副猪嗜血杆菌OMP2基因的克隆及蛋白结构预测

根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌(HPS)全基因组序列中的外膜蛋白OMP2基因的核苷酸序列,利用Premier Primer5.0和Oligo6.0软件设计1对特异性引物,对从贵州省分离的HPS的OMP2基因进行扩增、克隆、测序和生物信息学分析。测序结果比表明,扩增的HPS分离菌株目的基因长度为1092bp,共编码363个氨基酸,与GenBank上公布的SH0165株(NC_011852)中对应的核苷酸序列同源性为99.8%,氨基酸同源性100%。生物信息学分析结果表明,OMP2外膜蛋白的分子质量为39087.45Daltons,理论等电点pI为9.21,不稳定系数为16.73,推测其为稳定性蛋白;脂肪指数为70.63,总体平均亲水性为-0.494,推测该蛋白是一种亲水性蛋白;该蛋白含有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,柔性区域较多,呈散在分布,有8个主要的抗原表位;OMP2外膜蛋白序列最前端的19个N-末端氨基酸残基为信号肽序列,最佳切割位点在19～20个氨基酸,且信号肽区域主要为疏水性氨基酸;该蛋白无跨膜区;预测OMP2外膜蛋白可能含有4个N-糖基化位点、1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点、7个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、9个N-肉豆蔻酰化位点。

新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因的克隆与表达

以表达新疆绵羊种布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和分子疫苗的可能性。采用PCR扩增技术,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组DNA中扩增出OMP2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PE-28a(+),构建成重组质粒,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测有无蛋白的表达。结果表明,获得长约1 083bp的PCR片段,序列分析结果与已知绵羊种OMP2b同源性达89.72%;SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量39 ku获得了新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。

新疆绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP2b的克隆与表达

表达新疆绵羊布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP3b的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和亚单位疫苗的可能性。采用PCR方法,从新疆绵羊布鲁氏菌基因组DNA中扩增出omp2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PET-28a(+),构建成重组质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测。结果表明,获得长约1083bp的PCR片段,序列分析结果与已知绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP2b同源性达89.72%;SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子质量39ku处有表达带。获得了新疆绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白omp2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。

沙眼衣原体60 kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 克隆和表达沙眼衣原体 60kDa外膜蛋白 (Omp2 )基因。 方法 D型沙眼衣原体感染McCoy细胞后 ,抽提基因组DNA ,经PCR扩增出omp2基因片段 ,与 pUCm -T克隆载体连接 ,酶切纯化后克隆到原核表达载体pQE3 0 ,构建重组表达载体 pQE3 0 omp2 ,PCR、酶切及测序鉴定。IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE检测有无蛋白的表达。 结果 (1)获得长约 165 0bp的PCR产物 ,酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了omp2基因 ,序列分析结果与已知omp2序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 60kDa处有表达条带 ;(3 )诱导表达之菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要以包涵体形式存在。 结论 获得了Ctomp2基因片段 ,并在E .coliM