幽门螺杆菌外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因原核表达系统的构建与鉴定

目的:构建表达幽门螺杆菌(Hp)的外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因的重组蛋白质候选菌株,为Hp疫苗研究提供依据.方法:用PCR方法扩增出带3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因omp22-hpaA,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中转化大肠杆菌(E.coliTB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western Blot鉴定其免疫原性.结果:测序结果显示,omp22-hpaA融合基因片段由1326bp组成,为编码440个氨基酸残基的多肽,接头序列GGTGGAGGC已成功地插入omp22-hpaA融合基因中;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为53ku,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的20%.结论:成功克隆并构建了omp22-hpaA融合基因原核表达系统.

幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22克隆、表达和鉴定

目的:克隆幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22,构建幽门螺杆菌omp22基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据。方法:利用PCR技术从Helicobacter pylori郑州分离株MEL-Hp27染色体DNA上扩增omp22基因,并将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western blot鉴定其免疫原性。结果:PCR方法扩增的omp22基因长度约为540 bp。经酶切鉴定,插入到表达载体的基因片段与预期目的DNA片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为22 ku,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的26%。结论:成功克隆并构建了omp22基因高效原核表达系统,为幽门螺杆菌基因工程组分疫苗的研究奠定基础。

牛布鲁氏杆菌外膜蛋白Omp22的原核表达及反应原性鉴定

为了制备牛布鲁氏杆菌外膜蛋白Omp22的抗原,试验采用PCR技术扩增Omp22基因;通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET28a(+)-Omp22;应用SDS-PAGE对重组质粒pET28a(+)-Omp22的表达进行鉴定;采用Western-blot方法对表达的重组蛋白Omp22与布鲁氏杆菌阳性血清的反应原性进行分析。结果表明:PCR扩增得到Omp22基因,其大小为639 bp,共编码213个氨基酸,并成功构建重组质粒pET28a(+)-Omp22;该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得表达,表达的重组蛋白Omp22能与布鲁氏杆菌阳性血清发生特异性反应。说明重组蛋白Omp22具有良好的反应原性,为后续开发诊断抗体的试剂盒奠定了基础。