肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞状细胞癌生物学行为影响的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是全球第六大常见恶性肿瘤,其发生、发展与肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)密切相关。肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)作为TME中重要的组成成分,通过分泌多种生长因子、细胞因子、炎性因子、外泌体等参与上皮-间充质转化、重塑细胞外基质,激活多种生物学途径,对OSCC的发生、发展产生影响。本文对CAFs的来源、特点、异质性以及CAFs对OSCC的生物学行为的影响做一综述。

SCRN1在口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞中的表达及对HSC3细胞株生物学特性的影响

目的:探究胞吐作用相关蛋白(SCRN1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中的表达及对CAFs分泌MMP2功能的影响,进一步研究CAFs对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。方法:通过免疫组织化学染色(IHC)检测SCRN1在OSCC组织及癌旁组织中的表达。原代培养、分离、纯化、验证正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,用免疫细胞化学染色法(ICC)、蛋白免疫印迹(WB)、qRT-PCR检测NFs、CAFs中SCRN1的表达情况。CCK-8、Transwell实验检测NFs、CAFs及CAFs-shSCRN1增殖、迁移及侵袭能力。收集NFs、CAFs上清并用ELISA和明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)水平及活性,然后分别与HSC3细胞株共培养,探究两种上清共培养对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。沉默CAFs的SCRN1基因后,收集CAFs、CAFs-shSCRN1和CAFs-Vector上清并检测MMP2水平及活性,然后分别与HSC3共培养,探究三种上清培养条件对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果:SCRN1在OSCC组织中阳性表达率及表达水平较高。成功分离、培养、鉴定NFs和CAFs, CAFs较NFs表达更高水平的SCRN1,且其增殖、迁移、侵袭能力均较NFs强。沉默SCRN1能够降低CAFs增殖、迁移及侵袭能力。CAFs上清分泌更高水平和活性的MMP2,与HSC3细胞株共培养可明显促进HSC3细胞株迁移、侵袭能力。沉默SCRN1后的CAFs上清中MMP2水平和活性降低,其促进HSC3细胞株迁移、侵袭能力也明显减弱。结论:SCRN1可调控CAFs分泌MMP2,在肿瘤微环境中,促进HSC3细胞株迁移和侵袭能力。

口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响

目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs(实验A组)、NFs(实验B组)与人淋巴管内皮细胞(HLEC)共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力。结果培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。结论口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs。

肿瘤相关成纤维细胞在口腔鳞状细胞癌中的作用及其靶向治疗的研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是世界排名第六的恶性肿瘤,5年生存率不足50%,其发病机制目前尚未完全阐明。肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的重要细胞成分之一,在肿瘤的侵袭、转移及血管生成中发挥重要的作用。CAFs主要通过分泌生长因子、修饰细胞外基质、支持血管生成以及抑制抗肿瘤免疫应答来促进肿瘤的发生发展。以CAFs作为治疗靶点,可以有效地抑制OSCC的侵袭和转移,限制肿瘤血管生成,进而为OSCC的干预提供新的治疗策略。本文就CAFs在OSCC的作用及其靶向治疗的研究进展进行综合论述。

口腔鳞状细胞癌间质成纤维细胞α-SMA的表达及意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)间质成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平及意义。方法收集新鲜OSCC组织标本34例,以正常口腔黏膜(5例)、口腔扁平苔藓(6例)和口腔白斑组织(9例)为对照,在冰冻切片上行α-SMA和波形蛋白免疫组化染色(SP法)。结果OSCC组α-SMA的平均染色分值和染色阳性标本百分率均高于对照组(P<0.01);在OSCC组,随着细胞分化程度的逐渐降低,α-SMA平均染色分值和染色阳性标本百分率均有逐渐升高的趋势(P<0.05);在α-SMA染色阳性区域波形蛋白染色亦呈阳性。结论α-SMA在癌间质成纤维细胞中的表达可作为OSCC的辅助诊断及严重程度的判定指标。

口腔癌相关成纤维细胞的体外生物学行为研究

目的探讨口腔鳞癌中癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)的体外生物学行为。方法组织块贴壁法培养CAFs及牙龈正常成纤维细胞(normal fibrolasts,NFs);通过形态观察,免疫组化染色,细胞增殖活性、贴壁率、迁移能力等测定,比较两种细胞的生物学行为差异。结果与NFs相比,CAFs特征性表达成纤维激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2),具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05)。结论口腔癌CAFs特征性表达相关蛋白,体外增殖、粘附、迁移能力均高于NFs。

COX-2、bFGF在口腔鳞癌发生发展过程中的表达及相互关系

目的:研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factors,bFGF)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的发生、发展过程中的表达情况,进而探求COX-2、bFGF在OSCC发生发展过程中的作用及相互关系。方法:应用COX-2,bFGF多克隆抗体对25例口腔白斑(癌前病变)(oral leukoplakia,OLK)、23例口腔鳞状细胞癌进行检测,另取10例口腔正常颊、舌黏膜组织为对照组,做组织切片进行免疫组化研究。结果:COX-2在正常口腔黏膜不表达,bFGF在正常口腔黏膜仅为弱表达或不表达,COX-2、bFGF在口腔白斑中有一定的表达,染色强度与正常口腔黏膜相比具有显著性差异(P<0.01 ),COX-2、bFGF在口腔鳞癌中高表达,其染色强度强于口腔白斑(P<0.01),口腔鳞癌中COX-2的表达阳性率为82.61%,bFGF的表达阳性率为86.96%,二者共同表达阳性率为78.26%,r=0.8,P<0.05,二者表达呈正相关关系。结论:COX-2、bFGF在口腔鳞癌发生、发展中起着重要作用,二者表达显著相关,在口腔鳞癌的发生发展中有协同作用,COX-2可促进bFGF的形成。

口腔鳞癌与正常黏膜中FAPA基因mRNA的表达

目的:研究成纤维细胞激活蛋白((fibroblast activation protein alpha,FAPA)mRNA在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及配对正常口腔黏膜组织中的表达。方法:采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中FAPAmRNA的表达;所得数据用SAS6.12软件包进行χ2检验和t检验。结果:RT-PCR检测结果表明,FAPAmRNA在30例OSCC和配对正常黏膜的阳性率分别为83%(25/30)和40%(12/30)(P<0.001);总表达水平分别为3.58±0.46和1.27±0.21,上调2.82倍(P<0.0001)。结论:在OSCC的癌变过程中,FAPA基因过表达,可能是OSCC的一个靶基因;FAPA在OSCC诊断中具有应用价值。

VEGF-D在口腔鳞癌相关成纤维细胞的表达研究

目的:研究VEGF-D在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的表达情况以及其表达水平是否与口腔鳞癌淋巴结转移相关。方法:通过免疫组化和RT-PCR检测VEGF-D在NFs、无淋巴结转移CAFs、淋巴结转移CAFs的蛋白和mRNA表达情况。结果:成功培养和纯化CAFs,与NFs相比,CAFs阳性表达α-SMA,生长增殖速度明显增加,细胞排列混乱;VEGF-D在淋巴结转移CAFs的染色强度明显增加,用2-ΔΔCT法计算VEGF-D的mRNA表达水平分别为0.806 7±0.117、1.192 5±0.125、2.085 3±0.131。结论:与NFs相比,CAFs表达VEGF-D明显增加,且与患者淋巴结转移相关。

一株永生化口腔癌相关成纤维细胞系的建立及鉴定

背景:肿瘤相关成纤维细胞系是构成肿瘤微环境的重要细胞成分,但是在原代培养过程中极易老化和表型丢失,进而显著降低肿瘤相关成纤维细胞功能相关研究的实验重复性。目的:旨在建立一种永生化的口腔癌相关成纤维细胞系,为探索口腔癌中肿瘤相关成纤维细胞功能提供稳定的细胞实验材料。方法:采用酶消化法分离、纯化人口腔癌组织来源肿瘤相关成纤维细胞,利用包装有人端粒酶反转录酶(pBABE-hygro-hTERT)的慢病毒感染原代肿瘤相关成纤维细胞,鉴定其形态及其标志物,然后进行细胞增殖、衰老功能检测,对原代和永生化肿瘤相关成纤维细胞进行染色体核型分析、细胞系身份鉴定。结果与结论:①成纤维细胞永生化后,其标志物α-SMA、PDGFRβ以及FSP-1表达没有发现显著改变;②即使在传代15代后,永生化成纤维细胞的增殖速率明显优于非永生化成纤维细胞;③β-半乳糖苷酶染色结果显示:随着细胞代数增加,与非永生化成纤维细胞相比,永生化成纤维细胞未见明显衰老;④永生化成纤维细胞染色体核型仍保留正常细胞的基本特征,而未发生恶性转化;⑤短串联重复序列鉴定结果显示,永生化成纤维细胞为原代细胞,与已知细胞数据库信息均无重合;⑥以上结果说明,成功建立了口腔癌来源的永生化成纤维细胞系,为口腔癌肿瘤微环境研究提供进一步的实验基础。

口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤,与其他恶性肿瘤相似,其肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最重要的间质细胞,在肿瘤的增殖、转移、免疫耐受及治疗抵抗等方面发挥重要的调控作用。本文就OSCC中CAFs研究进展及其对临床治疗的启发,建立CAFs作为干预靶点,打破肿瘤细胞赖以生存的微环境,干扰肿瘤细胞的生长和侵袭,有效阻断肿瘤新生血管的形成,激活机体免疫功能,为OSCC辅助治疗提供新的思路和策略。

不同分化程度口腔鳞癌旁的成纤维细胞增殖活力比较

背景与目的:有关口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展的机制目前尚未阐明,过去多数研究仅单纯从上皮的角度进行探讨,忽略了间质(宿主)细胞的变异在OSCC发生发展中的重要作用。本研究探讨在不同分化程度OSCC旁的癌相关成纤维细胞(CAFs)其增殖活性是否存在差异。方法:将前期冻存的第三代不同分化程度OSCC旁的CAFs和同部位正常成纤维细胞(NFs)进行复苏并鉴定,测定细胞生长曲线、有丝分裂指数曲线、MTT法,了解各类细胞的增殖活性是否存在差异。重复试验3次,每次检测3孔细胞,将平均值作为最终结果,并用两因素方差分析对检测值进行统计分析。结果:CAFs每天的细胞生长计数值、有丝分裂计数值、MTT检测值均高于NFs,CAFs的生长及存活能力均强于NFs(P<0.05),不同分化程度OSCC旁的CAFs增殖活性的差异有显著性(P<0.05),分化程度较低的舌癌旁CAFs的增殖活性更强。结论:OSCC与CAFs存在交互作用,CAFs增殖活性的改变可能对OSCC的分化程度产生影响。

口腔癌相关成纤维细胞的特殊体外行为研究

目的探讨口腔颊癌中癌相关成纤维细胞(Carcinoma Associated Fibroblasts,CAFs)的特殊体外生物学行为。方法组织块贴壁法培养CAFs及正常颊黏膜成纤维细胞(Normal Fibrolasts,NFs);通过体外生长形态观察,增殖、粘附行为差异的区别,比较两种细胞的生物学行为差别。结果与NFs相比,CAFs均具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05)。结论口腔癌CAFs的体外增殖、粘附能力均高于NFs,这或许提示其在口腔癌的侵袭、转移中发挥了重要的作用。

肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞癌细胞生长和迁移的影响

目的研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨CAFs在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法采用原代培养的方法,培养口腔鳞癌相关成纤维细胞,光学显微镜观察其形态,免疫组化和免疫印迹实验进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖能力。transwell迁移实验检测CAFs诱导口腔鳞癌细胞迁移的能力;萤火虫荧光素酶报告系统检测CAFs对肿瘤细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验评价CAFs对肿瘤细胞克隆形成能力的影响。结果成功分离培养出口腔鳞癌来源的CAFs。CAFs能促进口腔鳞细胞的迁移、增殖和克隆形成等生物学行为。结论 CAFs能显著影响口腔鳞癌的增殖和迁移,表明其在口腔鳞癌的发生发展中发挥着一定的作用。

成纤维激活蛋白在口腔癌间质成纤维细胞中的表达及意义

目的探讨成纤维激活蛋白在口腔鳞状细胞癌(OSCC)间质成纤维细胞中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集存档的OSCC石蜡组织标本80例,以正常口腔黏膜(5例)、癌前病变(5例)为对照,制作组织切片后,以LsAB法行FAP免疫组化染色。结果成纤维激活蛋白在正常口腔黏膜和癌前期病变的间质成纤维细胞中表达阴性;在口腔鳞状细胞癌间质成纤维细胞中阳性表达,在口腔鳞状细胞癌组,随着细胞分化程度的逐渐降低,成纤维激活蛋白平均染色阳性标本百分率均有逐渐升高的趋势(P<0.01),且与口腔癌颈淋巴结转移的发生呈正相关(P<0.01)。结论FAP在口腔癌间质成纤维细胞中的表达可作为判断口腔鳞状细胞癌恶性程度的指标之一,成纤维激活蛋白可能在促进口腔癌侵袭转移中发挥重要作用。

口腔鳞状细胞癌肿瘤微环境细胞间相互作用的研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤微环境(TME)中包括肿瘤细胞、肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)、内皮细胞等。在OSCC的发生、发展过程中,肿瘤细胞产生某些物质影响TAMs和CAFs的募集、分化、活化等行为,TAMs和CAFs分泌细胞因子促进肿瘤细胞增殖、侵袭、转移等活动,它们之间的交互作用形成了有利的TME,在肿瘤发生发展的各个阶段起重要作用。本文就肿瘤细胞分别与TAMs和CAFs的交互作用以及CAFs对TAMs的作用的最新进展作一综述。

干扰FGF4表达可抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力

目的探索干扰成纤维细胞生长因子4(fihmhlast growth factor 4,FGF4)表达对口腔鱗状细胞癌(oral squamous fell rarrinoma,0SCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响_,方法培养5株0SCC细胞株并检测FGF4 DMA拷贝数及mRNA的表达变化;转染siRNA干扰FGF4表达并进行验证;干扰FGF4表达后,采用CCK-8检测0SCC细胞株HSC-3、H3I4细胞增殖能力的变化,采用Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果同对照组相比,干扰FGF4表达后,HSC-3、H314细胞增殖能力明显下降(P<0.05)。在HSC-3中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数分别下降了64.52%、66.81%;在H314细胞系中,FGF4siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数下降了66.81%、82.01%。同对照组相比,在HSC-3中,FGF4siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了52.34%、49.89%。在H314中,FGF4 siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了75.3%、90.63%。结论在0SCC细胞中,干扰FGF4表达可抑制0SCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力.

成纤维细胞生长因子受体样蛋白1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖和迁移能力的影响

目的检测成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(FGFRL1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况,并探究其在OSCC细胞增殖和迁移中的作用。方法利用Western blot检测FGFRL1蛋白在OSCC组织、癌旁正常组织、OSCC细胞株及正常上皮细胞中的表达;通过FGFRL1小干扰RNA(siRNA)干扰HN4细胞,影响FGFRL1蛋白的表达,利用CCK-8及Ki67实验检测FGFRL1对肿瘤细胞增殖能力的影响;细胞划痕及Transwell实验检测FGFRL1对肿瘤细胞迁移能力的影响;利用Western blot检测其对上皮间充质转化(EMT)相关指标蛋白的影响。结果FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织(t=2.820,P=0.0478);FGFRL1蛋白在OSCC细胞系中的表达量高于在HOK细胞中的表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结果显示,FGFRL1 RNA在HOK细胞中的表达量低于在OSCC细胞系中的表达量。将FGFRL1 siRNA转染的HN4细胞作为实验组,NC siRNA处理的HN4细胞作为对照组。Ki67免疫荧光试验结果显示,实验组与对照组在48 h(P=0.4781)及72 h(P=0.3342)细胞增殖活力差异无统计学意义。细胞划痕实验结果显示,在12 h(P=0.0228)、24 h(P=0.0051)及36 h(P=0.0095)实验组细胞划痕面积百分比均比对照组小。Transwell实验结果显示,实验组在16 h(P=0.0087)及24 h(P=0.0086)细胞迁移数较对照组少。FGFRL1 siRNA干扰使得HN4细胞神经性钙黏附素蛋白和波形蛋白的表达量下降,上皮钙黏附素蛋白的表达量上升。结论FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织,在OSCC细胞株中的表达量高于正常上皮细胞。FGFRL1基因沉默对肿瘤细胞增殖无影响,但对肿瘤细胞EMT和细胞迁移具有一定的抑制作用。

口腔鳞癌对牙龈成纤维细胞转化为肿瘤相关成纤维细胞的影响

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的来源。方法:分离正常牙龈组织和口腔鳞癌组织的成纤维细胞,将口腔鳞状细胞癌细胞Cal27培养基加入到正常牙龈成纤维细胞内(NFs);以NFs作为阴性对照、来自于口腔鳞癌组织的成纤维细胞为阳性对照,通过免疫细胞化学染色、实时定量RT-PCR等技术对其进行对比研究。结果:与NFs相比,CAFs胞体更大,排列更加混乱,生长更为快速,形态明显不同。免疫细胞化学染色结果显示:CAFs波形蛋白(VIM)呈阳性,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)部分呈强阳性、部分呈阴性,成纤维细胞激活蛋白(FAP)呈强阳性,血小板源性生长因子受体α(PDGFR-α)呈阳性,细胞角蛋白(CK)呈阴性;NFs的VIM呈阳性,其余呈阴性;NFs与Cal27条件培养基共培养后,可见α-SMA表达部分阳性,FAP和PDGFR-α表达呈强阳性。实时定量RT-PCR结果发现:与NFs比较,CAFs、NFs与Cal27条件培养基共培养后α-SMA、FAP的表达明显上调,PDGFR-α的表达明显下调。结论:口腔鳞状细胞癌细胞可激活NFs转化为CAFs,NFs可能为CAFs的来源之一。

miR-195过表达对人口腔鳞癌细胞增殖的影响及机制

目的探讨miR-195过表达对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的影响及作用机制。方法将培养好的SCC-4细胞随机分组,设计合成miR-195 mimic,并将对照试剂、miR-195 mimic试剂分别转染至对照组、miR-195 mimic组。用细胞活力测定(MTS)实验检测miR-195过表达对细胞增殖的影响;用生物信息软件及荧光素酶报告基因实验检测miR-195对成纤维细胞生长因子7(FGF7)基因的靶向调控作用;qRT-PCR检测miR-195过表达对细胞内FGF7mRNA表达的影响。构建FGF7过表达质粒,将FGF7过表达对照vector+miR-195 mimic试剂、FGF7过表达+miR-195 mimic试剂分别转染至miR-195 mimic+vector组、miR-195 mimic+FGF7组,MTS实验检测FGF7对miR-195 mimic SCC-4细胞增殖的影响,Western blotting实验检测细胞内磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)蛋白的表达。结果细胞贴壁第3、4天miR-195 mimic组细胞增殖能力较对照组低(P均<0.05)。生物信息软件预测和荧光素酶报告基因实验证实,FGF7为miR-195的靶基因。细胞贴壁第2、3、4天miR-195 mimic+FGF7组细胞增殖能力较miR-195 mimic+vector组高(P均<0.05)。miR-195 mimic组pI3K、pAKT蛋白相对表达量低于对照组(P均<0.05),miR-195 mimic+FGF7组pI3K、pAKT蛋白相对表达量高于miR-195 mimic组(P均<0.05)。结论miR-195过表达可抑制DSCC细胞增殖,其作用机制可能为通过靶向下调FGF7表达以降低PI3K/AKT信号通路活性。