南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的作用

目的探讨南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,以期为进一步开发南蛇藤多萜成为抗肿瘤药物奠定更加坚实的理论和实验基础。方法实验分为空白组,南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 10、20、40、80、160μmol·L;)。细胞计数试剂盒(cell count kit, CCK-8)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞增殖能力的影响,并确定南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的用药浓度,高内涵成像进一步观察南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的对BGC-823细胞分裂增殖能力的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞线粒体膜电位水平的影响,磷脂酰丝氨酸蛋白抗体-异硫氰基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluoresceine isothiocyanate/Propidium Iodide, Annexin V-FITC/PI)法检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞凋亡的影响,免疫印迹法(Western Blot)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞相关凋亡蛋白的表达水平。结果与空白组比较,随着南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物用药浓度的升高,BGC-823细胞增殖分裂能力逐渐降低(P<0.01),根据CCK-8实验结果计算出半抑制浓度(IC_(50)),筛选出新的南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 40、80、160μmol·L^(-1))。该三萜化合物还能够使线粒体膜电位水平下降,诱导细胞凋亡(P<0.05),同时抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P<0.01),促进Bcl-2相关X蛋白(BCL2-Associated X, Bax)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达(P<0.01)。结论南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物能够抑制胃癌BGC-823细胞分裂和增殖,诱导细胞凋亡,该过程可能与降低线粒体膜电位水平,同时下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

南蛇藤提取物抑制HepG2肝癌细胞增殖及黏附作用的实验研究

目的考察南蛇藤提取物对HepG2细胞增殖和黏附作用的影响及可能机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2,CCK8法考察南蛇藤提取物对HepG2肝癌细胞增殖的影响;划痕法和Transwell-migration法考察南蛇藤提取物对HepG2肝癌细胞迁移的影响;Transwell-invasion法考察南蛇藤提取物对HepG2肝癌细胞侵袭的影响;黏附实验考察南蛇藤提取物对HepG2肝癌细胞黏附的影响。Western-blot法考察南蛇藤提取物对Wnt/β-Catenin信号通路蛋白的影响。结果 0、15、30、60、120、240μg/mL南蛇藤提取物对HepG2肝癌细胞的48 h抑制率分别为(2.01±1.11)%、(19.68±9.99)%、(28.22±10.13)%、(39.73±7.74)%、(70.91±3.86)%、(77.38±3.01)%,IC50为70.36μg/mL;60μg/mL NST组迁移面积显著低于对照组(t=9.26,P<0.01);60μg/mL NST组迁移细胞数显著低于对照组(t=4.71,P<0.01);60μg/mL NST组侵袭细胞数显著低于对照组(t=2,71,P<0.01);60μg/mL NST组黏附细胞数显著低于对照组(t=7.09,P<0.01);60μg/mL南蛇藤提取物可上调β-catenin、cyclin D1、c-Myc、MMP-9和MMP-2蛋白,下调GSK-3β蛋白。结论南蛇藤提取物可抑制HepG2肝癌细胞的增殖和黏附,其作用机制可能和南蛇藤提取物抑制Wnt/β-Catenin信号通路有关。