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家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达
1
作者
王强
陈克平
+3 位作者
郭忠建
姚勤
王海燕
陈慧卿
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期3286-3291,共6页
【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将...
【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过转座作用,经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA,用脂质体介导转染家蚕BmN细胞,得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹,5d后观察到很强的荧光。结果表明构建的Bac-to-Bac系统能在家蚕细胞和蛹体中正确的快速表达外源基因。【结论】证明BmNPV的Bac-to-Bac是一个快速表达系统,适合在家蚕上广泛应用。
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关键词
BMNPV
Bac-to-Bac表达系统
orf90
EGFP基因
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题名
家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达
1
作者
王强
陈克平
郭忠建
姚勤
王海燕
陈慧卿
机构
江苏大学生命科学研究院
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期3286-3291,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划("973"计划
2005CB121000)
江苏大学高级人才基金(1283000169)
文摘
【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过转座作用,经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA,用脂质体介导转染家蚕BmN细胞,得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹,5d后观察到很强的荧光。结果表明构建的Bac-to-Bac系统能在家蚕细胞和蛹体中正确的快速表达外源基因。【结论】证明BmNPV的Bac-to-Bac是一个快速表达系统,适合在家蚕上广泛应用。
关键词
BMNPV
Bac-to-Bac表达系统
orf90
EGFP基因
Keywords
BmNPV Bac-to-Bac expression system
orf90
egfp
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达
王强
陈克平
郭忠建
姚勤
王海燕
陈慧卿
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008
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