原发性结直肠癌组织中乳清酸磷酸核糖转移酶的表达及临床意义

目的:探讨人原发性结直肠癌组 织中乳清酸磷酸核糖转移酶(orotatephos phoribosyltransferase,OPRT)的表达及其临 床意义。方法:应用RT PCR方法测定61 例原发性结直肠癌手术切除标本及正常对 照组织OPRT的基因表达水平,分析OPRT 与原发性结直肠癌的临床关系。结果:结 直肠癌肿瘤组织中OPRT mRNA表达水平 是非肿瘤组织中的4.38倍,P=0.0001, OPRT mRNA的表达量在黏液腺癌中最低, 在低分化腺癌中最高。OPRT mRNA在肿 瘤组织和非肿瘤组织中的基因表达水平存 在正相关关系,rs=0.55,P=0.0001。肿 瘤组织中的OPRT mRNA/非肿瘤组织组织 中的OPRT mRNA的比值(T0/N0)与淋巴 结转移(rs=0.36,P=0.005)、脉管转移(rs =0.26,P=0.041)和组织学分化(rs= 0.33,P=0.009)具有相关性。结论:与非 肿瘤组织相比,肿瘤组织中OPRT mRNA有 较高表达水平;OPRT在肿瘤组织和非肿瘤 组织中的基因表达水平存在正相关关系。 OPRT mRNA的表达量在黏液腺癌中最低, 在低分化腺癌中最高,淋巴结转移、脉管转 移和组织学分化与T0/N0降低有关。

尤氏泰勒虫OPRT基因的优化表达

为克隆和表达尤氏泰勒虫OPRT基因的功能区片段,并对重组OPRT蛋白的反应原性进行分析,以反转录得到的尤氏泰勒虫cDNA链为模板,PCR扩增出OPRT基因片段,然后将其克隆至pET-30a(+)载体;把构建成功的重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21进行优化表达,对诱导表达的蛋白纯化后用Western-blot分析它与吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫阳性血清是否发生交叉反应。结果显示,OPRT基因获得了不可溶性表达,最佳表达时间为6h,最佳表达温度为28℃,且表达的重组OPRT蛋白分别与上述2种泰勒虫阳性血清发生交叉反应。结果表明,OPRT同源基因也存在于吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫之中。