郑丰5号α-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析

α-醇溶蛋白是小麦籽粒贮藏蛋白的重要组分,其组成与含量对小麦加工品质具有重要影响。利用PCR从郑丰5号基因组中克隆α-醇溶蛋白基因,并对其序列进行分析。经克隆共获得32个α-醇溶蛋白新基因(ZF5A-1～ZF5A-32,GenBank注册序列号为JX828280～JX828311),其中15个为假基因,17个(ZF5A-1～ZF5A-17)具有完整开放阅读框。17个α-醇溶蛋白新基因中,除ZF5A-1、ZF5A-3、ZF5A-6、ZF5A-9、ZF5A-10、ZF5A-11、ZF5A-15编码的蛋白在特征Ⅱ区含有1个额外的半胱氨酸(C)外,其他10个基因编码的蛋白均具有α-醇溶蛋白的典型结构。根据推断氨基酸序列中4种主要T细胞优势多肽的分布及多聚谷氨酰胺区的长度,推测ZF5A-7和ZF5A-12可能定位于6A染色体,ZF5A-4、ZF5A-13、ZF5A-14和ZF5A-17可能定位于6B染色体,而ZF5A-1～ZF5A-3、ZF5A-5、ZF5A-6、ZF5A-8～ZF5A-11、ZF5A-15和ZF5A-16可能定位于6D染色体。17个新克隆α-醇溶蛋白基因及4个已知α-醇溶蛋白基因编码的蛋白的二级结构预测结果表明:α-螺旋、β-折叠的位置和核心序列是相对保守的,但不同蛋白α-螺旋和β-折叠的数量以及参与形成同一保守区域α-螺旋和β-折叠的氨基酸残基数却并不相同。克隆的17个α-醇溶蛋白基因中,除ZF5A-17编码的蛋白缺少α-螺旋(H2)、ZF5A-2、ZF5A-8编码的蛋白在特征区Ⅰ均存在1个额外的α-螺旋(HE1)、GQ891685和ZF5A-15编码的蛋白在多聚谷氨酰胺Ⅱ区存在1个额外的α-螺旋(HE2)外,5个保守的α-螺旋(H1～H5)恒定出现在其他基因的2个谷氨酰胺重复区和特征区中;此外,在C-末端特征区大部分基因(61.11%)还形成1个β-折叠结构(E)。郑丰5号中具有较多额外半胱氨酸、α-螺旋和β-折叠的α-醇溶蛋白基因,可能与其良好的加工品质密切相关。

阿司匹林相关小麦依赖运动诱发过敏性休克:20例回顾性分析

目的：分析阿司匹林相关小麦依赖运动诱发过敏性休克（aspirin related wheat-dependant exercise-induced anaphylaxis，aspirin related，WDEIA）患者临床特点。方法回顾性分析2008年9月至2013年12月北京协和医院变态反应科确诊的20例阿司匹林相关 WDEIA 病例资料。结果20例患者中男13例，女7例；平均发病年龄为55（41～70）岁；常规服用阿司匹林40～150 mg/d。70％（14/20）合并慢性荨麻疹，40％（8/20）常规服用阿司匹林后原有荨麻疹症状加重或休克频率增加。20例患者均检测了3种小麦蛋白（水溶蛋白、面筋、ω-5醇溶蛋白）特异性 IgE（specific IgE，sIgE），阳性率分别为50％（10/20）、90％（18/20）和100％（20/20）。在有详细病史记录的50次过敏性休克中，62％（31/50）发生在运动过程中；12％（6/50）休克发作与运动无关，加重因素仅有阿司匹林。84％（42/50）表现为重度过敏性休克。14例患者有随访记录，其中50％（7/14）确诊后停用阿司匹林并严格禁食小麦类食物未再次发作休克；29％（4/14）仅停用阿司匹林，进食面食后避免剧烈运动，未再次发作荨麻疹或严重过敏反应；21％（3/14）患者仅严格禁食小麦制品未停用阿司匹林，无荨麻疹或过敏性休克发作。结论低剂量阿司匹林可诱发或加重食物诱发过敏性休克症状，阿司匹林相关 WDEIA 患者停用阿司匹林并严格禁食小麦制品可避免休克发作。

小麦相关蛋白特异性IgE检测在小麦依赖-运动诱发的严重过敏反应中的诊断价值

目的评估不同小麦相关蛋白过敏原在小麦依赖-运动诱发的过敏反应(wheat-dependent exercise-induced anaphylaxis,WDEIA)诊断中的临床价值,完善WDEIA的实验室诊断方法。方法收集31例疑似WDEIA患者,总结临床信息,检测小麦相关蛋白特异性IgE抗体,统计分析不同小麦相关蛋白特异性IgE抗体在WDEIA诊断中的灵敏度和特异度。结果31例患者均曾在运动时发生严重过敏反应,有13例随访期间过敏,可诊断为WDEIA。小麦相关蛋白特异性IgE检测显示,20例患者有阳性反应,其中阳性率最高的为3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),其次为ω-5醇溶蛋白和小麦花粉提取物。上述3种蛋白诊断性分析的灵敏度分别为53.8%、53.8%、23.1%;特异度分别为66.7%、88.3%、88.9%。ω-5醇溶蛋白联合小麦花粉提取物的灵敏度(76.9%)和特异度(72.2%)均较高。结论WDEIA是一种罕见的严重过敏性疾病,以颜面水肿、全身性皮疹、呼吸困难、腹痛腹泻、冷汗和晕厥为主要表现。临床病史及随访对WDEIA的诊断至关重要,而小麦相关蛋白特异性IgE检测可为诊断WDEIA提供参考,其中ω-5醇溶蛋白和小麦花粉提取物联合检测具有最高的诊断价值。