Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统在案件中的应用

常规法医DNA检验包括DNA提取、PCR扩增、电泳检测、数据分析等环节,需要专业人员在实验室用不同仪器操作6~8 h完成。然而,面对突发案(事)件,现有技术耗时长、步骤多、实验场所要求高等不足限制其作出适时到位的应对。为此,国外先后推出了RapidHIT等现场快检仪器,但价格昂贵且只能用于个体识别。Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统是国内首台自主研制的现场快检仪,2 h即可完成检验全过程,可以实现DIP族群推断和STR个体识别功能。本文利用该系统检测了一起案件的现场物证及血样,促进了案件的侦破。

基于微流控芯片的InDel快速族群推断体系研究

目的QuickTargSeq全集成法医DNA现场快速检测系统是国内首台自主研制的现场快检仪,可应用于InDel族群推断检测,2 h左右完成“样本进-结果出”的快速自动化InDel分型。本文对InDel族群推断微流控芯片检测体系的性能进行评估,以期为实践应用提供参考。方法使用InDel族群推断微流控芯片检测体系,对体系的灵敏度、干扰物耐受性、成功率、分型准确率、精确性、准确性、峰平衡性及检材适应性进行验证评估,同时对测试样本的族群来源进行推断。结果138份样本的全集成检测成功率为95.65%,分型准确率为98.85%;DNA模板量≥5 ng时,可获得完整InDel分型,口腔拭子样本最佳采集次数为口腔内壁左右两侧各刮擦8次,血卡样本最佳检测方式为6片(Φ=2 mm);所有基因座的平均杂合子峰高比值为0.86;10次运行的等位基因分型标准物(allelic ladder)片段大小标准差均在0.3 bp以内,测试样本等位基因和相应的等位基因分型标准物之间的片段准确性均在0.5 bp以内。结论该体系可实现对口腔拭子、血卡、唾液卡及烟蒂样本的准确分型,能够准确推断样本的族群来源。

实时荧光定量PCR技术的优化及其在恙虫病东方体诊断中的应用

目的建立一种优化的实时荧光定量PCR技术,并用于诊断粤北山区恙虫病东方体(Ot)基因型。方法采用优化实时荧光定量PCR技术对感染Ot的患者和鼠类的血液和组织标本检测Ot DNA载量并分析其基因型,并与未优化实时荧光定量PCR和巢式PCR的检测结果进行比较。结果采用优化实时荧光定量PCR技术检测660例发热患者,有224例检测到Ot,其中108例是发热5d内的早期患恙虫病患者,以及在55份鼠类的标本中有12份能检测到感染Ot,均为Gilliam型;未优化实时荧光定量PCR在患病7d以上才能检测到Ot。同时,在鼠类基因扩增片段还显示出与Gilliam、Karp、Kato3株国际参考株不同,经巢式PCR分型证实为Kawasaki型,与巢式PCR基因分型的结果相符。结论优化实时荧光定量PCR技术可作为早期诊断恙虫病的实验方法,用于快速分析Ot基因型,适合在基层医院推广应用。

Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统在非实验室环境下对STR和DIP的同步检测分析

目的 测试Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统在非实验室环境下对常见样本进行STR(Short Tandem Repeat)和DIP(Deletion-Insertion Polymorphisms)两种复合扩增试剂的检测能力。方法 将Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统置于户外、车载等非实验室环境条件下,对59份样本(包含30份口腔拭子、26份血卡、2份接触类检材和1份精斑)进行STR检测,对43份样本(包含23份口腔拭子和20份血卡)进行DIP检测,对37份样本(20份口腔拭子和17份血卡)进行STR和DIP并行检测。结果 口腔拭子和血卡的位点检出率分别为98.95%和97.15%,全集成成功率均为100%,自动分型准确率分别为95.99%和94.81%,STR和DIP并行检测的检出率分别达到98.55%和97.96%,自动分型准确率分别为94.18%和98.82%;精斑和手机屏幕拭子可得到完整分型,而摩托车脚踏板拭子出现5个STR基因座丢失。结论 Quick TargSeq全集成DNA快速检测系统可以在非实验室环境下正常工作,具备STR和DIP两种复合扩增试剂的检测能力,且可以在同一卡盒的两个通道内实现两种试剂的并行检测,对于口腔拭子、血卡、精斑样本以及某些DNA含量高的接触类检材能够快速、自动获得分型信息。