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Identification of Molecular Marker Linked to Salt Tolerance Gene in Alfalfa 被引量:2
1
作者 YANG Qing-chuan HAN Jian-guo +1 位作者 SUN Yan WU Ming-sheng 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第10期781-787,共7页
The study has established the F2 offspring obtained by crossing salt-tolerant with salt-sensitive alfalfa, and appraised the salt-tolerant F2 offspring seedling was evaluated in pot culture. With the F2 segregated pop... The study has established the F2 offspring obtained by crossing salt-tolerant with salt-sensitive alfalfa, and appraised the salt-tolerant F2 offspring seedling was evaluated in pot culture. With the F2 segregated population, the research has obtained a molecular marker linked with salt-tolerant genes of alfalfa using the improved BSA combined with RAPD. The RAPD PCR products were excised from the agarose gel and purified using a kit, then were mixed with pMD-18T vector and sequenced. Sequencing result indicated the RAPD marker was 1 438 bp in length. Similarity researches using blast in Genbank indicated that the nucleotide sequence of the RAPD marker showed 93% and 91% similarity with mth2-6el8 gene fragment (347 bp) and ruth2-33122 gene fragment (334 bp) of Medicago truncatula respectively. Medicago truncatula is a close relative of alfalfa and Mth2-6el8 is a molecular marker of the gene coding for a cysteine protease which was saltinducible in some plants. These results indicated the RAPD marker was possibly related to cysteine protease genes in alfalfa. 展开更多
关键词 ALFALFA Salt tolerance Molecular marker Cysteine protease
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耐盐碱性蛋白酶菌株LK-3的筛选及酶学性质 被引量:1
2
作者 刘可玉 宁喜斌 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期46-53,共8页
为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌(Ba... 为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌(Bacillus stratosphericus),并命名为B. stratosphericus LK-3。酶学性质研究结果显示,该酶的最适作用条件为温度35℃、p H 8.5、最适接种体积分数7%,该酶在上述条件下发酵72 h的酶活力为(581.74±0.81) U/mL。此外该酶具有较好的耐盐性,即使在40 g/dL的高饱和盐质量浓度下仍然保持22.03%的相对原始酶活力。蛋白酶的耐盐性是一个有价值的特性,可将其纯化后作为洗涤剂的生物添加剂应用于工业生产。 展开更多
关键词 碱性蛋白酶 菌株LK-3筛选 同温层芽孢杆菌 酶学性质 耐盐菌
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枯草芽孢杆菌对环境耐受性和产中性蛋白酶能力研究 被引量:2
3
作者 李振 崔艳红 +1 位作者 刘长忠 袁梦 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期81-87,92,共8页
为了探究枯草芽孢杆菌对环境耐受性及产中性蛋白酶的能力,试验模拟饲料加工温度、胃肠道酸性环境、胆盐对枯草芽孢杆菌进行环境耐受性评定,在单因素(pH值、时间、温度、接种量、碳源、碳源添加量和金属离子)试验基础上采用正交试验以中... 为了探究枯草芽孢杆菌对环境耐受性及产中性蛋白酶的能力,试验模拟饲料加工温度、胃肠道酸性环境、胆盐对枯草芽孢杆菌进行环境耐受性评定,在单因素(pH值、时间、温度、接种量、碳源、碳源添加量和金属离子)试验基础上采用正交试验以中性蛋白酶活力为评定指标,对枯草芽孢杆菌培养条件进行优化。结果表明:枯草芽孢杆菌对温度、胃肠道酸性环境和胆盐均具有一定耐受性;单因素试验中最佳pH值为5,培养时间为24 h,培养温度为30℃,接种量为2%,碳源为淀粉,淀粉添加量为3%;金属离子Mg^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Zn^(2+)对产酶均具有抑制作用,不在培养基中添加金属离子。正交试验优化后枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶活力最佳培养条件为pH值6,淀粉添加量3%,培养温度35℃,培养时间24 h,枯草芽孢杆菌种子菌液接种量3%,在最优条件下,酶活力可达40.05 U/mL。说明枯草芽孢杆菌可耐受动物胃肠道环境且培养条件优化后中性蛋白酶酶活力显著提高。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 胃肠道环境 耐受性 中性蛋白酶 产酶条件
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产蛋白酶芽孢杆菌的筛选、耐酸性驯化及蛋白酶酶学性质分析 被引量:1
4
作者 张璋 赵腾飞 +1 位作者 李红霞 宋露露 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第1期84-90,共7页
该研究利用透明圈法及蛋白酶活力测定从高温大曲中筛选高产蛋白酶的菌株,通过形态学观察和分子生物学技术对其进行菌种鉴定。进一步对筛选菌株的耐酸性进行驯化,并对其耐受性及所产蛋白酶酶学性质进行研究。结果表明,分离筛选到一株高... 该研究利用透明圈法及蛋白酶活力测定从高温大曲中筛选高产蛋白酶的菌株,通过形态学观察和分子生物学技术对其进行菌种鉴定。进一步对筛选菌株的耐酸性进行驯化,并对其耐受性及所产蛋白酶酶学性质进行研究。结果表明,分离筛选到一株高产蛋白酶活力的菌株Cy3,经鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),其在最适生长pH 6条件下所产蛋白酶活性为505.0 U/m L。通过对菌株Cy3进行耐酸性驯化后,得到菌株Cy3-驯,成功将其生长p H驯化至5,培养15 h时OD600 nm值提高2.54倍。菌株Cy3-驯所产蛋白酶的最适反应温度从60℃提高至70℃,最适反应p H值为6,但活性及稳定性略有下降。菌株Cy3-驯具有较好的NaCl和葡萄糖耐受性,最高耐受含量分别为15%和60%,同时在乙醇体积分数8%以及乳酸体积分数3%时仍能生长。 展开更多
关键词 蛋白酶 芽孢杆菌 分离鉴定 耐酸性驯化 酶学性质
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豆豉中微球菌的分离及其产蛋白酶特性研究 被引量:10
5
作者 冮洁 吴耘红 +1 位作者 蒋继丰 张晓宇 《中国调味品》 CAS 北大核心 2004年第5期22-24,34,共4页
从自然发酵的细菌型豆豉中分离出耐盐性的微球菌,并对其进行了菌种鉴定,确定为藤黄微球菌(Micrococcusluteus)。研究了在蒸煮的大豆培养基上其产蛋白酶的特性,结果表明:该菌株具有一定的产蛋白酶的能力,产生的主要是碱性蛋白酶。
关键词 豆豉 微球菌 耐盐性 蛋白酶
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不同菌种制备酱油大曲生产酶系特性及其耐盐性的比较 被引量:5
6
作者 陈之瑶 冯云子 +1 位作者 尹文颖 赵谋明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期7-11,共5页
采用4株米曲霉菌种(j2、y2、x42、x72)与对照米曲霉菌株(沪酿3.042)制备大曲,探究其所产中性蛋白酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶以及糖化酶在盐浓度为0%、5%、10%、15%、20%下酶活力变化。实验结果表明,5株菌株所产酶系中,中性蛋白酶活随盐... 采用4株米曲霉菌种(j2、y2、x42、x72)与对照米曲霉菌株(沪酿3.042)制备大曲,探究其所产中性蛋白酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶以及糖化酶在盐浓度为0%、5%、10%、15%、20%下酶活力变化。实验结果表明,5株菌株所产酶系中,中性蛋白酶活随盐水浓度的增加显著(P<0.05)下降,酸性蛋白酶和糖化酶在5%盐浓度下活力显著下降(P<0.05),随后酶活力下降速率减慢,α-淀粉酶在5%的盐浓度下无显著下降(P>0.05),随后下降速率加快。此外,相同盐浓度下淀粉酶比蛋白酶更稳定,5株米曲霉菌株的α-淀粉酶和糖化酶在20%的盐浓度下残留率均达到50%。菌株y2、j2所产中性蛋白酶和菌株x72所产酸性蛋白酶的耐盐性优于对照菌株。 展开更多
关键词 米曲霉 大曲 蛋白酶 淀粉酶 耐盐性
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地衣芽孢杆菌YP1A耐有机溶剂蛋白酶基因的克隆与功能表达 被引量:4
7
作者 何小丹 李霜 +1 位作者 孙蓓蓓 何冰芳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2009年第6期67-73,共7页
根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包... 根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包括信号肽、前肽及编码254个氨基酸的成熟肽序列。相关基因分析表明,YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因与地衣芽孢杆菌ATCC14580的碱性蛋白酶基因仅有6个氨基酸残基差异。构建2种含YP1A碱性蛋白酶CDS的组成型穿梭表达载体pHY/aprYP与pHY/aprP43,前者采用YP1A蛋白酶自带的启动子,后者则采用来自于质粒pP43NMK的P43强启动子。利用这2种表达载体在枯草芽孢杆菌WB800中成功进行蛋白酶的功能表达,其中P43强启动子的表达能力明显优于碱性蛋白酶自带的启动子,表达的蛋白酶比酶活为395 U/mL。重组菌表达的碱性蛋白酶在体积分数50%的亲水及疏水有机溶剂中表现出了很好的耐受性,验证了克隆基因为地衣芽孢杆菌YP1A的高强度耐有机溶剂碱性蛋白酶基因。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌YP1A 耐有机溶剂蛋白酶 克隆 表达
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一株产低温蛋白酶芽胞杆菌FJAT-24893的筛选与鉴定 被引量:2
8
作者 刘国红 刘波 +4 位作者 陈峥 蓝江林 车建美 陈倩倩 李安琪 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第10期954-957,共4页
为了解西藏尼玛县甲热布错湖及其周边土壤的微生物多样性,研究低温蛋白酶的高效生产生物技术,采用温度梯度法和稀释法,NA平板涂布分离可培养芽胞杆菌,通过酪素培养基筛选产蛋白酶的耐低温菌株,对甲热布错湖耐低温菌进行分离,并对其中的... 为了解西藏尼玛县甲热布错湖及其周边土壤的微生物多样性,研究低温蛋白酶的高效生产生物技术,采用温度梯度法和稀释法,NA平板涂布分离可培养芽胞杆菌,通过酪素培养基筛选产蛋白酶的耐低温菌株,对甲热布错湖耐低温菌进行分离,并对其中的产低温蛋白酶菌株进行筛选,分析分离菌株生理生化特征、最适产酶条件,结合16SrRNA基因序列同源性分析确定产低温蛋白酶菌株的多样性和系统进化地位。从获得的16株分离物中筛选到1株产低温蛋白酶芽胞杆菌菌株FJAT-24893,经16SrRNA鉴定为耐寒芽胞杆菌(Bacillus frigoritolerans)。该菌株最适产酶温度为25℃、最适pH为8。 展开更多
关键词 芽胞杆菌 耐低温蛋白酶 鉴定
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山西老陈醋发酵过程中高产蛋白酶芽孢杆菌的筛选与鉴定 被引量:3
9
作者 乔羽 于迪 +2 位作者 范振宇 邢晓莹 王如福 《食品与发酵科技》 CAS 2017年第6期11-16,33,共7页
以山西老陈醋发酵过程中不同发酵天数的酒醪和醋醅为样品,采用水解圈法和林酚法筛选高产蛋白酶的芽孢杆菌。得到一株产中性蛋白酶和酸性蛋白酶能力相对较高菌株CD92-3,其中性蛋白酶活力达到914.22U/mL,酸性蛋白酶活力达到92.11U/mL。环... 以山西老陈醋发酵过程中不同发酵天数的酒醪和醋醅为样品,采用水解圈法和林酚法筛选高产蛋白酶的芽孢杆菌。得到一株产中性蛋白酶和酸性蛋白酶能力相对较高菌株CD92-3,其中性蛋白酶活力达到914.22U/mL,酸性蛋白酶活力达到92.11U/mL。环境耐受性分析表明:该菌株能耐受老陈醋发酵环境中乙醇浓度、pH及温度。通过形态学观察、生理生化试验及16S rDNA鉴定,菌株CD92-3初步确定为Bacillus siamens。 展开更多
关键词 山西老陈醋 蛋白酶 耐受性分析 16S r DNA鉴定
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耐高温蛋白酶菌株的筛选 被引量:6
10
作者 胡青平 徐建国 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期20-21,共2页
研究了土壤中耐高温蛋白酶菌株的筛选。采用平板透明圈法从7份土样中筛选到3株产蛋白酶菌株G1、G2、G3,运用菌落和菌体形态进行观察,初步鉴定G1、G2为芽孢杆菌属,G3为假单孢菌属。并对它们分别进行逐级升温驯化培养试验,结果表明:三株... 研究了土壤中耐高温蛋白酶菌株的筛选。采用平板透明圈法从7份土样中筛选到3株产蛋白酶菌株G1、G2、G3,运用菌落和菌体形态进行观察,初步鉴定G1、G2为芽孢杆菌属,G3为假单孢菌属。并对它们分别进行逐级升温驯化培养试验,结果表明:三株菌的最适生长温度均为43℃,其中G2、G3菌耐热性较差,在55℃高温下终止产酶,G1菌经驯化培养后,能耐67℃高温,且酶活力达48%,为拓宽酶制剂的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 筛选 蛋白酶菌株 驯化 耐高温
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蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应 被引量:2
11
作者 马国芳 王江 张崇邦 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期882-887,共6页
本文研究了Pb、Zn、Cu和Cd对3种蛋白酶产生菌:碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacillus licheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillus usamii 537)生长及其酶活性的影响,并采用生长抑制皿分... 本文研究了Pb、Zn、Cu和Cd对3种蛋白酶产生菌:碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacillus licheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillus usamii 537)生长及其酶活性的影响,并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、Zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分,分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC)。结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后,对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用。碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性,其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性,而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态。3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0mmol/L~6.0mmol/L),其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5mmol/L~0.75mmol/L)。 展开更多
关键词 蛋白酶分泌菌 重金属 生长 酶活性 耐性与抗性
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降解菜籽饼粗蛋白耐盐菌的筛选、鉴定及固体发酵的初步研究 被引量:2
12
作者 吴民熙 刘清术 +1 位作者 刘前刚 单世平 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期309-313,共5页
从保存6个月含菜籽饼的堆肥样品中筛选到3株耐盐菌株A2、A4、A7,这些菌株能以菜籽饼为氮源生长,最高耐盐浓度达到10%,经分子生物学及系统发育分析,A2、A4为解淀粉芽孢杆菌,A7为栗褐芽孢杆菌,通过单一菌株固体发酵菜籽饼试验,这些细菌均... 从保存6个月含菜籽饼的堆肥样品中筛选到3株耐盐菌株A2、A4、A7,这些菌株能以菜籽饼为氮源生长,最高耐盐浓度达到10%,经分子生物学及系统发育分析,A2、A4为解淀粉芽孢杆菌,A7为栗褐芽孢杆菌,通过单一菌株固体发酵菜籽饼试验,这些细菌均对菜籽饼表现出了一定的降解能力。 展开更多
关键词 菜籽饼 蛋白酶活力 耐盐性 菌种鉴定 单一菌种固体发酵
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高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质 被引量:1
13
作者 姚忠 孙蓓蓓 +1 位作者 李霜 何冰芳 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1195-1199,共5页
分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YP1所产的溶剂稳定性蛋白酶.发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化,得到电泳纯的蛋白酶;分子量约为28kDa,纯化蛋白酶的比酶活达到1.18×105U/... 分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YP1所产的溶剂稳定性蛋白酶.发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化,得到电泳纯的蛋白酶;分子量约为28kDa,纯化蛋白酶的比酶活达到1.18×105U/mg,纯化倍数为37.2,酶活回收率为20.8%.纯化的YP1蛋白酶对50%(φ)的多种亲水或疏水有机溶剂具有很高的耐受性,其中50%(φ)的DMF和DMSO能显著促进YP1蛋白酶活力.YP1蛋白酶为Zn2+蛋白酶,最适反应温度为55℃,最适反应pH为10.0,pH8.0~13.0范围内具有高活力.以酪蛋白为底物,YP1蛋白酶的米氏常数Km为0.048g/L. 展开更多
关键词 碱性蛋白酶 耐有机溶剂 地衣芽孢杆菌 纯化 表征
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一株耐盐性蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究 被引量:2
14
作者 付瑞敏 蔺芳 陈五岭 《中国调味品》 CAS 北大核心 2016年第8期53-57,64,共6页
通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,... 通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,对其进行He-Ne激光诱变,获得遗传稳定性良好的突变株DB-12-16,其所产蛋白酶的酶活最高可达132U/mL,此外,还可耐受25%浓度的氯化钠。酶学性质研究结果表明:突变株所产蛋白酶具有较高的温度和pH适应性。作为一种耐盐且高产蛋白酶的菌,该突变株在食品生产及环境修复等方面有极为广阔的应用前景。 展开更多
关键词 耐盐 蛋白酶产生菌 HE-NE激光 诱变选育
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Salinivibrio sp.YH4胞外丝氨酸蛋白酶EYHS耐盐性及生物信息学分析 被引量:1
15
作者 武翠玲 宋英达 +2 位作者 高慧芳 张廉芸 任晨霞 《盐湖研究》 CAS CSCD 2021年第1期105-110,共6页
为探讨菌株Salinivibrio sp.YH4分泌的丝氨酸蛋白酶EYHS的耐盐性及结构特征,采用明胶底物酶谱法分析EYHS的耐盐性,并应用生物信息学手段对EYHS及6种耐盐的S8家族丝氨酸蛋白酶结构特征进行分析。结果表明EYHS在4 mol/L的NaCl溶液中仍具... 为探讨菌株Salinivibrio sp.YH4分泌的丝氨酸蛋白酶EYHS的耐盐性及结构特征,采用明胶底物酶谱法分析EYHS的耐盐性,并应用生物信息学手段对EYHS及6种耐盐的S8家族丝氨酸蛋白酶结构特征进行分析。结果表明EYHS在4 mol/L的NaCl溶液中仍具有活性,属于耐盐蛋白酶。EYHS及6种S8家族丝氨酸蛋白酶分子表面的loop区等无规则卷曲所占比例较高,α-螺旋与β-片层则主要位于酶分子内部。EYHS分子表面酸性氨基酸含量较高,且具有弱疏水内核。多序列比对发现蛋白酶的催化三联体两侧存在高度保守的基序和保守的极性氨基酸及芳香族氨基酸,并存在多个保守的Gly与Ala。同源模建和表面电荷分布显示,α螺旋和β片层围成了蛋白酶的催化腔,EYHS活性中心包含由Asp32、His65与Ser215组成的催化三联体,且催化位点区域表面静电势为负。上述结构特征可能有助于耐盐丝氨酸蛋白酶EYHS在高盐环境下维持其稳定性和适度柔性,并有助于其催化功能的发挥,为深入研究耐盐丝氨酸蛋白酶的高盐环境适应性提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 Salinivibrio sp.YH4 丝氨酸蛋白酶 耐盐蛋白酶 生物信息学
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既往有偿献血HIV-1感染者中合并感染的HCV对telaprevir和boceprevir天然耐药分析 被引量:1
16
作者 鲍毅 田地 +4 位作者 郑颖颖 席宏丽 刘丹 于敏 徐小元 《传染病信息》 2014年第3期160-163,共4页
目的分析既往有偿献血人群HIV-1感染者中合并感染的HCV对telaprevir和boceprevir的天然耐药,为HCV的耐药监测及临床抗病毒治疗提供基础数据。方法收集既往有偿献血人群HIV阳性患者的血浆样本,检测其HCV抗体,应用巢式PCR扩增HCV NS3/4A区... 目的分析既往有偿献血人群HIV-1感染者中合并感染的HCV对telaprevir和boceprevir的天然耐药,为HCV的耐药监测及临床抗病毒治疗提供基础数据。方法收集既往有偿献血人群HIV阳性患者的血浆样本,检测其HCV抗体,应用巢式PCR扩增HCV NS3/4A区,对测序结果进行耐药分析,计算耐药率,评价耐药毒株的流行趋势。结果从150份符合要求的样本里共获得70份(46.67%)HCV NS3/4A基因序列。检测出耐药相关突变4例(5.71%),其中对boceprevir耐药2例(2.86%),耐药位点为R117H和A156V;对telaprevir耐药2例(2.86%),耐药位点为R117H和A156V;对telaprevir可能耐药2例(2.86%),耐药位点为T54S。尚未发现V36A/M/L/C、Q41H/R、F43C/S、T54A、V55A、Q80R、R109K、S138C、R155G/I/K/M/T/Q/S、A156S/T、D168A/E/G/H、V170A/T/I、N174G/S、L175M等已报道的耐药位点。其他突变中,氨基酸替换率超过90%的变异位点有I35V、A40T、R62K、I64L、V71I、S66G、S91A和T42S;在系统进化树中,耐药序列呈点状散在分布,未发现聚集性。结论既往有偿献血HIV-1感染者中合并感染的HCV对telaprevir和boceprevir存在天然耐药,耐药相关突变率分别为5.71%和2.86%。其他氨基酸位点出现突变率较高,但是未发现与耐药相关。各耐药菌株之间未发现传播关联性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 蛋白酶抑制药 药物耐受性 供血者
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耐有机溶剂蛋白酶产生菌Bacillus cereus WQ9-2发酵条件及酶学性质
17
作者 许家兴 李振东 +1 位作者 承龙飞 何冰芳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2012年第6期7-11,共5页
以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgS... 以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgSO40.3 g/L,CaCl20.5 g/L,NaCl 1.0 g/L;pH 7.5。实验中发现采用低温发酵能大大缩短菌体产酶周期;通过优化发酵时间由最初84 h缩短到48 h,最高比酶活为3 921 U/mL。金属离子螯合剂1,10-菲罗啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶有较强的抑制作用,表明该酶可能为金属蛋白酶;Ca2+对该酶的活力及热稳定性有显著提高作用。 展开更多
关键词 BACILLUS CEREUS 耐有机溶剂蛋白酶 优化 酶学性质
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烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌YP1产胞外蛋白酶的影响
18
作者 李霜 唐啸宇 +1 位作者 潘瑶 何冰芳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期368-371,共4页
考察了添加5%(V/V)浓度的正庚烷、正辛烷、正癸烷、十二烷、十四烷、十六烷等烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YP1的生长及产胞外蛋白酶的影响。结果表明5%(V/V)浓度的各种烷烃溶剂对YP1蛋白酶的稳... 考察了添加5%(V/V)浓度的正庚烷、正辛烷、正癸烷、十二烷、十四烷、十六烷等烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YP1的生长及产胞外蛋白酶的影响。结果表明5%(V/V)浓度的各种烷烃溶剂对YP1蛋白酶的稳定性及菌体生物量均无显著影响,正庚烷、正辛烷、正癸烷等溶剂显著抑制YP1产蛋白酶,而十二烷、十四烷、十六烷能提高YP1产蛋白酶1倍以上。发酵液中十四烷的浓度(1%-8%,V/V)与蛋白酶的活力呈正相关性,添加十四烷后发酵过程中蛋白酶活力的显著增加出现在菌体生长的对数后期。培养过程中添加十四烷能导致YP1菌体形态显著变小。首次报道了烷烃溶剂对极端微生物产蛋白酶的影响。 展开更多
关键词 极端微生物 有机溶剂耐受菌 烷烃 蛋白酶
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鱼露中高产蛋白酶耐盐菌株的筛选、鉴定及产酶条件优化 被引量:5
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作者 李文静 李春生 +3 位作者 李来好 王悦齐 陈胜军 杨少玲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期134-142,共9页
利用微生物发酵剂和蛋白酶制剂对鱼露进行快速发酵具有广阔的应用前景。从鱼露发酵液中分离出的菌株B-2具有耐盐且高产蛋白酶的特性,经VITEK 2 COMPACT生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,确定该菌为Bacillus subtilis。利用扫描电子... 利用微生物发酵剂和蛋白酶制剂对鱼露进行快速发酵具有广阔的应用前景。从鱼露发酵液中分离出的菌株B-2具有耐盐且高产蛋白酶的特性,经VITEK 2 COMPACT生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,确定该菌为Bacillus subtilis。利用扫描电子显微镜观察菌株在不同盐环境下的结构,并分析其生长情况,发现该菌株具有很强的耐盐性,在200~300 g/L的盐环境下仍能够保持生长和代谢,并维持较为完整的细胞形态。通过2次响应面试验,确定该菌最适培养基成分为0.57 g/L果糖、13.88 g/L豆粕、5.13 g/L NaCl,最适发酵条件为pH 9.4、温度28.4℃、接种量4.9%。菌株B-2的产酶条件经过优化后,蛋白酶活力为200.63 U/mL,比优化前提高了6.15倍。研究结果表明,菌株B-2具有高产蛋白酶活性和耐盐的特点,有望为鱼露的快速发酵提供一种高效的发酵剂和酶制剂。 展开更多
关键词 鱼露 枯草芽胞杆菌 耐盐 产蛋白酶 响应面优化
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耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05的筛选、鉴定及酶学性质研究 被引量:3
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作者 胡晟源 刘姝 +5 位作者 来蒋丽 顾张慧 柴金龙 杭加豪 张春光 房耀维 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第21期103-107,113,共6页
目的:从燕尾港受污染海域筛选耐有机溶剂蛋白酶产生菌,确定该菌的分类地位,并对其所产溶剂稳定性蛋白酶的酶学性质进行研究。方法:通过在培养基中添加20%(V/V)甲苯作为筛选压力,筛选耐有机溶剂极端微生物,通过产蛋白酶筛选培养基筛选产... 目的:从燕尾港受污染海域筛选耐有机溶剂蛋白酶产生菌,确定该菌的分类地位,并对其所产溶剂稳定性蛋白酶的酶学性质进行研究。方法:通过在培养基中添加20%(V/V)甲苯作为筛选压力,筛选耐有机溶剂极端微生物,通过产蛋白酶筛选培养基筛选产蛋白酶的菌株,并利用摇瓶发酵进行复筛,最后对产酶菌株进行鉴定并对粗酶的性质进行测定。结果:筛选获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05,结合16S rDNA序列分析、形态学观察和生理生化性质将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该酶的最适反应温度和pH分别为50℃和10.0,Cu^(2+)、Mn^(2+)对酶有激活作用,Mg^(2+)、Fe^(3+)和Ba^(2+)对酶具有抑制作用。在50%乙醇中,25℃、140 r/min振荡72 h后仍能保持50%以上酶活力。结论:分离获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌解淀粉芽孢杆菌菌株MSP05,对有机溶剂具有较好的耐受性,具有潜在的工业应用价值。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 解淀粉芽孢杆菌 酶学性质
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