卵丘细胞生长分化因子9 mRNA和骨形态蛋白15 mRNA水平非侵入性评估卵子发育潜能

目的:探讨卵丘细胞中生长分化因子9(GDF9)mRNA和骨形态蛋白15(BMP15)mRNA的表达水平进行非侵入性评估卵子发育潜能的临床应用价值。方法:收集252例行卵细胞浆内单精子注射(ICSI)助孕治疗的女性患者的卵丘细胞,采用实时定量PCR检测卵丘细胞中GDF9mRNA、BMP15 mRNA表达水平,并分析其与卵子成熟率、受精率和卵裂率的相关性;同时,将患者按照受精情况、有无优质胚胎和有无临床妊娠进行分组,比较不同组间GDF9 mRNA、BMP15mRNA的表达差异。结果:GDF9 mRNA、BMP15 mRNA表达水平与卵子成熟率、正常受精率、卵裂率均呈显著正相关(P<0.001)。GDF9 mRNA、BMP15 mRNA的表达水平在正常受精组显著高于异常受精组(P<0.05),在优质胚胎组显著高于非优质胚胎组(P<0.01),在临床妊娠组也显著高于未妊娠组(P<0.01)。结论:卵丘细胞中GDF9 mRNA和BMP15 mRNA水平与卵子发育潜能有关,可能成为胚胎选择新的分子指标。

骨形态发生蛋白15在卵巢生殖调控过程中的作用

骨形态发生蛋白15(BMP-15)主要由卵母细胞分泌,可以通过作用于周围体细胞,促进增殖,减少凋亡,从而促使卵母细胞优质生长。BMP-15在促增殖过程中抑制卵母细胞的过早成熟,具有黄素化抑制剂的作用,可能与保证卵母细胞核、细胞质同步成熟有关。BMP-15在生殖内分泌中的作用可能是不可或缺的,某些卵巢功能紊乱性疾病(如卵巢早衰、卵巢过度刺激综合征等)的发病机制,可能也与BMP-15有着密切的关系。

人卵母细胞成熟过程中卵丘细胞与卵母细胞关系的研究进展

人卵母细胞和卵丘细胞(cumulus cell,CC)之间存在双向通讯,在卵泡内,卵母细胞的发育高度依赖于与卵丘细胞的联系。卵母细胞通过分泌有效的生长因子(oocyte-secreted factors,OSFs)介导卵丘细胞分化,卵丘细胞则通过缝隙连接传递信号并在卵泡发育的后期阶段支持卵母细胞的生长,进一步促进卵母细胞成熟和受精。本文将综述人卵母细胞成熟中卵丘细胞与卵母细胞之间的重要关系及有关作用机制,为提高体外成熟(IVM)技术中卵母细胞的质量提供新的帮助。

卵丘颗粒细胞中卵母细胞分泌因子表达水平对卵母细胞成熟度的影响

目的评估单卵丘颗粒细胞(CCs)中GDF9、BMP15和TGF-β1的mRNA表达水平对卵母细胞成熟度的影响及在不同促排卵方案中的表达水平差异。方法收集直接行ICSI治疗的患者64例679份CCs,其中拮抗剂方案组CCs 272份,微刺激方案组CCs 245份,PPOS方案组CCs 162份,卵母细胞与单卵丘颗粒细胞一一对应。提取的mRNA表达水平采用real-time PCR方法进行检测,分析卵母细胞发育不同阶段卵母细胞分泌因子的含量,并比较不同促排卵方案中GDF-9、BMP-15和TGF-β1表达水平的差异。结果卵母细胞分泌因子GDF-9、BMP-15和TGF-β1的表达水平,MⅡ组均显著高于MⅠ组,MⅠ组显著高于GV组,正常受精组显著高于异常受精组,优质胚胎组显著高于非优质胚胎组。微刺激方案的Gn量较拮抗剂方案及PPOS方案更低有明显统计学差异。GDF-9、BMP-15和TGF-β1在三种促排卵方案中的表达量无明显统计学差异。结论GDF-9、BMP-15和TGF-β1可作为评价卵母细胞成熟度及其发育潜能的客观指标,其表达量与卵母细胞成熟度相关。在这三种促排卵方案中,微刺激方案的Gn量最低。CCs中的卵母细胞分泌因子的表达水平在这三种促排卵方案无明显差异,对卵母细胞成熟度的治疗效果相似。

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。

经后增殖方对超排卵大鼠卵母细胞分泌因子的影响

目的观察经后增殖方对超排卵大鼠卵母细胞分泌因子的影响。方法 30只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药治疗组。模型对照组和中药治疗组建立超排卵模型,中药治疗组给予经后增殖方颗粒剂灌胃,模型对照组和空白对照组给予生理盐水灌胃,经颈椎脱臼处死后取卵巢组织。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹法(Western Blot)分别检测大鼠卵巢组织中GDF9、BMP15、FGF10mRNA及蛋白的表达。结果模型对照组GDF9、BMP15、FGF10 mRNA及蛋白表达均下降,与空白对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。中药治疗组各因子mRNA及蛋白表达水平均高于模型对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。中药治疗组GDF9、BMP15表达与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),FGF10表达显著低于空白对照组(P<0.05)。结论中药经后增殖方能促进超排卵大鼠卵母细胞分泌因子GDF9、BMP15、FGF10 mRNA及其蛋白的表达,推测中药通过提高其表达而改善卵母细胞质量。

卵母细胞分泌因子在人卵丘颗粒细胞中的表达及其与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨单卵母细胞所对应的卵丘颗粒细胞(cumulus cells,CCs)中生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)、转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad3的表达与对应单卵母细胞质量及其发育潜能的关系以及在不同促排卵方案中的表达。方法:因男方因素或曾有过体外受精(IVF)不受精史接受卵胞质内单精子显微注射(ICSI)治疗的患者41例,单卵母细胞的CCs 332份(Gn RH-a组21例172份CCs,非垂体降调节组20例160份CCs)。拣卵后机械法剥离单卵子周围的CCs,将卵母细胞与收集的CCs一一对应进行分析。M_Ⅱ卵均采用ICSI授精,并观察其受精、卵裂及囊胚发育情况。采用Real-time PCR方法检测,比较各组CCs中GDF-9、BMP-15、TGFβ1和Smad3的相对含量。结果:1 CCs收集及PCR扩增产物可满足实验要求。2 Gn RH-a组及非垂体降调节组中,上述4种卵母细胞分泌因子,在正常受精组的相对含量均显著高于异常受精组;优质卵裂胚形成组的相对含量均显著高于非优质卵裂胚形成组;优质囊胚形成组中的相对含量显著高于非优质囊胚形成组。3 Gn RH-a组的CCs中BMP-15的表达量相对更高;而GDF-9、TGFβ1和Smad3在非降调节组的CCs中相对表达量较高。结论:1采用单卵母细胞的CCs的RNA进行研究,实际操作是可行的,RNA的质量和数量可达到实验要求。2 GDF-9、BMP-15、TGFβ1、Smad3可作为评价卵母细胞质量、预测卵母细胞发育潜能的客观指标。3降调节与否可能影响CCs中的卵母细胞分泌因子的表达水平,且与M_Ⅱ期卵母细胞发育潜能有关。