OmpD对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究

为研究外膜孔蛋白Omp D在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌(C50336)omp D基因缺失突变株(C50336Δomp D)。测定了C50336,缺失株C50336Δomp D,回补株p BR322-omp D/C50336Δomp D各菌株在LB和M9培养基中的生长情况,结果显示,缺失株C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其生长速度无明显差异。利用结晶紫染色方法观察和测定生物被膜(BF)表达量,结果显示,C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其BF形成受到明显抑制;利用刚果红培养基和荧光剂培养基分析细菌BF成分变化,结果显示C50336Δomp D构成BF的主要成分卷毛和纤维素的表达量明显减少。通过K-B药敏试验结果显示,C50336Δomp D菌株与野生型菌株和回补菌株相比,其对包括多黏菌素B在内的多种抗生素的敏感性显著增强。利用小鼠模型评估omp D基因缺失对肠炎沙门菌致病力的影响,结果显示,omp D基因缺失突变株对小鼠的LD50相较野生菌株提高约20倍,表明Omp D蛋白与肠炎沙门菌致病力密切相关,毒力基因检测结果显示缺失株BF调控基因均转录水平下调。本研究为进一步阐释肠炎沙门菌致病机制奠定基础。

肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

为探究肠炎沙门菌伴侣蛋白Hfq对nmpC的调控机理及其基因编码产物OmpD在致病过程中参与的生物学功能,采用PCR方法扩增肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD基因nmpC,并将其克隆至原核表达载体pColdTM TF,构建重组表达载体pColdTM TF-nmpC。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和Ni-NTA亲和层析获得高纯度的融合蛋白OmpD。用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗OmpD抗体。结果显示,经酶切、测序和Western blot鉴定分析,本研究成功构建并表达肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD,经纯化后免疫BALB/c小鼠,获得特异性的鼠源OmpD多克隆抗体,为进一步探究肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD在致病过程中参与的生物学功能奠定基础。

基于OmPD模型的自行车全地形功率分配方式

为研究自行车运动员在不同地形下的最佳功率输出方式,采用OmPD模型,建立功率输出曲线,确定了理论情况下各路段骑行速度相同时的最短完赛时间。考虑到运动员的无氧工作能力不会随比赛的进行而恢复,应在上坡路段采取较大输出功率,并保持各上坡路段的骑行速度相等,对于下坡与平地路段应以临界功率为输出功率骑行,以期为指导训练和比赛提供参考。

鼠伤寒沙门菌小RNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD的表达调控

【目的】探究小RNA(small RNA,sRNA)RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpD表达的调控作用。【方法】以鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium,STM)为研究对象,将含有编码β-半乳糖苷酶的lacZ报告基因的pCE40质粒转入ompD基因单缺失菌株中以获得lacZ报告菌株;在此基础上,利用P22噬菌体转导技术分在lacZ报告菌株中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短以获得双突变实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。通过β-半乳糖苷酶活性试验和RT-qPCR探究sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD表达的调控作用。【结果】成功在lacZ报告菌中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短等双缺失实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。与野生型(wild type,WT)菌株相比,在lacZ报告菌株中,hfq基因截短为87个氨基酸序列的突变株中的OmpD蛋白活性下调了2.16%,其余实验株OmpD蛋白的β-半乳糖苷酶活性均呈上升趋势。与WT菌株相比,实验菌株ompD基因转录水平除了STM LT2ΔompD::lacZΔhfq65的上调不具有显著性外,其余实验菌株均显著(P<0.05)上调,其中lacZ报告菌株、rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株ompD基因转录水平上调最明显,为1.83倍。【结论】ompD基因的转录及蛋白表达主要受hfq基因和sRNA RybB的负反馈调节;Hfq的远端面在对ompD基因的转录抑制中起关键作用。通过多个基因突变菌株的构建,阐述了sRNA伴侣蛋白Hfq与孔蛋白OmpD的相互作用关系,探索了Hfq对ompD的调控关键区域,丰富了sRNA的调控理论。

全自动驾驶车辆车门系统的方案设计

通过对OMPD(运营模式和规则定义)的功能分解,解析出适用于全自动驾驶的车门系统功能。根据车门系统的功能,初步完成车门系统的方案设计,并通过可靠性计算验证车门系统。