牛膝提取物含药血清对Aβ_(1-42)诱导的神经元氧化应激和凋亡的调控机制研究

目的探讨牛膝提取物含药血清对β淀粉样蛋白_(1-42)(amyloidβ-protein_(1-42),Aβ_(1-42))诱导的神经元氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养大鼠海马神经元,分为对照组,模型组(Aβ_(1-42)诱导神经元),牛膝低、中、高剂量组(15、30、45μg/mL的牛膝提取物含药血清作用于Aβ_(1-42)诱导的神经元),si-ZBTB20-AS1组[Aβ_(1-42)诱导转染锌指和BTB结构域蛋白20的反义RNA小干扰RNA的神经元]和si-NC组(Aβ_(1-42)诱导转染乱序无意义阴性序列的神经元)。ELISA法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR法检测ZBTB20-AS1表达水平,Western blot法检测细胞增殖抗原Ki67和胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)表达水平。结果与对照组比较,模型组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均降低(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,牛膝中、高剂量组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-ZBTB20-AS1组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。结论牛膝提取物含药血清可能通过下调ZBTB20-AS1表达抑制Aβ_(1-42)诱导的海马神经元氧化应激和凋亡。

1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

法舒地尔对Aβ_(1-42)诱导的阿尔茨海默症PC12细胞的保护作用

目的探究法舒地尔对阿尔茨海默症(AD)体外模型中的Aβ_(1-42)及p-Tau蛋白在氧化应激方面的影响。方法不同浓度Aβ_(1-42)作用于PC12细胞后,用CCK8法检测Aβ_(1-42)对PC12细胞活力的影响,从而建立AD的体外细胞模型。经法舒地尔治疗后,用免疫荧光法检测p-Tau蛋白和Aβ_(1-42)的表达水平,同时检测凋亡信号调节激酶1(ASK1)表达情况。结果1.0μmol/L Aβ_(1-42)对PC12细胞的增殖活性具有抑制作用,进一步验证Aβ_(1-42)在神经细胞中的毒害作用。同时,法舒地尔的加入能够降低p-Tau蛋白和Aβ_(1-42)的表达水平,表明法舒地尔能够减轻Aβ_(1-42)对细胞的毒性作用。此外,法舒地尔通过调节细胞内信号转导通路,减少细胞凋亡和炎症反应,下调p-ASK1的表达水平,保护PC12细胞免受Aβ_(1-42)的损害。结论法舒地尔对Aβ_(1-42)诱导的阿尔茨海默症PC12细胞具有保护作用,能够抑制疾病发展中的关键病理变化。

Aβ_(1-42)诱导的阿尔茨海默病细胞模型中神经损伤及凋亡的机制

目的 使用Aβ_(1-42)诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)细胞模型,并探讨该模型中Aβ导致的神经损伤及细胞凋亡的靶向信号通路。方法 分别使用不同浓度的Aβ_(1-42)(0,0.625,1.25,2.5,5,10,20,40μmol/L)干预HT22细胞,确定建立AD细胞模型的最适浓度;随后在最适浓度干预后6,12,24,48 h观察细胞形态,检测细胞存活率,确定建立AD细胞模型的最适时间。将细胞分为AD组(20μmol/L Aβ_(1-42)+PBS)和NC组(PBS),生长对数期的HT22细胞分别干预24 h,进行后续实验。Western blot检测细胞凋亡指标(cleaved-Caspase-3)、神经营养因子(NRN1)、神经突触指标(SYP、MAP-2)的表达情况;免疫荧光检测MAP-2的表达及分布情况。生物信息学的方法预测AD相关信号通路,并通过Western blot验证ERK信号通路的磷酸化水平。结果 Aβ_(1-42)诱导HT22细胞建立AD细胞模型的最适浓度为20μmol/L,最适时间为24 h。与NC组相比,AD组cleaved-Caspase-3表达升高(P<0.01),NRN1表达降低(P<0.000 1),SYP、MAP-2表达降低(P<0.01)。生物信息学的分析显示,ERK1(MAPK3)与APP和CASP9基因表达呈正相关(r=0.634,P<0.01;r=0.513,P<0.05)。Western blot显示,与NC组相比,AD组ERK磷酸化水平较高(P<0.01)。结论 Aβ_(1-42)诱导HT22细胞建立的AD细胞模型中,引起神经损伤及细胞凋亡的机制可能通过激活ERK信号通路来实现。

血清β-淀粉样蛋白1-42、脂蛋白相关磷酸酶A2、α_(2)巨球蛋白水平与脑梗死并发血管性痴呆的关系及联合检测的预测价值

目的 探讨脑梗死并发血管性痴呆与血清β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、脂蛋白相关磷酸酶A2(LP-PLA2)、α_(2)巨球蛋白(α_(2)M)的相关性及联合检测的预测价值。方法 选取2019年1月至2023年3月宝鸡高新医院收治的201例脑梗死患者作为研究对象,根据所选患者6个月内是否并发血管性痴呆将其分为并发组(39例)和未并发组(162例)。通过单因素及多因素logistic回归分析脑梗死并发血管性痴呆与血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平的关系,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一及联合检测对脑梗死并发血管性痴呆的预测价值。结果 并发组与未并发组患者的年龄、糖尿病史、脑梗死面积、血管狭窄程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度、血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高是脑梗死并发血管性痴呆的独立危险因素(OR分别为4.614、4.362、2.497、4.246、2.425、2.568、3.080,P<0.05)。并发组血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平高于未并发组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的曲线下面积为0.910,高于血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一检测(0.736、0.772、0.737,P<0.05)。结论 脑梗死患者并发血管性痴呆可能与年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度及血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高有关,且血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的价值更高。

血清Lp-PLA2、Aβ_(1-42)联合Fazekas评分对脑小血管病认知障碍的预测价值

目的探讨血清Lp-PLA2、Aβ_(1-42)联合Fazekas评分对脑小血管病患者认知障碍的预测价值。方法选取2021年3月至2022年12月我院收治的94例脑小血管病患者,根据蒙特利尔认知评估量表评分分为认知障碍组和认知正常组,比较两组的Lp-PLA2、Aβ_(1-42)水平以及Fazekas评分,分析Lp-PLA2、Aβ_(1-42)水平联合Fazekas评分预测脑小血管病患者发生认知障碍的效能。结果认知障碍组的Lp-PLA2、Aβ_(1-42)水平及Fazekas评分均高于认知正常组(P<0.05)。ROC曲线显示,Lp-PLA2、Aβ_(1-42)水平联合Fazekas评分预测脑小血管病患者认知障碍的效能高于单一指标(P<0.05)。结论血清Lp-PLA2、Aβ_(1-42)水平联合Fazekas评分预测脑小血管病患者发生认知障碍的应用价值高。

补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:研究补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。方法:建立β-淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,采用PBS溶解的补脑软胶囊内容物干预24h,采用CCK-8法测定细胞存活率,在Hochest33258染色荧光显微镜下观察SH-SY5Y细胞凋亡情况。结果:SHSY5Y细胞经Aβ_(1-42)诱导损伤后采用补脑软胶囊干预24h,与模型组相比,用药组细胞突触结构消失减少,贴壁状态明显改善,提高了细胞存活率;Hoechst33258染色结果显示,对照组细胞呈现弥散均匀的弱荧光,而Aβ_(1-42)模型组细胞核出现固缩形态和颗粒状荧光,补脑软胶囊干预后可明显减少细胞颗粒状荧光及固缩形态,提示补脑软胶囊可有效抑制Aβ_(1-42)引起的细胞凋亡。结论:补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用。

细叶远志皂苷调控PPARγ/PGC-1α信号通路保护D-半乳糖协同Aβ_(1-42)损伤的HT-22细胞

以D-半乳糖协同Aβ_(1-42)诱导HT-22细胞损伤建立AD体外模型,旨在研究PPARγ/PGC-1α信号通路在D-半乳糖协同Aβ_(1-42)诱导HT-22细胞损伤中的作用及细叶远志皂苷的干预机制。采用MTT法检测细胞存活率;台盼蓝染料排斥实验检测细胞死亡率;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Mito-Tracker荧光标记观察线粒体损伤程度;罗丹明123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;比色法检测超微量总ATP酶含量改变;Western Blot法检测PPARγ、PGC-1α、COX-2和NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测炎性因子TNF-α和IL-6的含量。结果显示,与模型组相比,细叶远志皂苷(10、20、40μmol/L)能显著提高D-半乳糖协同Aβ1-42诱导的HT-22细胞存活率,降低β-半乳糖苷酶阳性表达,增加细胞内ATP酶活性,阻止线粒体膜电位下降,抑制炎症因子TNF-α和IL-6水平的增加,下调NF-κB和COX-2蛋白的表达同时上调HT-22细胞中PPARγ、PGC-1α蛋白的表达。结果提示细叶远志皂苷在一定剂量范围内对D-半乳糖协同Aβ_(1-42)损伤的HT-22细胞具有保护作用,其保护机制可能与上调PPARγ/PGC-1α信号通路、增强线粒体能量代谢、阻止炎症反应有关。

艾灸督脉对阿尔茨海默病患者认知功能及血浆外泌体中Aβ_(1-42)和lncRNA H19的影响

[目的]观察艾灸督脉治疗阿尔茨海默病(AD)的临床疗效,探究艾灸督脉治疗AD影响人血浆外泌体的可能作用机制。[方法]纳入AD患者和健康受试者各30例。AD组取百会、大椎、风府、命门4穴,百会隔附子饼实按灸,其余3穴温和灸,每日20 min,共治疗8周。在治疗前后采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和阿尔茨海默病评定量表-认知(ADAS-Cog)对AD患者进行认知评估,收集两组清晨空腹静脉血样本,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Aβ_(1-42)蛋白浓度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA H19相对表达量,并做双变量的Pearson线性相关分析。[结果]与治疗前相比,AD组艾灸后MoCA量表评分有显著提高(P<0.05),ADAS-cog量表评分显著降低(P<0.05)。与健康受试组相比,AD组治疗前血浆外泌体Aβ1-42及lncRNA H19表达水平均较高(P<0.05);与治疗前相比,AD组血浆外泌体中Aβ_(1-42)浓度及lncRNA H19表达水平均有所降低(P<0.05)。Pearson线性相关分析显示ADAS-cog评分与Aβ_(1-42)浓度水平、lncRNA H19相对表达量存在正相关性(P<0.05);MoCA评分与Aβ_(1-42)浓度水平、lncRNA H19相对表达量存在负相关性(P<0.05);MoCA评分与ADAS-cog评分存在较强的负相关性(P<0.05)。[结论]艾灸督脉组穴疗效确切,能够降低AD患者血浆外泌体中Aβ_(1-42)和lncRNA H19的表达水平,进而推测艾灸督脉改善认知功能可能与下调lncRNA H19的表达,促进Aβ_(1-42)的清除有关。

5-取代-1-氮杂蒽酮类衍生物A7对APPsw细胞分泌Aβ_(1-42)蛋白的抑制作用研究

目的:探讨5-取代-1-氮杂蒽酮类衍生物对过表达APPsw的SH-SY5Y细胞(简称APPsw细胞)分泌Aβ_(1-42)蛋白的影响。方法:将APPsw细胞分为四组,分别为对照组(只加入溶剂)、高剂量组(10μmol·L^(-1)衍生物)、中剂量组(1μmol·L^(-1)衍生物)、低剂量组(0.1μmol·L^(-1)衍生物)。MTT法检测细胞存活率,ELISA测定细胞外Aβ_(1-42)水平;Western Blot检测Aβ_(1-42)前体蛋白APP的表达变化。结果:5-取代-1-氮杂蒽酮类衍生物中化合物A7可剂量依赖性增加细胞活力;ELISA和Western blot结果显示,A7可剂量依赖性减少APPsw细胞外Aβ_(1-42)蛋白水平和前体蛋白APP表达,高剂量A7可使显著性下调Aβ_(1-42)蛋白分泌(P<0.05),降低前体蛋白APP表达(P<0.05)。结论:5-取代-1-氮杂蒽酮类衍生物A7可以抑制APPsw细胞中Aβ_(1-42)蛋白的表达。

芥子酸对Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的改善作用及对BDNF/TrkB/ERK信号通路的影响

目的:研究芥子酸对β-淀粉样蛋白1-4(2 Aβ_(1-42))诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的改善作用,并探讨其对脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶B(TrkB)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:将PC12细胞分为空白组、模型组和芥子酸低、高剂量组(50、100μmol/L)。除空白组外,其余各组均用2μmol/L的Aβ_(1-42)诱导细胞损伤;建模24 h后,药物组加入相应药液,培养24 h。观察各组细胞形态变化,检测细胞存活率和细胞中BDNF mRNA的表达情况及其蛋白水平,以及TrkB、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达情况,并计算p-ERK1/2与ERK1/2的比值(p-ERK/ERK比值)。结果:与空白组比较,模型组细胞突触变短,细胞连接较松,贴壁性差,胞质较暗淡,胞浆中有较多颗粒,细胞存活率以及细胞中BDNF mRNA的相对表达量及其蛋白水平,TrkB、p-ERK1/2蛋白的相对表达量和p-ERK/ERK比值均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,芥子酸高剂量组细胞病理变化明显改善,细胞存活率以及细胞中BDNF mRNA的相对表达量及其蛋白水平,TrkB、p-ERK蛋白的相对表达量和p-ERK/ERK比值均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:芥子酸可改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞损伤,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/ERK信号通路有关。

原花青素抑制Aβ_(25-35)诱导的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y分泌Aβ_(1-42)

目的研究原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ_(25-35))诱导的人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)淀粉样肽产生的影响及可能的作用机制。方法以Aβ_(25-35)体外处理SH-SY5Y细胞诱导细胞损伤模型,应用PC和(或)Wnt/β-catenin信号通路的内源性抑制剂分泌型蛋白Dickkopf-1(Dkk1)干预。设立对照组、Aβ_(25-35)组、不同浓度PC+Aβ_(25-35)组、Dkk1组和Dkk1+PC+Aβ_(25-35)组。MTT法检测细胞活力;Western blot检测β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平;ELISA检测Aβ_(1-42)分泌水平。结果与对照组相比,Aβ_(25-35)可使细胞活力降低(P<0.05),可降低细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05),增加细胞中Aβ_(1-42)分泌(P<0.05)。PC干预可改善Aβ_(25-35)导致的细胞活力降低(P<0.05),增加细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05),减少Aβ_(1-42)分泌(P<0.05)。应用Dkk1后,PC提高细胞中β-catenin蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平及降低Aβ_(1-42)分泌水平的能力下降(P<0.05)。结论PC可抑制Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞Aβ_(1-42)生成,该作用可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

铅暴露加重Aβ_(1-42)处理的小胶质细胞活化和小胶质细胞中的铜离子蓄积

目的探讨铜离子在铅(Pb)加重Aβ_(1-42)处理的小胶质细胞活化及神经元损伤中的作用,以揭示铅加重阿尔兹海默症(AD)样变的调控机制。方法将BV2细胞分为Control组(不予任何处理)、Aβ_(1-42)组(5、10、15、20μmol/LAβ_(1-42)处理12 h)、Pb组(5、10、15、20μmol/L Pb处理12 h)和Aβ_(1-42)+Pb组(10μmol/LAβ_(1-42)+10μmol/L Pb处理12 h)。CCK8检测细胞活力,相差显微镜观察细胞形态学改变,细胞免疫荧光检测iNOS释放及氧化应激情况,ELISA检测小胶质细胞的炎性因子释放情况,Western blot检测CTR1和ATP7A蛋白表达量,ICP-MS检测细胞铜含量。结果15μmol/L和20μmol/L的Aβ_(1-42)处理BV2细胞12 h可降低其生长活力(P<0.05和P<0.01);与对照组相比,10μmol/L Aβ_(1-42)处理BV2细胞12 h可引起iNOS、炎性因子TNF-α和IL-6释放增加(P<0.05);10μmol/LAβ_(1-42)联合15μmol/L和20μmol/L的铅处理BV2细胞可影响其生长活力(P<0.05);与10μmol/L Aβ_(1-42)单独处理组相比,10μmol/L铅与10μmol/LAβ_(1-42)联合处理BV2细胞12h可使激活的小胶质细胞增多,具体表现为BV2细胞形态呈现胞体增大、突起增多且细长,iNOS、炎性因子TNF-α和IL-6、IL-1β释放增加(P<0.05),细胞ROS释放增多,细胞内铜离子蓄积(P<0.001),铜转运蛋白CTR1表达水平上升(P<0.05);BV2细胞的激活明显降低了海马神经元HT22细胞生长活力(P<0.001);与Aβ_(1-42)+Pb组相比,在使用抗氧化剂NAC和铜螯合剂TM后,激活的小胶质细胞減少,且对神经元细胞的生长活力损伤有所减轻(P<0.05)。结论铅暴露加重了Aβ_(1-42)处理的小胶质细胞造成的神经元损伤,与铅加重Aβ1-42处理的小胶质细胞铜离子蓄积,氧化应激,炎性因子释放增加,引发小胶质细胞活化有关。

Aβ_(1-42)对大鼠小胶质细胞酸敏感离子通道的表达和电生理特性的影响

Aβ_(1-42)与小胶质细胞之间相互作用诱发的神经炎症反应已被视为阿尔茨海默病(AD)的重要病理指征,酸敏感离子通道(ASIC)参与了小胶质细胞的炎症应答和神经炎症免疫调节。为了探究Aβ_(1-42)对小胶质细胞ASIC的表达和电生理特性的影响,本研究利用Aβ_(1-42)孵育原代培养的SD大鼠大脑皮层小胶质细胞,免疫印迹技术和免疫荧光技术检测小胶质细胞ASIC1、ASIC2a、ASIC3的蛋白表达和分布情况,全细胞膜片钳记录Aβ_(1-42)对ASIC电流特性的影响,钙离子成像技术分析ASIC钙离子通透性的变化。结果显示:Aβ_(1-42)处理小胶质细胞后,能够诱导ASIC1的蛋白表达量增加,且其在细胞浆和细胞核中均有明显增加;胞外pH值快速降低诱发的ASIC电流,小胶质细胞胞内钙离子浓度明显增强,这种增强效应可被ASIC非特异性抑制剂阿米洛利和ASIC1特异性抑制剂PcTx1抑制。本研究结果表明,Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞ASIC1蛋白功能性表达增加,使得ASIC1易于被胞外快速酸化激活而表现出明显增强的电生理特性,进而影响小胶质细胞的炎症应答和免疫调节作用,为后续探究小胶质细胞感应通路和应答调节及神经退行性疾病发生提供了思路和参考。

GPR30激动剂对Aβ_(1-42)所致认知功能障碍的治疗作用及其机制研究

目的探讨G蛋白耦联受体30(G protein coupled receptor 30,GPR30)激动剂对β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)_(1-42)所致小鼠认知功能障碍的治疗作用。方法将72只ICR小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组、G1低剂量组、G1中剂量组和G1高剂量组。采用双侧海马脑立体定位注射Aβ_(1-42)建立阿尔茨海默病认知功能障碍模型,48h后给予GPR30激动剂G1(1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg)。进行Morris水迷宫实验、避暗实验和新物体识别实验测试小鼠的认知能力,采用蛋白质印迹法检测小鼠海马组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、cAMP效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、p-CREB的表达水平。结果Morris水迷宫实验中,G1高剂量组小鼠的目标象限停留时间百分比和穿越平台次数显著高于模型组(P<0.05);避暗实验中,G1中、高剂量组小鼠的错误次数均显著少于模型组(P<0.05),避暗潜伏期均显著长于模型组(P<0.05);新物体识别实验中,G1中、高剂量组小鼠的识别指数均显著高于模型组(P<0.05)。G1高剂量组小鼠海马组织中的p-CREB/CREB、mBDNF/proBDNF、Bcl-2/Bax的比例显著高于模型组(P<0.05),活化的caspase-3/pro-caspase-3的比例显著低于模型组(P<0.05)。结论GPR30激动剂可通过激活CREB/BDNF通路对Aβ_(1-42)诱导的小鼠认知障碍和神经元凋亡产生保护作用。

固本健脑液对APP/PS1小鼠肠道菌群与肠道ZO-1、occludin及海马Aβ与形态学的影响

目的基于“肠-脑轴”途径探讨固本健脑液调控Aβ沉积防治AD的作用机制。方法6月龄APP/PS1小鼠70只,其中40只APP/PS1小鼠与C57BL/6J小鼠10只随机分为5组,每组10只,分别给予各药物干预组相应的固本健脑液灌胃,Control组和Model组给予等容积的纯水灌胃,持续12周,同时制备每组粪菌混悬液;另取30只APP/PS1小鼠先进行肠道脱菌处理(GF组),C57BL/6J为空白对照组(Control组),10只,后进行粪菌移植,给予GF组实验第一部分的粪菌混悬液灌胃,Control组给予等容积的纯水灌胃,持续8周。行Morris水迷宫评价各组小鼠学习记忆能力;16SrRNA技术检测各组小鼠肠道菌群差异;HE染色观察各组小鼠海马组织形态;Western Blot检测Zo-1、occludin、Aβ_(1-42)的表达。结果与空白对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著增加,穿越原平台次数和在目标象限停留时间都明显减少;与模型组比较,各治疗组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著减少,穿越原平台次数和在目标象限停留时间都明显增加。与空白对照组相比,模型组小鼠拟杆菌门、乳杆菌科、乳杆菌属和拟杆菌属下调,而变形菌门、脱硫弧菌科、幽门螺杆菌属上调。与模型组比较,各治疗组小鼠拟杆菌门、乳杆菌科、乳杆菌属和拟杆菌属上调,而变形菌门、脱硫弧菌科、幽门螺杆菌属下调。HE染色结果示模型组海马神经元数量出现明显减少,而各治疗组明显增多。模型组海马Aβ_(1-42)蛋白表达量有明显升高,而Zo-1、occludin蛋白表达量都有明显降低,各治疗组Aβ_(1-42)蛋白表达降低,Zo-1、occludin蛋白表达升高。结论固本健脑液能通过改变APP/PS1小鼠肠道菌群的丰度和多样性以及改善肠道炎症,从而改善AD小鼠海马Aβ沉积及海马神经元形态和数量,提升小鼠学习记忆能力。

误诊为阿尔茨海默病的麻痹性痴呆1例报告

目的探讨以痴呆、精神行为异常起病的麻痹性痴呆(GPI)与阿尔茨海默病的鉴别诊断。方法报告1例以痴呆、精神障碍起病的麻痹性痴呆患者的临床资料及诊疗过程,供临床诊疗参考。患者男,56岁,因认知功能下降,门诊完善认知测评、头颅MRI等检查,考虑阿尔茨海默病。结果因患者认知障碍症状加重,合并精神行为异常,住院行血液及脑脊液梅毒相关抗体检测提示阳性,诊断为麻痹性痴呆。本病例发病年龄晚,合并脑萎缩,易与AD混淆,完善脑脊液Aβ_(1-42)减低,Aβ_(1-42)/Aβ_(1-40)减低。结论门诊就诊的认知障碍患者需常规筛查梅毒血清抗体,Aβ_(1-42)可能与GPI存在密切关系。

索马鲁肽对转基因APP/PS1/tau阿尔茨海默病小鼠认知功能的影响

目的探究索马鲁肽能否有效改善阿尔茨海默病(AD)转基因APP/PS1/tau小鼠的认知功能。方法本研究选用的AD模型小鼠是含有PS1M146V、APPSwe和tauP301L 3个基因突变位点的APP/PS1/tau三重转基因AD小鼠(3×Tg-AD)。7月龄的APP/PS1/tau三重转基因小鼠及同窝非转基因野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠分别随机分为:AD模型组(Tg)和索马鲁肽组(Tg+Semaglutide)、正常对照组(WT)和索马鲁肽对照组(WT+Semaglutide)。WT+Semaglutide组和Tg+Semaglutide组腹腔注射索马鲁肽,WT组和Tg组腹腔注射等量生理盐水,小鼠干预30次,每2 d干预一次。干预结束后进行新物体识别实验研究小鼠认知功能的改变,行ELISA实验检测小鼠血清中与认知相关的标志物Aβ_(1-42)的水平,采用Western blot法检测小鼠海马区Ser231位点磷酸化的Tau蛋白表达。结果新物体识别实验中,与Tg组相比,Tg+Semaglutide组新物体分辨率更高(P<0.05);与WT组相比,WT+Semaglutide组分辨率更高(P<0.05)。干预结束后(9月龄),各组间小鼠体质量及血糖浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹法实验中,与Tg组相比,Tg+Semaglutide组Tau231磷酸化水平降低(P<0.05);与WT组相比,WT+Semaglutide组Tau231磷酸化水平也略降低,但组间差异无统计学意义。酶联免疫吸附法实验中,与Tg组相比,Tg+Semaglutide组Aβ_(1-42)浓度降低(P<0.05);与WT组相比,WT+Semaglutide组Aβ_(1-42)浓度也降低(P<0.05)。结论索马鲁肽可降低AD小鼠血清中与认知相关的标志物Aβ_(1-42)水平和海马区Ser231位点磷酸化的Tau蛋白表达,能有效改善AD小鼠的认知功能,且索马鲁肽对小鼠体质量及血糖的影响在短时间里未见明显变化,安全性较高。

50 Hz工频电磁场致职业暴露人群短时记忆力降低与外周血中Aβ_(1-42)蛋白浓度关系的研究

目的 研究50 Hz工频电磁场致职业暴露人群短时记忆力降低与外周血中Aβ_(1-42)(beta-amyloid peptide 1-42)蛋白浓度的关系。方法 选取51名火电厂电气运行人员为暴露组,26名同厂行政办公人员为对照组,两组人员均进行短时记忆力测试,同时测定外周血中Aβ_(1-42)蛋白浓度,比较两组中相关指标的差异及相关性。结果 暴露组8 h时间加权平均电场强度为1.690 kV/m,磁场强度为4.578μT。对照组8 h时间加权平均电场强度为0.008 kV/m,磁场强度为0.026μT。两组人员数字跨度得分暴露组低于对照组(t=3.702,P<0.001);暴露组失眠出现率(15.69%)和记忆力减退出现率(21.57%)均高于对照组(均有P<0.05);三项情感状态指标得分暴露组低于对照组:愤怒-敌意(t=2.239,P=0.028)、疲劳-惰性(t=2.024,P=0.047)、困惑-迷茫(t=2.489,P=0.015);外周血中Aβ_(1-42)蛋白浓度(pg/mL)暴露组高于对照组(t=-2.414,P=0.018)。数字跨度得分与Aβ_(1-42)蛋白浓度的变化并未发现相关关系(r=-0.173,P=0.133)。结论 50 Hz工频电磁场可致职业人群短时记忆力损伤,并引起外周血中Aβ_(1-42)蛋白浓度变化,但两者之间是否存在因果关系尚需进一步研究确定。

红参-制何首乌药对对神经细胞保护作用的谱效关系

目的建立红参-制何首乌药对不同提取工艺的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱,并研究其对Aβ_(1-42)诱导HT22细胞模型保护作用的谱效关系。方法制备红参-制何首乌药对30%乙醇回流提取物、30%乙醇渗漉提取物、70%乙醇回流提取物、70%乙醇渗漉提取物和水提取物。采用UHPLC法进行测定并结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立不同工艺提取物的UHPLC指纹图谱,并进行共有峰指认。采用Aβ_(1-42)诱导海马神经元HT22细胞,利用MTT法评估不同工艺提取物对模型的保护,考察红参-制何首乌药对不同提取工艺对神经细胞的保护作用;采用灰色关联度分析法、偏最小二乘法(PLS)分析不同提取工艺UHPLC指纹图谱中共有峰与神经细胞保护的相关性。结果红参-制何首乌药对不同提取工艺有19个共有峰,通过化学对照品指认13个成分。经灰色关联度分析发现,14个共有峰与神经细胞保护的关联度均大于0.6,呈相关性。经PLS分析发现10个成分对神经细胞保护作用的影响较大。结论建立红参-制何首乌药对不同提取工艺UHPLC指纹图谱并指认了19个共有峰成分;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、20(S)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd和14、17、18号峰所代表的化学成分可能是神经细胞保护作用的药效物质。