广东与四川地区发病猪副猪嗜血杆菌分离株omp5基因的克隆及序列分析

为了比较副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P5(omp5)基因的同源性及抗原性,试验设计合成1对特异性引物,通过PCR方法从广东省和四川省发病猪的30株分离菌中扩增出HPS omp5基因,然后将PCR产物克隆至pMDTM18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,并进行序列测定与分析。结果表明:30株HPS omp5基因的完整序列有3种长度,分别为1 116 bp、1 104 bp、1 098 bp;与已发表的血清5型HPS SH0165的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较,广东分离菌株核苷酸同源性为90.5%～100%,氨基酸同源性为88.8%～100%;而四川分离菌株的核苷酸序列同源性为90.8%～94.1%,氨基酸同源性为89.9%c93.0%;进化树分析显示,HPS omp5基因无论是在不同血清型之间还是不同地区之间都具有较高的同源性,说明OMP5蛋白比较保守,有望作为型间共用性抗原。

副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆及生物信息学分析

根据GenBank上公布的副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5基因的核苷酸序列，设计1对特异性引物，对贵州省HPS分离株OMP5基因进行扩增。结果表明所扩增的OIvIP5基因的长度为1116bp，与SH0165株对应的核苷酸序列和氨基酸同源性均为lOO％。生物信息学分析结果表明，OMP5基因所编码的外膜蛋白P5的理论等电点pl为9．34不稳定系数为20．44，推测其为稳定性蛋白；脂肪指数为83．94，总体平均亲水性为-0．172，推测该蛋白是一种亲水性蛋白；该蛋白含有丰富的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲，无跨膜区，最前端的21个N-末端氨基酸残基为信号肽序列并且主要为疏水性氨基酸，最佳切割位点在第21～22个氨基酸之间；结构位点预测表明该蛋白含有多个不同的糖基化和磷酸化位点。