抗，用这些单抗研制定量检测H-FABP的ELISA 试剂盒。结果筛选获得2株稳定分泌抗H-FABP单抗的杂交瘤细胞株，研制了定量检测H-FABP的ELISA试剂盒，灵敏度达到0．2 ng/mL，线性范围0．4～25 ng/mL，r2＝0．9967，回收率在97．2％～104．5％，精密度的变异系数（CV）≤6．72％；应用此试剂盒检测健康人血浆H-FABP，含量为1．87～8．50 ng/mL。结论所研制的ELISA试剂盒有较好的灵敏度及特异性，可用于人血浆中H-FABP含量的检测。

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备、纯化及其特性

用大田软海绵酸与人IgG的偶联物OA-IgG作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过常规细胞融合技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0融合,用间接竞争ELISA方法对融合细胞所分泌抗体的特异性进行筛选。经过3次克隆,获得1株可稳定分泌抗OA的杂交瘤细胞株3C5,其染色体数为50±2,所分泌抗体属IgG1亚类,相对分子质量是159390,抗体亲和常数为9.8×108L/mol,滴度达2.56×106。

抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴。方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab’)2片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清抗体与抗OA单抗反应活性及与OA竞争活性。结果:该抗独特型抗体与抗OA单抗呈阳性反应,且可抑制抗OA单抗与固相抗原OA-OVA的结合。结论:制备的抗OA单抗的独特型抗体与OA抗原存在内影像的关系,可替代毒素用于检测。

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立

用大田软海绵酸(okadaic acid,OA)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物OA-BSA作为免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备OA单克隆抗体,并以纯化的抗体为探针建立了检测OA的快速、灵敏、简便的间接竞争ELISA(ciELISA)。回归方程和相关系数分别为:y=-0.3949x+0.6312,R2=0.9806;线性范围为0.3125~20 ng/mL;对OA的最低检出质量浓度为0.175 ng/mL;批内和批间变异系数分别为2.09%和3.27%;扇贝肉样的添加回收率为74.2%~80.8%;与鳍藻毒素(DTX1)的交叉反应(CR%)为51.82%,与石房蛤毒素(STX)无交叉反应。结果表明,建立了OA间接竞争ELISA检测方法,可用于海产品中OA残留检测。