OrchidBase 3.0:一个兰花基因功能和基因组进化研究的数据库

兰科为被子植物的最大科,兰科植物是经济价值非常高的世界性观赏植物,其基因组学和转录组学数据可为进一步推动兰花育种和研究提供帮助.本研究团队在建立的OrchidBase1.0、2.0数据库的基础上,利用小兰屿蝴蝶兰的全基因组数据建立了基于网页版的OrchidBase3.0数据库.OrchidBase3.0数据库包含了小兰屿蝴蝶兰基因组拼接支架序列的信息以及基因注释、基因定位、基因结构、KEGG途径和BLAST搜索等内容;此外,该数据库也提供了小兰屿蝴蝶兰的基因序列和每千碱基读数每百万映射读数(RPKM).OrchidBase3.0数据库的在线资源可以通过网页浏览、文本和BLAST搜索获取,搜索结果会显示在网站上并可供下载,用户可通过该数据库下载小兰屿蝴蝶兰的基因组拼接支架序列及预测的基因和蛋白质序列.http://orchidbase.itps.ncku.edu.tw为OrchidBase3.0数据库的免费网站链接.

不同施肥浓度对蝴蝶兰生长及开花的影响

以3.5寸(11.7 cm)蝴蝶兰“火凤凰”苗为试验材料,将花多多肥料分别稀释500倍、1000倍、1500倍、2000倍后进行施肥处理,研究不同施肥浓度对蝴蝶兰生长开花的影响。结果表明:使用稀释2000倍的20-20-20花多多肥更利于蝴蝶兰生长开花。

影响蝴蝶兰生长发育的环境因子及花期调控研究进展

主要阐述了温度、光照、基质、水分、肥料等环境因素对蝴蝶兰营养生长和生殖生长的影响,同时综述 了近年来在花期调控方面的研究成果及其在生产中的应用,展望了今后的研究方向。

蝴蝶兰种胚萌发影响因素的研究

改良KC培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基,添加10%椰子汁或香蕉泥,对种子萌发有促进作用,椰子汁效果好于香蕉泥。不同的光照处理对诱导蝴蝶兰种子萌发的影响差异不显著。授粉后3～4个月果龄的蒴果,其种子播种萌发率高,原球茎块多。MS+(0.5～1.0)mg/L6 BA为最佳分化培养基,添加椰子汁有促进生长作用。蝴蝶兰小苗生根的适宜环境条件:温度为26±2℃,光照1000lx左右,培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+10%椰子汁(v/v)。

灭蝇胺对蝴蝶兰迟眼蕈蚊幼虫的生物活性

研究了灭蝇胺等几种杀虫剂对蝴蝶兰迟眼蕈蚊幼虫的生物活性。结果表明:灭蝇胺对迟眼蕈蚊5日龄幼虫的活性随处理时间的延长而提高,100 mg/L浓度处理后72 h后校正死亡率为52.58%。对不同龄期的幼虫活性不同,低龄幼虫对灭蝇胺敏感,随着龄期增加,敏感性降低,100 mg/L浓度处理对2日、4日和6日龄幼虫的校正死亡率分别为97.24%、81.88%和67.94%。对同一龄期幼虫的毒杀效果随质量浓度的增加而增加。灭蝇胺对迟眼蕈蚊幼虫的生长发育有明显抑制,处理后幼虫出现畸形,化蛹率和羽化率降低,幼虫历期延长。

蝴蝶兰实生苗原球茎诱导研究

利用两个蝴蝶兰（Ｐｈａｌａｅｎｏｐｅｉｓｓｐ．）品种的实生苗根尖、茎尖、生长点外围组织以及幼叶为外植体诱导类原球茎状球体（Ｐｒｏｔｏｃｏｒｎ－ｌｉｋｅｂｏｄｙ，简称原球茎）。各供试外植体的诱导均获成功，最适于叶片原球茎产生的培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ３．０（ｍｇ／Ｌ）；适于根尖，茎央及其外围组织诱导的激素浓度为６－ＢＡＯ．５（ｍｇ／Ｌ）。未切割的幼叶获得了９０％的高诱导率。

3种热带兰感染2种病毒的症状探讨

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害海南兰花最普遍的2种病毒。CymMV侵染蝴蝶兰后引发黄化斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等多种症状;侵染石斛兰引发花叶、黄化斑、全叶黄化或红化、契形坏死、疱状突出等症状;侵染文心兰引发花叶、黄化、坏死、畸形生长等症状。ORSV的症状种类则相对简单,蝴蝶兰上引发环斑、系统性黄化、凹陷坏死、疱状突出等症状;文心兰上主要表现花叶;石斛兰上未检测到ORSV。

蝴蝶兰叶片外植体褐变过程中PAL基因的表达变化

研究了蝴蝶兰(Phalaenopsis sp.)叶片外植体褐变过程中PAL基因表达的变化。结果表明,在整个褐变过程中,外植体的PAL基因表达出现差异,离体培养第3天的表达明显提高,一直到第8天还维持较高表达水平,以后随着外植体褐变的加重,PAL基因表达水平逐渐降低。与对照相比,在Fe盐浓度加倍为55.6 mg L-1培养基中培养的外植体PAL基因表达水平提高发生的时间比对照早,培养第2天就明显增强,随培养天数的延长,一直维持较高的表达水平;其PAL活性也高于对照,两种培养条件下,外植体总酚含量都随着其褐变加重而增加,说明PAL基因表达与蝴蝶兰外植体褐变过程相关。

蝴蝶兰分子标记技术应用研究进展

综述了分子标记技术的主要类型和特点,以及分子标记在蝴蝶兰遗传多样性、分类与亲缘关系、种质资源鉴定等方面的应用概况。

国内新记录种太平洋细须螨及其对蝴蝶兰的发生危害调查

蝴蝶兰是兰科植物中最具观赏性的兰花之一。2009-2013年期间,调查发现一种细须螨为害温室大棚中的蝴蝶兰,该螨严重影响蝴蝶兰的品质和经济价值。结合外部形态特征和基于28SrDNA序列特征建立的系统发育树鉴定出该螨为太平洋细须螨Tenuipalpus pacificus Baker。该螨主要分布于热带和亚热带地区,本文首次报道了在中国大陆发现太平洋细须螨危害。蝴蝶兰温室大棚具有适合其生存的有利环境,在我国大陆定殖的可能性较大,必须引起足够的重视。

蝴蝶兰蔗糖合成酶基因的cDNA克隆及其表达分析

利用低夜温诱导的蝴蝶兰花芽的抑制消减杂交文库中分离的蔗糖合成酶基因的ESTs片段,采用RT-PCR和RACE技术,从蝴蝶兰花芽中克隆得到蔗糖合成酶基因的全长cDNA,命名为PhSUS,GenBank登录号JX162557。该基因全长2 816 bp,包含147 bp的5′非编码区、218 bp的3′非编码区和一个长度为2 451 bp编码816个氨基酸的开放阅读框。PhSUS预测的分子量为93.30 ku,等电点为5.95。蛋白同源性分析结果表明,PhSUS与兰科植物的文心兰、石斛兰和莫氏兰(Mokara)等的蔗糖合成酶有很高同源性。保守结构域分析结果表明,PhSUS含有蔗糖合成酶和葡糖基转移酶两个保守功能域及4个ADP结合位点。表达分析结果表明,PhSUS在检测的组织中都有表达,但表达丰度不同。PhSUS在花蕾发育中后期、成熟花和花器官的表达量都较营养阶段根和叶中的表达量高。PhSUS的克隆为研究其参与花芽分化和发育的表达调控奠定了重要基础。

影响蝴蝶兰花梗芽增殖率因素的研究

[目的]研究影响蝴蝶兰花梗芽增殖率的因素。[方法]在蝴蝶兰花芽产生期分别采集2、3、4、5和6cm的花梗芽为试材，并把材料设成1／4、1／2、3／4的节段，研究花梗芽采摘时间、培养基配方和暗培养对蝴蝶兰花梗芽增殖率的影响。[结果]5—6cm的花梗芽和3～4cm的花梗芽在分化腋芽数量上有所差异，但在总增殖率上没有明显差异。暗培养能更好诱导不定芽的产生，但对1／4和1／2节段的花梗芽影响较大。从节位来看，3／4的花梗芽诱导效果最好。筛选培养基的正交试验发现，KCl及KT能有效提高增殖率，N从对花梗芽增殖有抑制作用。[结论]试验筛选的培养基1／2MS＋KCl 1．0g／L＋BA5．0mg／L＋NAA0．6mg／L＋KT 1．0mg／L可使蝴蝶兰花梗芽的增殖率达到8．5个．是试验初始增殖率的3～4倍。

细胞分裂素对蝴蝶兰体细胞胚诱导及大分子代谢研究

以含6-BA、2,4-D培养基诱导蝴蝶兰外植体。6-BA可从嫩茎切块诱导出胚性愈伤组织，细胞富含淀粉粒，而2，4-D或2，4-D加6-BA诱导得到的愈伤组织不能分化。6-BA易于从嫩叶切片诱导胚性愈伤组织，进行体细胞胚发生过程的显微观察。在6-BA诱导嫩叶切片外植体期间，DNA含量前期平缓上升，第25d后急剧上升。RNA含量开始诱导就上升，第11-18d达到高峰。水溶性蛋白含量上升启动稍晚。在第25d达到高峰。

儿茶素对蝴蝶兰叶片离体培养褐变发生的影响

用0.3 g/L儿茶素处理蝴蝶兰叶片外植体,在MS+3 mg/L 6-BA(pH 5.8)培养基上培养4 d,外植体褐变率高于对照227.6%。用香草醛-盐酸溶液染色反应法发现鞣质分布在维管束和细胞间隙。叶片剪切的外植体(培养0 d)鞣质含量较高,培养4 d降低,8 d后再升高。儿茶素处理的外植体鞣质含量明显高于对照。在培养期间,儿茶素处理的外植体PPO、POD和PAL活性高于对照外植体,其中POD活性在第8天达到最大值,PPO和PAL活性在培养第12天达到高峰。

LED光源对蝴蝶兰花卉生长发育影响研究进展

通过文献调研与实际调查,综述了近年来国内外LED光源对蝴蝶兰光合特性、组织培养、幼苗生长、花芽分化、花期调控等方面影响的研究进展,并展望了LED光源在蝴蝶兰生产应用上今后的研究方向。

蓝萼香茶菜叶与茎乙醇提取物的抑菌活性研究

[目的]研究蓝萼香茶菜叶和茎乙醇提取物的抑菌活性。[方法]通过生长速率法和滤纸片法，分别测定蓝萼香茶菜叶和茎乙醇提取物对2株蝴蝶兰茎腐病疑似病原镰刀菌的EC50和对3株细菌的抑菌效果。[结果]在0～50mg／ml的较低浓度时，叶和茎乙醇提取物的抑菌效果均不显著；在50～200mg／ml的较高浓度时，叶提取物对G^＋菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有较强抑菌活性，而茎提取物对二者仅具有微弱的抑菌效果，叶和茎提取物对G^-菌大肠杆菌均无抑菌效果。蓝萼香茶菜叶和茎提取物对2种疑似病原镰刀菌M14和M5均具有一定的抑制效果，对M4、M5的EC50值分别为22．72、18．27mg/ml和43．33、42．57mg／ml。[结论]蓝萼香茶菜叶和茎提取物对革兰氏阳性菌具有较好的抑菌作用，对革兰氏阴性菌无抑菌作用，而对镰刀菌则有较强的抑菌效果，这对更好开发和利用该天然药物具有一定的参考价值。

蝴蝶兰杂交育种技术的初步研究

选取7个蝴蝶兰品种进行自交与杂交,共获得3个自交组合与9个杂交组合。各组合授粉后7～9 d子房开始膨大,约于50 d左右蒴果大小趋于平稳状态,140～150 d采摘接种。通过观察得出,红天使×白天杂交组合的生长势指数最高,金色兄弟×红天使杂交组合的生长势指数最低。不同杂交组合的最佳采摘期有所差别。

几种培养基及光照对蝴蝶兰叶片外植体褐变的影响

蝴蝶兰叶片外植体在MS纸桥培养基上培养10d发生褐变率较低,1/2MS次之,MS、B5和N6培养基外植体褐变率最高。MS培养基中铁盐加倍或微量元素缺乏造成外植体严重褐变,培养基积累很多褐色物质;减少琼脂含量,外植体褐变加重;添加柠檬酸可减轻外植体褐变;而添加活性炭、抗坏血酸或PVP对减轻外植体褐变无显著作用。光照强度增加外植体褐变严重。

蝴蝶兰茎尖培养脱病毒技术初步研究

对培养基的无机盐浓度、钾浓度比例、氮素型态、植物生长调节剂进行了试验优化,研究了培养基和外植体取材对蝴蝶兰茎尖生长点培养脱病毒的影响。结果表明:经MS培养基改良的KN培养基,其1/5大量元素的无机盐浓度适合蝴蝶兰茎尖生长点的培养。一定浓度范围内,提高氮源中硝酸态氮的比例,或提高培养基中钾的浓度比例,均有助于蝴蝶兰茎尖生长点培养的存活。植物生长调节剂NAA0.5mg.L-1+6-BA3.5mg.L-1的组合适合蝴蝶兰茎尖生长点培养的存活和类原球茎(Protocorm-Like Body,PLBs)的诱导。茎尖取材大利于培养存活,但是不利于脱病毒效果。齿舌兰轮斑病毒(简称ORSV)的茎尖生长点脱病毒难度较建兰花叶病毒(简称CymMV)的脱病毒难度大。蝴蝶兰茎尖培养脱病毒取材外植体须小于0.4mm,附带叶原基不能多于1个。