全口义齿修复对口腔微生态影响的初步探讨

目的 :初步探讨全口义齿修复对口腔微生态的影响。方法 :选取11例全口义齿修复后7 d的患者,收集口腔不同软组织位点、唾液及义齿表面的菌斑,构建细菌16S r RNA基因文库。采用焦磷酸测序技术针对细菌的16S r RNA基因序列的V2-V3可变区进行序列分析,完成口腔菌群的物种鉴定。结果:11例全口义齿修复患者共测得64800条序列,其中37416条序列为缓症链球菌、溶血孪生球菌、黏液罗氏菌、卟啉单胞菌、动物咬伤奈瑟球菌、苛养颗粒链菌、鲍曼不动杆菌、香茅醇假单胞菌、毗邻颗粒链菌和梭杆菌,为口腔优势菌种。全口义齿组织面的物种与唇颊前庭区和口底菌种较为相似,而全口义齿光滑面的物种与口底及舌腹区黏膜菌种的相似度较高。结论:全口义齿修复对口腔菌群的影响仍有一定局限性,口腔菌群组成不同还受到个体差异等多因素影响。

全菌蛋白SDS-PAGE技术鉴别口腔细菌分型的研究

采用十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)结合考马斯亮蓝染色和银染色法 ,鉴别口腔细菌。结果表明 ,同一菌株用不同菌体破碎方法 (SDS沸水浴破碎和超声波破碎法 ) ,不同批次处理的样品 ,不同次电泳、蛋白区带的不同染色法所得蛋白图型基本一致 ;而不同种的细菌电泳和扫描图型均不相同。提示 SDS- PAGE可用于菌种间鉴别 ,细菌属间鉴别较属内鉴别更能反映细菌亲缘关系的远近。

49例健康儿童和青少年正常口腔菌群的分布

对49名健康儿童和青少年(6～25岁)正常口腔菌群分布进行研究,测定其中优势的可培养细菌的检出率和检出比例。从195个唾液、沟裂菌斑、龈上菌斑和龈下菌斑标本中,共分离出28个菌属(包括72个菌种)。结果表明:口腔链球菌群、奈瑟氏菌属、放线菌属、二氧化碳噬纤维菌属、类杆菌属和梭杆菌属是正常口腔的优势菌群。在不同标本其优势细菌的种类存在差异,例如梭杆菌和类杆菌在龈下菌斑中的检出率和检出比例较沟裂菌斑高。

高通量测序方法分析实验室培养对人体口腔唾液菌群的影响

目的研究实验室培养对口腔唾液菌群结构及其多样性的影响。方法本实验选取6个健康且符合纳入排除标准的志愿者,采集口腔唾液菌群样本并进行实验室培养。基于Illumina Hiseq测序平台,我们利用16S r DNA高通量测序技术,研究实验室培养对人体口腔唾液细菌的影响,分析了培养前后的菌群物种丰度和菌群结构差异。结果高通量测序一共得到618个OTUs,测序分析显示人体口腔唾液菌群在实验室培养前后,菌群生物多样性的差异无统计学意义(P>0.05),菌群构成的差异无统计学意义(P>0.05)。OTUs Venn图显示实验室培养前后,人体口腔唾液菌群拥有大约78.4%相同物种。结论16S r DNA高通量测序分析显示,人体口腔唾液菌群在实验室培养前后具有相似性。

猖獗龋患者的病因和口腔微生物种类分析:1例报告

目的分析患者口腔全微生物种类,对猖獗龋患者提出细菌学预防与治疗手段。方法抽血查免疫全套和血常规,获取全菌斑(A)、龋损(Q)、唾液(T)、黏膜(N)样本经原代涂片镜检,并传代分离培养后采用形态学、梅里埃鉴定仪、16S r DNA序列进化分析鉴定微生物种类;进一步采用Q-PCR分析变异链球菌的含量,DGGE分析微生物组成和结构。结果血液免疫全套基本正常,但Ig E、中性分叶核细胞增高。原代样本涂片发现唾液中有大量极长链的细菌,经培养发现唾液中总菌含量最高,龋损样本中溶血菌含量最高,变异链球菌在全菌斑中最多。梅里埃和测序鉴定出33株细菌,全菌斑中分离出多种链球菌和韦德纤毛菌、龋损菌斑中多次分离到变异链球菌、具核梭杆菌和苏黎世链球菌,唾液样本中分离出多种乳杆菌。q PCR发现变异链球菌含量明显增高;变性梯度凝胶电泳(DGGE)显示该患者细菌多样性明显降低,但丰度明显增强;条带切胶测序检出多种纤毛菌。结论患者免疫功能基本正常,血液检测呈现感染血象,病因疑与细菌感染有关。可能由于唾液减少导致变异链球菌、多种纤毛菌等致病微生物过度繁殖、细菌多样性减少而引起生态失衡。

牙周炎与肠道菌群相关性研究进展

越来越多的研究表明牙周炎和肠道菌群之间关系密切。牙周炎的患者能够通过吞咽将口腔细菌转移到肠道定植,肠道原生菌群被改变,进而引发一系列肠道黏膜的免疫反应。肠道菌群失调又会导致一系列全身系统疾病,其中代表性的疾病就是炎症性肠病炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)。本文以IBD为切入点就牙周炎影响肠道菌群的可能途径以及炎症进展时、炎症得到控制后肠道菌群的变化进行综述。

基于高通量测序分析健康人咀嚼槟榔前后口腔菌群多样性

目的为揭示健康人咀嚼槟榔前后的菌群结构及其多样性,分析咀嚼槟榔前、咀嚼5 min后和咀嚼30min后口腔内菌群结构变化以及多样性特征。方法通过收集8个人咀嚼槟榔前后唾液,用宏基因组DNA进行高通量测序。结果咀嚼槟榔5min后,链球菌属(Streptococcus)、普雷沃菌_7属(Prevotella_7)、韦荣球菌属(Veillonella)、纤毛菌属(Leptotrichia)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、普雷沃菌属(Prevotella)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、梅毒螺旋体_2(Treponema_2)、普雷沃菌_6属(Prevotella_6)和兼性双球菌属(Gemella)较咀嚼前相对丰度明显下降,分别下降了16.57%、12.94%、9.38%、23.08%、54.55%、52.63%、30.00%、42.86%、30.00%、16.67%和42.86%,纤毛菌属(Leptotrichia)降幅最大。而咀嚼30min后,纤毛菌属(Leptotrichia)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、梅毒螺旋体_2(Treponema_2)和罗思菌属(Rothia)的相对丰度较咀嚼5 min后均增大。结论链球菌属(Streptococcus)、韦荣球菌属(Veillonella)作为主要变化的菌属,在咀嚼槟榔的过程中,对口腔产生一定的作用,可能是口腔龋齿等牙周疾病的直接或间接影响因子。

Sanger和Pyrosequencing测序法分析健康成人口腔菌群

目的对比Sanger和Pyrosequencing测序法分析健康人口腔菌群组成。方法收集6例健康成人唾液、舌背、黏膜、龈上及龈下菌斑并构建16SrRNA基因文库,分别用Sanger和Pyrosequencing测序法分析。结果 Sanger测序所得已知的序列有5,794条(占6,535总序列数88.7%)、75个属,396个序列划分操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs,占总OTUs的61.4%)。Pyrosequencing测序所得已知的序列有10,771条(占11,103总序列数97.0%)、66个属,322个OTUs(占总OTUs的68.0%)。Sanger和Pyrosequencing测序法所得口腔菌群在门、属的水平分布趋势基本一致,但在种的水平分布差异显著。Sanger和Pyrosequencing测序法构建的口腔菌群文库均匀度值分别为0.016和0.007,说明Pyrosequencing分析口腔菌群物种数量分布比Sanger测序方法的文库均匀性稍差,但优势种更显著。结论 Pyrosequencing测序时所构建基因文库能代表口腔菌群的多样性且经济、省时,可以应用于口腔细菌物种的分析。