Development of a novel stability indicating RP-HPLC method for quantification of Connexin43 mimetic peptide and determination of its degradation kinetics in biological fluids

Connexin43 mimetic peptide （Cx43MP） has been intensively investigated for its therapeutic effect in the management of inflammatory eye conditions, spinal cord injury, wound healing and iscbemia-induced brain damage. Here, we report on a validated stability-indicating reversed-phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC） method for the quantification of Cx43MP under stress conditions. These included exposure to acid/base, light, oxidation and high temperature. In addition, the degradation kinetics of the peptide were evaluated in bovine vitreous and drug-free human plasma at 37℃. Detection of Cx43MP was carried out at 214 nm with a retention time of 7.5 min. The method showed excellent linearity over the concentration range of 0.9-250μg/mL （R2a0.998）, and the limits of detection （LOD） and quantification （LOQ） were found to be 0.90 and 2.98 μg/mL, respectively. The accuracy of the method determined by the mean percentage recovery at 7.8, 62.5 and 250μg/mL was 96.79%, 98.25% and 99.06% with a RSD of〈 2.2%. Accelerated stability studies revealed that Cx43MP was more sensitive to basic conditions and completely degraded within 24 h at 37℃（0% recovery） and within 12 h at 80℃ （0.34% recovery）. Cx43MP was found to be more stable in bovine vitreous （t1/2 slow= 171.8 min） compared to human plasma （t1/2slow = 39.3 min） at 37℃ according to the two phase degradation kinetic model. These findings are important for further pre-clinical development of Cx43MP.

RP-HPLC method for the simultaneous determination of daidzein,genistein and formonetin in Solanum Lyratum Thunb

A rapid method for the simultaneous determination of daidzein,genistein and formonetin in solanum Lyratum Thunb by high performance liquid chromatography(HPLC)was developed.Separation was achieved on a Diamonsil C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm)with isocratic elution,using a mobile phase of methanol-tetrahydrofuran-water(44∶3∶53,v/v).The wavelength was set at 260 nm and column was maintained at 35 ℃.The linear ranges of daidzein,genistein and formonetin were 1.0-40.0,0.1-4.0 and 0.1-4.0 μg/mL,respectively.The average recoveries were between 98.4% and 101.3%.This method could be used for the quality control of Solanum lyratum Thunb due to its simplification,reliability,rapidity and excellent precision.

Separation and determination of trace amounts of beryllium（Ⅱ）,alumini

Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｒａｃｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｂｅｒｙｌｌｉｕｍ（Ⅱ），ａｌｕｍｉｎｉｕｍ（Ⅲ）ａｎｄｉｒｏｎ（Ⅲ）ｗｉｔｈｃｈｒｏｍａｚｏｌＫＳｂｙＲＰ－ＨＰＬＣＬｉｕＳｈａｏｐｕ，ＤｅｎｇＣｈｕａｎｙｕｅ．Ｚ...

黄花蒿中青蒿素含量的RP-HPLC法测定

建立黄花蒿中青蒿素的高效液相色谱测定方法,采用柱前衍生RP-HPLC法测定黄花蒿中青蒿素的含量,采用ZORBAXXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.01mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH5.8,体积比62∶38)为流动相;检测波长:260nm;流速:0.8mL/min;柱温:30℃。对广西、沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等不同产地的野生黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样品进行检测,结果表明不同地区青蒿素含量差异很大,同一地区不同采集时间黄花蒿样品的青蒿素含量也有差异。该法准确可靠、重现性好,能准确地反映青蒿素含量的检测。

RP-HPLC测定百蕊草中紫云英苷的含量

目的：建立百蕊草中紫云英苷的含量测定方法。方法：采用RP-HPLC测定，C18柱，流动相为乙腈．水（23：77），用冰醋酸调pH至3．85，流速1．0mL·min^-1，检测波长346nm；供试品溶液的制备采用50％乙醇提取2次。结果：测定了同一产地不同批次的百蕊草药材，紫云英苷质量分数在0．120％-0．155％。结论：建立的测定方法简便、可靠。

RP-HPLC法测定巴洛沙星胶囊的含量及有关物质

目的:采用反相液相色谱法测定巴洛沙星胶囊含量及有关物质。方法:采用 PICO TAG ^(TM)C_(18)色谱柱(5μm,3.9mm×150mm),以乙腈-水-十二烷基硫酸钠(400∶600∶2.5,用磷酸调节pH为3.0)为流动相;流速1.0mL·min^(-1);检测波长为290nm,柱温:室温;进样量:20μL。结果:在该色谱条件下,巴洛沙星浓度在15-35μg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,精密度 RSD 为0.81%(n=6);巴洛沙星胶囊含量测定高、中、低3种浓度的回收率分别为98.3%,100.4%,99.9%;RSD分别为0.56%,0.62%,0.54%。结论:本法简便、快速、准确,专属性好。

RP-HPLC测定几种花类药材黄酮含量

目的:为充分利用花类药材,建立马蔺花、桃花、月季等15种花类药材中黄酮含量测定的RP-HPLC方法,并比较它们的含量。方法:花类药材用甲醇提取,反相高效液相色谱法分析药材中槲皮素、山柰酚、异鼠李素3种黄酮苷元。结果:采用Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸(50∶50)为流动相,可使3种黄酮苷元达到基线分离,其中马蔺花含槲皮素1.536%,桃花含山柰酚0.572%,茶花含异鼠李素0.029%,皆为听测样品中最高。结论:本实验首次采用RP-HPLC法测定这15种花类药材的总黄酮含量,本方法操作简便,快速,准确,可作为黄酮的定量分析方法。

RP-HPLC法测定干姜中3种姜酚的含量

目的:对干姜中6-姜酚(Ⅰ)、8-姜酚(Ⅱ)和10-姜酚(Ⅲ)3种姜酚进行含量测定。方法:采用反相高效液相色普法,使用 Agilent Hc-C_8柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液,梯度洗脱(乙腈-0.1%醋酸水溶液比例分别为:0～23 min,43:57:23～50 min,65:35;50～60 min,80:20),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长275 nm,柱温30℃。结果:化合物Ⅰ～Ⅲ进样量在0.5～20.0μg范围内与峰面积均有良好的线性关系,相关系数 r 均为0.9999(n=6)。化合物Ⅰ～Ⅲ的平均回收率(n=6)分别为100.6%,101.6%,99.8%;RSD 分别为1.3%,1.6%,2.4%。结论:本方法能够准确测定干姜中3种姜酚的含量。

RP-HPLC法测定三七中11种皂苷的含量

目的:建立同时测定三七中多种皂苷成分的RP-HPLC方法。方法:Zorbax Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);乙腈-水二元梯度洗脱,乙腈:0～30min,18%;30～35min,18%→30%;35～55min,30%→35%;55～65min,35%→55%;65～70min,55%。流速1.5mL·min^(-1);DAD监测器,检测波长203nm;柱温为40℃。结果:三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1、Re、Rf、Rb_1、Rg_2、Rh_1、Rc、Rb_2、Rb_3和Rd的线性范围分别为0.24～4.75μg(r=0.9999),0.57～11.40μg(r=1.0000),0.50～9.90μg(r=1.0000),0.24～4.80μg(r=1.0000),0.54～10.65μg(r=1.0000),0.18～3.60μg(r=1.0000),0.16～3.10μg(r=1.0000),0.26～5.10μg(r=1.0000),0.25～4.90μg(r=1.0000),0.25～4.95μg(r=1.0000),0.32～6.30μg(r=1.0000);回收率为97.3%～102.8%。结论:RP-HPLC法可同时测定三七中11种皂苷的含量,有利于其质量控制。

RP-HPLC双波长法同时测定熟地黄中4种成分的含量

目的建立RP-HPLC双波长同时测定熟地黄中4种成分含量的方法。方法色谱柱为WatersSunfire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-体积分数0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为λ1=210 nm和λ2=330 nm;流速为1.0 mL.min-1;柱温为30℃。结果梓醇、麦角甾苷、吉奥诺苷B1和马替诺皂苷质量浓度分别在125.0～2 000.0 mg.L-1(r=0.999 9)、11.0～176.0mg.L-1(r=0.999 9)、15.0～240.0 mg.L-1(r=0.999 9)和7.5～120.0 mg.L-1(r=0.999 8)内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率在97.5%～101.3%内。结论该方法灵敏,操作简便,结果可靠,可用于熟地黄药材的质量控制。

RP-HPLC法测定枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的含量

目的建立枳壳中柚皮苷和新橙皮苷含量测定的方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱:HypersilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-磷酸水(pH=3)(19∶81);检测波长:283nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃。结果柚皮苷在0.156μg～0.934μg范围内线性关系良好(r=0.9990),新橙皮苷在0.155μg～0.930μg范围内线性关系良好(r=0.9991)。柚皮苷的平均回收率为101.62%(RSD=1.91%),新橙皮苷的平均回收率为103.12%(RSD=1.22%)。结论该方法简便、准确,可用于枳壳药材的质量控制。

RP-HPLC同时测定藏药波棱瓜子中7个活性木脂素成分的含量

目的建立一种RP-HPLC同时测定藏药波棱瓜子中7个活性木脂素成分（ent-isolariciresinol,dehydrodiconiferyl alcohol,herpet-rione,herpetin,herpetetrone,herpetotriol,herpetal）的含量。方法采用Pinnacle DB C18（4.6 mm×250 mm,5μm,RESTEK）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,检测波长为240 nm,流速为1.0 mL·min^-1。结果Ent-isolariciresinol,dehydrodiconiferyl alcohol,herpetrione,herpetin,herpetetrone,herpetotriol和herpetal的线性范围分别为：1.29～24.80 mg·L^-1（r=0.978 9）,6.77～130.20 mg·L^-1（r=0.100 26）,10.41～200.20 mg·L^-1（r=0.980 2）,4.45～85.50（r=0.986 1）,2.91～56.10 mg·L^-1（r=0.982 8）,5.80～111.60mg·L^-1（r=0.100 78）和6.99～134.40 mg·L^-1（r=0.986 6）。平均回收率均在95.19%～102.64%内（RSDs〈1.52%）。结论本法准确可靠,灵敏度高,重现性好,结果表明,该分析方法适用于波棱瓜子药材的质量控制。

RP-HPLC法测定大鼠血浆中姜黄素含量

目的 采用RP-HPLC法测定大鼠血浆中姜黄素的含量。方法血浆样品经处理后，按以下色谱条件测定姜黄素的含量：DiamonsilC18柱（4．6mm×250mm，5μm），柱温：室温；流动相：乙腈-2％醋酸溶液（58：42）；流速：1．0ml／min；检测波长：426nm．结果在本色谱条件下血浆中的杂质峰较少，姜黄素和内标物及其他内源性干扰成分可成功分离。采用乙酸乙酯液液萃取法处理血浆样品，萃取回收率最高。在0．1～0．5mg／L浓度范围内，线性关系良好，回归方程y=0．0026x-0．0756，r=0．9984；日内、日间精密度RSD符合生物样品的分析要求；加样回收率和萃取回收率均在90％以上。结论所建立的测定大鼠血浆中姜黄素含量的方法简单可行、准确可靠，适用于姜黄素的血药浓度监测。

RPHPLC法同时测定玄参中肉桂酸、哈巴酯苷的含量

耳的建立中药材玄参的RP-HPLC法的质量控制方法。方法采用Diamonsil^TM C18色谱柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相为体积分数为1％的乙酸水溶液-甲醇（体积比为49：51），检测波长为280nm，流速为0．90mL·min^-1，柱温为32℃，进样量为10μL，外标法同时测定中药材玄参中的肉桂酸和哈巴酯苷的含量。结果以色谱峰面积（A）对质量浓度（P）作图。肉桂酸和哈巴酯苷回归方程分别为：A=8．577×10^7ρ＋7．533×10^4（r=0．9993）、A=2．510×10^7ρ-2．633×10^4（r=0．9997）；线性范围分别为4．65～37．2mg·L^-1、20．6～164．8mg·L^-1；平均回收率分别为99．6％（RSD=1．4％，n=9）、100．1％（RSD=1．3％，n=9）；平均质量分数分别为3．116×10^-2％（RSD=1．4％，n=3）、0．1678％（RSD=0．77％，n=3）。结论本方法可作为玄参药材的质量控制方法。

RP-HPLC法测定甲砜霉素及其胶囊剂的含量和有关物质

目的:采用反相高效液相色谱法测定甲砜霉素及其胶囊剂的含量及有关物质。方法:采用Merck C18色谱柱(250 mm×4.0 mm,5μm);以乙腈-水(1:4)为流动相;流速1.2 mL·min-1;检测波长:225 nm;柱温:30℃;进样量:10μL。结果:含量测定的线性范围为20.29—203.9 μg·mL～1,r=0.9999(n=7);有关物质测定的线性范围为2.072—20.72μg·mL-1;r=0.9998(n=7),甲砜霉素胶囊的加样回收率为101.3%,99.2%,98.9%;RSD依次为1.9%,0.4%,0.7%(n=3)。结论:本法简便快速、准确,专属性好。

RP-HPLC法测定功能性饮料水溶性维生素含量

目的:建立同时测定功能性饮料中VC、VPP、VB6、VB2和VB1水溶性维生素含量的RP-HPLC方法。方法:色谱条件:色谱柱:LunaC18(2)(200mm×4.60mm,5μm),流动相:0.005mol/L己烷磺酸钠溶液-甲醇-冰醋酸(80:20:0.5,V/V)(pH4.0),流速1.0mL/min,检测波长278nm。结果:VC、VPP、VB6、VB2和VB1的线形范围分别是2.94～43.50、6.00～90.00、1.70～25.50、1.60～24.00、2.30～43.50μg/mL,最低检出限分别为0.001、0.362、0.095、0.328、0.619μg/mL;VC、VPP、VB6平均回收率分别为98.29%、98.38%、98.51%。结论:此方法简单、快捷、准确,可同时测定功能性饮料中的多种水溶性维生素。

桑叶中绿原酸和主要黄酮苷含量的RP-HPLC测定

目的:考察不同品种、不同采摘时间和不同种植基地桑叶中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含量差异。方法:采用反相高效液相色谱法,以 Zorbax SB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,90%乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱[0 min,A-B(12:88);10 min,A-B(16:84);20 min,A-B(20:80);30 min,A-B(25:75)],流速1.0 mL·min^(-1),检测波长358 nm。结果:不同种植基地的桑叶中绿原酸、芦丁和异槲皮苷的含最有一定的差异;不同品种和采摘时间的桑叶中上述三成分含量差异较大。结论:桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷的含量与种植基地、采摘季节、品种等有关,其中尤以季节和品种影响较大。

RP-HPLC法同时测定花椒提取物中3种山椒素的含量

目的建立同时测定花椒提取物中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素含量的RP-HPLC色谱法。方法采用PhenomenexSynergi C18色谱柱（250mm×4．6mm ，4μm）；流动相为乙腈（A）-水（B）；流速为1．0mL·min^-1；梯度洗脱：0-15min，φ（乙腈）=40％-50％，15-25min，φ（乙腈）=50％～60％；检测波长为270nm；柱温为30℃。结果羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素分别在6．48-58．32、1．31-11．81和0．61-5．48mg·L。内线性关系良好。平均加样回收率分别为97．5％、97．4％和97．0％，RSD分别为1．5％、1．6％和1．4％（n=6）。该方法应用于花椒提取物的含量测定，测得3批自制花椒提取物中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素的含量分别为41．2％-46．9％、8．17％～9．28％和4．47％-5．11％。结论该方法可为花椒提取物的质量控制提供参考依据。

RP-HPLC测定扯根菜中槲皮素的含量

目的测定扯根菜中槲皮素的含量.方法采用RP-HPLC法, Aichrom Bond-AQ C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.2%磷酸(56∶44)为流动相,流速1.1 ml·min-1,柱温35℃,检测波长370 nm.结果槲皮素进样量在0.0461～0.9220 μg范围内与峰面积呈很好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为97.6%,RSD=1.86%.6批样品中槲皮素含量分别为2.16、2.25、2.21、2.26、2.08、2.05 mg·g-1.结论所建方法简便、准确、重复性好,可用于扯根菜中槲皮素的含量测定.

RP-HPLC法测定灯盏花素纳米脂质体药物含量及包封率

目的:建立灯盏花素脂质体药物含量测定及包封率测定的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱:Hypersil c12柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(16:81:2:1);柱温:40℃;流速:1.2 mL·min-1;紫外检测波长:335nm。采用反透析法测定灯盏花素纳米脂质体的包封率。结果:在此色谱条件下灯盏花素与辅料及溶剂峰均得到良好分离,灯盏花乙素在1.0-50.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均回收率为100.3%,日内及日间RSD均小于2.0%(n=5)。结论:该方法准确可靠、简单快速,可用于灯盏花素纳米脂质体药物含量及包封率的测定。