泌尿生殖道沙眼衣原体omp1基因多态性研究

从中国不同城市收集疑为沙眼衣原体(Ct)感染的泌尿生殖道标本323份,巢式PCR扩增Ctomp1基因片段(包括4个变异区),测定其中96份阳性标本omp1基因序列,根据同源性分型并分析其多态位点;根据氨基酸序列,用Mega 3软件构建进化树,分析临床株与相应参考株之间的亲缘关系。从96份沙眼衣原体阳性标本中,检出28种基因变体,其中E型最常见;同时发现Ct E、F型omp1基因高度保守,而其它基因型都显示一定的变异性。进化树分析发现,各临床株与相应参考株之间遗传距离较近。实验结果表明沙眼衣原体omp1基因呈现较大的多态性,可为其疫苗的研制及感染的防治提供重要的实验依据。

沙眼衣原体15个血清型omp1基因的VS1和VS2区序列分析

目的比较分析沙眼衣原体15个血清型omp1基因VS1和VS2序列的同源性和变异性。方法巢式PCR扩增VS1-VS2基因，自动测序仪测定核苷酸序列，DNAstar生物软件进行比对分析。结果15个血清型沙眼衣原体扩增出大小453bp的VS1-VS2基因。VS1区域序列比对显示血清群B和中间群的VS1核苷酸序列相对保守，而血清群C各型VS1区域表现出较大的核苷酸变异，型间显示1～9个核苷酸替换，且发生在中心区域。血清型VS2序列较VS1存在更多的变异，血清群B中各血清型间均存在2～19个核苷酸的改变，血清群C表现为4～8个核苷酸差异，中间群的F和G型之间存在6个核苷酸差异。结论阐明VS1和VS2区核苷酸的多态性，为下一步进行该蛋白表达和构建寡核苷酸型特异性探针奠定了基础。

基于Omp1基因的泌尿生殖道感染沙眼衣原体多样性及分布特征分析

目的基于主要外膜蛋白基因(Omp1)研究泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体多态性及分布特征,为该疾病的诊治及疫苗研究奠定基础。方法对泌尿生殖道感染临床标本常规处理后,使用沙眼衣原体核酸检测试剂盒筛选阳性标本,然后以巢式PCR扩增Omp1基因,选择4个限制性内切酶进行RFLP分析确定其基因型,选择代表菌株测定Omp1的DNA序列并与参比菌株比较确定其血清型,最后将基因型及血清型与患者的性别、科室及年龄进行对比分析,研究其分布特征。结果 2013-2014年2年间共筛选得到178份阳性标本,61份标本扩增获得Omp1基因,Omp1-PFLP分析将61份标本分为6个基因型,占比分别为24.59%,24.59%,4.92%,9.84%,3.28%和32.79%,血清型分析表明61份标本属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多。结论本地区引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体主要属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多,基因型及血清型与患者性别具有相关性,与科室、年龄无相关性。

F型沙眼衣原体主外膜蛋白基因omp1原核表达及其序列分析

目的对F型沙眼衣原体主外膜蛋白(MOMP)基因进行原核表达,获得omp1基因重组蛋白,并对克隆到的基因进行序列分析,为F型沙眼衣原体的诊断及疫苗研究奠定基础。方法利用PCR技术从沙眼衣原体阳性病人尿道拭子标本中扩增omp1基因,分析序列,并定向克隆入原核表达载体pGEX-5X3中,与GST进行融合表达。结果对克隆到的沙眼衣原体omp1基因进行序列分析,基因序列与F型沙眼衣原体F/IC-CAL3相似性达99%,构建Omp1-pGEX-5X3重组质粒,omp1与GST融合表达。结论成功构建F型沙眼衣原体omp1基因原核表达系统,得到重组蛋白,为沙眼衣原体疫苗的研究和临床检测试剂盒的研制打下基础。

中国南方部分城市泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型研究

目的 了解中国南方4个城市性病高危人群中沙眼衣原体（Ct）基因型的分布特征。方法 从衡阳、上海、广州、江门四个城市的性病门诊收集1180份泌尿生殖道标本，经质粒PCR筛选后，阳性者用巢式PCR扩增Ctompl基因片段，酶切omp1扩增产物，分析Ct各临床株omp1基因的限制性片段长度多态性（RFLP），将临床株分型。结果 Ct质粒PCR阳性者301份，用于分型者286份。通过RFLP分型，共检出10个基因型，其中常见的是E（30．8％）、J（23．8％）、D（17．5％）、F（10．5％）、G（6．2％）型，并且不同城市间基因型的分布差异无统计学意义（r=0．981，P〉0．05）。结论 4个城市存在Ct多种基因型，并且基因型的分布大致相同。