Egr-1基因调控序列连接OSM cDNA表达质粒的构建及其在黑色素瘤细胞中的表达

ＯＳＭ是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子．为进行ＯＳＭ针对黑色素瘤的基因－放射治疗研究，构建了小鼠Ｅｇｒ－１基因调控序列引导入ＯＳＭｃＤＮＡ真核表达质粒（ｐＥＯ），ｐＥＯ质粒转染小鼠Ｂ－１６黑色素瘤细胞，经Ｇ４１８和抗人ＯＳＭ抗体的筛选，获得了稳定表达ＯＳＭ的克隆细胞（ｐＥＯ－１细胞），ＯＳＭ表达量可达５．９７ｎｇ每１０５细胞天，分子量为３２ｋＤ．ｐＥＯ－１细胞用一定浓度Ｈ２Ｏ２处理后ＯＳＭ表达量可提高６２％。

抑瘤素M联合达卡巴嗪抑制黑色素瘤细胞B16的增殖

目的:通过体内外实验探讨抑瘤素M(OSM)联合达卡巴嗪(DTIC)对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用。方法:在体外分别采用MTT法和FCM法检测达卡巴嗪单药以及联合OSM对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响;Hochest染色法检测达卡巴嗪单药以及联合OSM对黑色素瘤B16细胞的细胞核形态学变化,研究OSM联合DTIC对黑色素瘤B16细胞的抑制作用;体内实验将黑色素瘤细胞B16接种于小鼠,观察OSM、DTIC及DTIC联合OSM治疗对小鼠的成瘤性的影响。结果:体外实验中OSM、DTIC或DTIC联合OSM对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制率分别为11.2±2.3%,25.3±4.6%和32.5±3.8%,差异具有统计学意义(P<0.05),诱导黑色素瘤B16细胞的凋亡率分别为1.32±0.42%,10.64±2.13%和15.86±2.76%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在形态学上,DTIC联合OSM可明显引起细胞核破碎增加;在体内实验中,DTIC相对于对照组能明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,DTIC联合OSM能增加DTIC的抑瘤作用。结论:OSM联合DTIC体外可以明显抑制黑色素瘤B16细胞增殖,诱导其凋亡,为黑色素瘤的治疗提供了一种新的可能性方案。

PCR检定OSMcDNA转染细胞中基因组整合与转录

用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ方法对人ＯＳＭｃＤＮＡ转染的小鼠黑色素瘤细胞进行基因组整合和ｍＲＮＡ 转录的检定．基因组整合检定时， 采用与调控序列和ｃＤＮＡ 序列相对应的上、下游引物， 以连续的转录单位进行扩增， 能够更准确地反映整合与表达的关系； ｍ ＲＮＡ 检定时， 采用与ｃＤＮＡ序列和质粒克隆位点与加ｐｏｌｙＡ 信号之间序列相对应的上、下游引物，

基因转染结合局部照射对体内黑色素瘤的抑制作用 :肿瘤的基因—放射治疗策略(英文)

探讨OSM对黑色素瘤体内生长的抑制作用及其在基因 -放射治疗中的应用。将人OSMcDNA插入 pCI-neo构成OSM表达质粒 ( pO) ;Egr- 1基因调控序列 (Egr - 1R)连接于OSMcDNA上游构成辐射诱导性OSM表达质粒 ( pEO)。pO和 pEO转染小鼠B1 6黑色素瘤细胞 ,筛选出OSM表达细胞 ( pO - 1 7和 pEO - 1 ) ,皮下接种C5 7小鼠 ,观察和比较相同生长期内瘤体重量及给予60 Coγ射线局部照射后肿瘤抑制率的变化。结果表明 ;在未照射实验中 ,pO - 1 7和 pEO - 1细胞接种 2 0d后的瘤体重量较对照组明显降低 ;在照射实验中 ,pEO- 1细胞照射后 7d瘤体重量的下降最为显著 ,肿瘤抑制率较未照射时提高 42 3%。说明转基困分泌的OSM可对瘤细胞的体内生长产生抑制 ;γ射线可通过Egr - 1R增强OSM表达的途径 ,加剧对肿瘤的抑制 ,体现出基因

腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法:以PEGZ-OSM重组质粒为模板,通过PCR技术扩增出OSM片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸序列相同的重组腺病毒子Ad-OSM,感染A375细胞,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测OSM在A375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A375细胞的形态学改变;MTT法和流式细胞术(FCM)检测Ad-OSM对A375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量RT-PCR法检测OSM基因表达对A375细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体;RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A375细胞中的转录和表达;OSM基因的表达对A375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体,感染OSM基因可明显抑制A375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变Bax、Bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。