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The Experimental Study on the Effect Calcitonin Gene related Peptide on Bone Resorption Mediated by Interleukin-1 被引量:6
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作者 廉凯 杜靖远 +1 位作者 饶振玉 罗怀灿 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2001年第4期304-307,共4页
To investigate the effect of calcitonin gene related peptide (CGRP) on bone resorption mediated by interleukin 1β(IL 1β) in vitro , the osteoclasts isolated from the long bones of newborn SD rats were co cul... To investigate the effect of calcitonin gene related peptide (CGRP) on bone resorption mediated by interleukin 1β(IL 1β) in vitro , the osteoclasts isolated from the long bones of newborn SD rats were co cultured with osteoblasts on ivory slices placed in 24 well plates . 24 h later, conditioned media containing CGRP and/or IL 1β were added to the wells respectively, and continued culturing for 48 h. After the cells were stripped off by ultrasonication, the ivory slices were stained in toludine blue. The number and the total area of resorption lacunae on each slice were measured by computer imaging analysis system. Our results showed that IL 1β significantly stimulated bone resorption, but CGRP inhibited the effect mediated by IL 1β in a dose dependent manner. It is suggested that CGRP may inhibit osteoclastic bone resorption through two ways: One is that CGRP functions directly on osteoclasts to block their activation; the other is that CGRP regulates the release of cytokines by osteoblasts and indirectly affects the function of osteoclasts. 展开更多
关键词 calcitonin gene related peptide osteoblasts osteoclastS interleukin 1
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人骨保护素成熟肽表达载体的构建、表达及重组蛋白免疫学鉴定 被引量:3
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作者 王宝利 戴芳 +2 位作者 郭刚 邱明才 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2003年第11期691-693,F002,共4页
目的 :构建人骨保护素 (OPG)成熟肽cDNA重组表达载体 ,实现其在毕赤酵母中的高效表达。方法 :由人成骨细胞提取总RNA ,经RT -PCR扩增得到人OPG成熟肽cDNA ,克隆入分泌型表达载体 pPIC9K ,转化酵母细胞 ,G418筛选多拷贝整合的重组子进行... 目的 :构建人骨保护素 (OPG)成熟肽cDNA重组表达载体 ,实现其在毕赤酵母中的高效表达。方法 :由人成骨细胞提取总RNA ,经RT -PCR扩增得到人OPG成熟肽cDNA ,克隆入分泌型表达载体 pPIC9K ,转化酵母细胞 ,G418筛选多拷贝整合的重组子进行甲醇诱导表达 ,产物行Westernblotting 鉴定。结果 :成功构建了人OPG成熟肽表达载体 ,该载体能在酵母细胞中获得分泌表达 ,诱导96h的表达量占上清总蛋白的30 %。重组蛋白相对分子质量约55ku ,可被OPG抗体识别。结论 :重组人OPG成熟肽在酵母表达系统获得较高水平表达 ,为进一步研究开发基因工程药物准备了条件。 展开更多
关键词 人骨保护素 成熟肽 载体 重组蛋白 免疫学鉴定 基因表达
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高纯度破骨细胞分离培养与功能表达 被引量:3
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作者 高建军 顾淑珠 +2 位作者 金慰芳 邓华云 王洪复 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2001年第1期15-17,共3页
目的 获得足量高纯度活性破骨细胞进行破骨细胞生化学和分子生物学研究。方法利用破骨细胞与Ⅰ型胶原基质的高亲合力 ,先用pronase和EDTA作用除去未贴附的造血细胞及结合较疏松的间质细胞 ,继而用 0 0 1%胶原酶作用进一步除去残留的... 目的 获得足量高纯度活性破骨细胞进行破骨细胞生化学和分子生物学研究。方法利用破骨细胞与Ⅰ型胶原基质的高亲合力 ,先用pronase和EDTA作用除去未贴附的造血细胞及结合较疏松的间质细胞 ,继而用 0 0 1%胶原酶作用进一步除去残留的间质细胞 ,最后用 0 .1%胶原酶作用得到高纯度破骨细胞悬液。分离细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色 ,荧光标记显示细胞骨架 ,RT PCR方法检测破骨细胞标志酶基因。结果 胶原基质培养结合酶消化可大大提高破骨细胞纯度 ,破骨细胞对降钙素反应 ,并表达MT1 MMP ,MMP 9,组织蛋白酶K和TRAP基因mRNA ,可产生吸收陷窝。结论 利用兔破骨细胞与Ⅰ型胶原的亲合力 ,可获得多量高纯度破骨细胞 ;并表达特征性基因。 展开更多
关键词 破骨细胞 纯化 基因表达 细胞培养
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张应力对成骨分化骨髓间充质干细胞ODF mRNA表达的影响 被引量:8
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作者 江凌勇 赵志河 +1 位作者 王军 樊瑜波 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2010年第6期428-432,438,共6页
目的观察大鼠骨髓间充质干细胞骨向诱导分化来源的成骨细胞在张应力刺激下破骨细胞分化因子(osteo-clast differentiation factor,ODF)基因表达的变化,探讨正畸牙移动骨改建过程中成骨细胞调控破骨细胞分化成熟的机制。方法分离培养大... 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞骨向诱导分化来源的成骨细胞在张应力刺激下破骨细胞分化因子(osteo-clast differentiation factor,ODF)基因表达的变化,探讨正畸牙移动骨改建过程中成骨细胞调控破骨细胞分化成熟的机制。方法分离培养大鼠股骨骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞,采用膜式动态张应力加载体系按张应力大小及作用方式不同分为静态1、3、5 kPa组,动态3、5 kPa组(频率0.017 Hz)及对照不加力组6个实验组和按不同作用时间分为0、3、6、9、12、24和48 h 7个时间段进行体外细胞加力,RT-PCR技术检测不同强度、不同性质、不同作用时间张应力对成骨细胞ODF mRNA表达的影响。结果张应力刺激抑制成骨细胞ODF的表达,静态张应力的抑制效应弱;抑制作用与刺激强度无明显关系;ODF mRNA在动态张应力作用6 h后表达逐渐下降,9 h后显著下降,之后维持在一较低水平,48 h最低,具有时效性。结论机械张应力刺激通过抑制成骨细胞ODF mRNA的表达限制破骨细胞的分化成熟。 展开更多
关键词 张应力 骨髓间质干细胞 成骨细胞 破骨细胞分化因子 基因表达
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人骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及表达产物的生物活性分析(英文) 被引量:2
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作者 刘继中 陈苏民 +3 位作者 李毅 胡蕴玉 纪宗玲 杨彤涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期566-571,共6页
为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人... 为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白 .SDS PAGE及Western印迹分析表明 ,有分子量约 6 6kD的目的蛋白表达 .纯化后的表达产物加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中 ,当浓度为 10 0ng ml时 ,象牙片上骨吸收陷窝的数量及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量均减少 (P <0 0 5 ) .而同时加入人OPG的多克隆抗体后 ,这一抑制作用可被拮抗 ,在浓度为 5 0ng ml时则无此作用 .人OPG蛋白在酵母系统的成功表达 ,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据 . 展开更多
关键词 人骨保护素 毕赤酵母 分泌表达 表达产物 生物活性
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TNF-α-shRNA对结核菌素诱导破骨细胞形成的影响 被引量:2
6
作者 梁思敏 马荣 +5 位作者 马赫 于洋 殷飞 吴鹏 范凤龙 戈朝晖 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期741-747,共7页
目的 :构建靶向肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)表达载体,观察其对结核菌素(purified protein derivative,PPD)诱导破骨细胞形成的影响。方法 :双酶切法构建TNF-α-sh RNA,... 目的 :构建靶向肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)表达载体,观察其对结核菌素(purified protein derivative,PPD)诱导破骨细胞形成的影响。方法 :双酶切法构建TNF-α-sh RNA,经脂质体转染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞),通过荧光显微镜观察TNF-α-sh RNA的转染情况;采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)观察转染前及转染后第1、3、5、7天TNF-α基因的表达情况;以RAW264.7细胞为空白组、RAW264.7细胞+1IU·ml-1PPD为对照组、RAW264.7细胞+TNF-α-sh RNA+1IU·ml-1PPD为转染观察组、RAW264.7细胞+空载质粒+1IU·ml-1PPD为阴性转染组,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)检测各组第3天TNF-α基因和蛋白的相对表达量;采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)计数各组第7天破骨细胞形成的数量。结果 :TNF-α-sh RNA经脂质体成功转染RAW264.7细胞,转染效率达70%~80%。RT-PCR显示转染后第3天TNF-α基因的表达最少,第5天次之,第1天、第7天和转染前比较差异不大。转染后第3天转染观察组TNF-α基因的相对表达量为0.46±0.03,同时间点空白组为1.00±0.00,对照组为1.43±0.09,阴性转染组为1.38±0.06。转染后第3天转染观察组TNF-α蛋白的相对表达量为55.34±0.82,同时间点空白组为59.13±1.43,对照组为82.72±1.84,阴性转染组为84.62±0.97。转染后第7天转染观察组破骨细胞形成的数量为19.33±1.53个,同时间点空白组为5.67±1.53个,对照组为56.67±3.79个,阴性转染组为59.67±3.51个。转染观察组的TNF-α基因和蛋白的相对表达量及破骨细胞数量与空白组、对照组、阴性转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05);空白组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与阴性转染组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TNF-α-sh RNA可以特异性地沉默RAW264.7细胞内TNF-α基因的表达,使TNF-α的产生减少,抑制PPD诱导的破骨细胞形成。 展开更多
关键词 基因敲除技术 肿瘤坏死因子 结核菌素 破骨细胞
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核结合因子的表达及其对骨细胞的作用研究 被引量:3
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作者 王立童 周淳 陈元川 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第12期914-917,共4页
核结合因子α1(Cbfα1)是编码成骨细胞的特异性转录因子,不仅促进成骨细胞的分化及骨形成,而且参与了软骨细胞的发育与分化过程。此外,Cbfα1还调节骨保护素的表达,从而抑制破骨细胞的形成和骨吸收,由于Cbfα1既可促进骨形成,又可抑制... 核结合因子α1(Cbfα1)是编码成骨细胞的特异性转录因子,不仅促进成骨细胞的分化及骨形成,而且参与了软骨细胞的发育与分化过程。此外,Cbfα1还调节骨保护素的表达,从而抑制破骨细胞的形成和骨吸收,由于Cbfα1既可促进骨形成,又可抑制骨吸收,因此将骨形成和骨吸收两个不同的过程联系起来。此外多种激素和细胞因子可影响Cbαf1的活性和表达。研究Cbfα1基因表达的调节并发现增加其表达的因子,为治疗骨代谢性疾病提供了新的方向。 展开更多
关键词 Cbfal基因 成骨细胞 破骨细胞 软骨细胞 骨代谢
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特异性阻断诱导培养的大鼠破骨样细胞Atp6i基因的表达 被引量:2
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作者 童培建 肖鲁伟 +3 位作者 杜文喜 沈龙祥 季卫锋 潘杰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第3期169-174,共6页
目的筛选具有高效、高特异性地阻断体外诱导培养的大鼠破骨样细胞(osteoclast-like cells,OCL)Atp6i基因转录产物 mRNA翻译过程的siRNA序列。方法根据大鼠Atp6i基因序列设计2对siRNAs(Ⅰ、Ⅱ)序列,转染到各组体外培养第6天的OCL细胞内,... 目的筛选具有高效、高特异性地阻断体外诱导培养的大鼠破骨样细胞(osteoclast-like cells,OCL)Atp6i基因转录产物 mRNA翻译过程的siRNA序列。方法根据大鼠Atp6i基因序列设计2对siRNAs(Ⅰ、Ⅱ)序列,转染到各组体外培养第6天的OCL细胞内,转染组(Ⅰ或者ⅡsiRNA)T1组、阴性对照转染组(ⅢsiRNA)T2组、转染试剂转染组T3组以及空白对照组T4组;转染第24小时后,RT-PCR分析Atp6i mRNA的表达情况。结果Ⅰ号siRNA转染后,T1组中Atp6i基因RT-CR扩增产物密度值较其他组减少,差异明显(P<0.01),相对密度值较其他组也明显减少(P<0.01)。结论Ⅰ号siRNA片段特异性的抑制大鼠OCLAtp6i mRNA表达。 展开更多
关键词 Atp6i基因 骨髓 破骨样细胞 RNA干扰 RT-PCR
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降钙素基因相关肽抑制白细胞介素-1介导骨的吸收作用 被引量:5
9
作者 廉凯 杜靖远 +1 位作者 饶振玉 罗怀灿 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第9期776-779,共4页
目的 了解白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用 ,并评价降钙素基因相关肽 (CGRP)的拮抗效果 .方法 将新生大鼠破骨细胞和成骨细胞混合培养 ,接种于预置象牙片的培养板中 .2 4 h后培养液中分别加入 IL-1β和不... 目的 了解白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用 ,并评价降钙素基因相关肽 (CGRP)的拮抗效果 .方法 将新生大鼠破骨细胞和成骨细胞混合培养 ,接种于预置象牙片的培养板中 .2 4 h后培养液中分别加入 IL-1β和不同浓度的 CGRP.继续培养 4 8h,然后取出象牙片 ,超声处理后行甲苯胺蓝染色 ,光镜下观察骨吸收陷窝数目并计算其总面积 .结果  IL - 1β明显增加象牙片上吸收陷窝的数目 (37.2± 8.2 vs 2 2 .4± 5 .7) per slice (P <0 .0 1)和面积(μm2 ,976 1± 2 775 vs4 2 2 4± 1381,P<0 .0 1) ,而 CGRP则能够显著抑制 IL- 1β的刺激作用 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,且抑制作用呈剂量依赖性 (r1 =- 0 .5 6 ,P<0 .0 1;r2 =- 0 .4 9,P<0 .0 5 ) .结论  CGRP可直接作用于破骨细胞并抑制其活化 ,并调节成骨细胞相关因子的释放而间接影响破骨细胞功能 . 展开更多
关键词 降钙素基因相关肽 白细胞介素-1 吸收作用 成骨细胞 破骨细胞
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兔下颌骨牵张成骨组织中c-fos和OPG及OPGL的表达 被引量:4
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作者 葛巍立 谢志坚 何剑锋 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第5期496-500,共5页
目的:探讨在机械张力作用下骨细胞将生物力学信号转变为生物学效应的作用机理。方法:建立兔下颌骨牵张成骨模型,用免疫组化方法检测牵张中期(牵张第4天)、牵张末期(牵张第8天)与固定期2周、4周、6周的牵张区新生骨组织中c-fos、骨保护素... 目的:探讨在机械张力作用下骨细胞将生物力学信号转变为生物学效应的作用机理。方法:建立兔下颌骨牵张成骨模型,用免疫组化方法检测牵张中期(牵张第4天)、牵张末期(牵张第8天)与固定期2周、4周、6周的牵张区新生骨组织中c-fos、骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(OPGL)的分布和表达。结果:在牵张中期和末期c-fos的表达为强阳性,明显强于固定期2周、4周、6周的组织。牵张中、末期和固定期2周组织OPG的表达为强阳性,在固定期4周、6周组织中逐渐减弱。OPGL仅在固定期6周组织中有较弱表达,其余各时间点均无明显阳性表达。结论:在下颌骨牵张新骨形成改建过程中,c-fos与机械力刺激关系密切,OPG能促进新骨形成,而OPGL则与骨改建有关。 展开更多
关键词 下颌骨 基因 los 骨生成 牵张 免疫组织化学 骨细胞/代谢 破骨细胞 疾病模型 动物 细胞分化
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miR-181a调控PINK1/Parkin通路对骨质疏松大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响 被引量:6
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作者 祝震亚 童蕾 陆燕群 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期569-578,共10页
目的探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法健康雌性SD大鼠20只,随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10)。OP模型组大鼠制备OP模型,提取OP大鼠破骨细胞,... 目的探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法健康雌性SD大鼠20只,随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10)。OP模型组大鼠制备OP模型,提取OP大鼠破骨细胞,设置OP组(未转染)、si-miR-181a组(转染si-miR-181a载体质粒)、si-NC组(转染si-NC阴性对照质粒)、ad-miR-181a组(转染ad-miR-181a载体质粒)与ad-NC组(转染阴性ad-NC对照质粒),对照组大鼠破骨细胞正常培养,设为正常对照组。采用RT-PCR检测miR-181a的表达,MTT法及流式细胞术检测破骨细胞的存活及凋亡情况,透射电镜观察线粒体自噬情况,免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况,Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况。敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达,验证Parkin对miR-181a的逆转作用。双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系。结果与正常对照组相比,OP组破骨细胞中miR-181a(1.59±0.15 vs.1.02±0.11)、Parkin^(+)TOMM2^(+)(2.02±0.20 vs.0.13±0.10)、Parkin(1.83±0.18 vs.1.13±0.10)、PINK1(1.93±0.19 vs.1.03±0.10)表达水平,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.89±0.18 vs.1.15±0.10)及细胞存活率(157.06%±12.32%vs.100.09%±0.05%)升高(P<0.05)。与OP组相比,上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(222.96%±22.15%)升高,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(1.01±0.11)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.36±0.12)及细胞凋亡率(3.28%±0.35%)降低(P<0.05);下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(106.96%±10.15%)降低,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(2.97±0.29)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.47±0.24)及细胞凋亡率(19.71%±1.83%)升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,Parkin为miR-181a的靶基因。下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用(P<0.05)。结论上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达可靶向下调Parkin的表达抑制线粒体自噬激活,促进破骨细胞存活。 展开更多
关键词 骨质疏松症 miR-181a TEN诱导激酶1/帕金森相关基因 自噬 破骨细胞
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降钙素基因相关肽对兔成骨细胞OPG/RANKLmRNA表达的影响 被引量:14
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作者 徐琳 谭颖徽 何海涛 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期396-399,共4页
目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对成骨细胞核因子- κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)基因表达的影响,了解CGRP在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法:将体外培养的兔成骨细胞用不同浓度的CGRP处理24h,通... 目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对成骨细胞核因子- κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)基因表达的影响,了解CGRP在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法:将体外培养的兔成骨细胞用不同浓度的CGRP处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)来观察成骨细胞两种目的基因(OPG, RANKL)的mRNA表达强度变化。结果:CGRP呈剂量依赖性的刺激成骨细胞OPGmRNA表达,同时亦下调RANKLmRNA表达。结论:CGRP通过调节成骨细胞OPG/RANKL的比值可间接地调节破骨细胞活性,从而影响骨代谢。 展开更多
关键词 降钙素基因相关肽 成骨细胞 破骨细胞 骨保护素 破骨细胞分化因子
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人成骨样细胞和前破骨样细胞ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的研究 被引量:1
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作者 王越 朱雅琴 +2 位作者 吴健 孙维甲 李灵芝 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第4期260-264,共5页
目的分析比较两种人成骨样细胞系(U2-OS、MG-63)和两种人前破骨样细胞系(U937、HL-60)ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的差异,为今后研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系提供适宜的细胞模... 目的分析比较两种人成骨样细胞系(U2-OS、MG-63)和两种人前破骨样细胞系(U937、HL-60)ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的差异,为今后研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系提供适宜的细胞模型。方法RT-PCR和免疫印迹法检测ERα、ERβ的表达,ELISA法测定IL-6的分泌,OPG、RANKL、RANK及IL-6受体的表达采用免疫印迹法进行检测,TRAP、MMP-9则采用RT-PCR技术进行分析。结果(1)转录水平及蛋白水平证实四种细胞均表达ERα和ERβ;(2)四种细胞不同程度地表达OPG和RANKL,而RANK则仅见于U937细胞表达;(3)四种细胞均表达IL-6受体(IL-6Rα、gp130),除U2-OS细胞外其余三种细胞均组成型分泌IL-6;(4)破骨细胞标志基因TRAP在两种人前破骨样细胞U937、HL-60中均表达,且表达水平相近;而MMP-9仅在U937细胞中弱表达;两种人成骨样细胞U2-OS、MG-63未见有这两种基因表达。结论筛选出用于研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系的细胞模型,同时也为今后深入阐明骨靶向和其他新型抗骨质疏松雌激素的分子机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 成骨样细胞 前破骨样细胞 雌激素受体 OPG/RANKL/RANK系统 IL-6及其受体 骨细胞标志基因
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补肾祛湿活血中药对模拟体外骨重塑作用的细胞特征的影响 被引量:1
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作者 宁显明 艾志鹏 +3 位作者 张继虹 王海彬 刘红 朱洪民 《广州中医药大学学报》 CAS 北大核心 2014年第6期963-968,973,1027,1028,共9页
【目的】探讨补肾活血中药(珍骨丸)与祛湿活血中药(骨刺风湿丸)对体外骨重塑作用的影响。【方法】将MC3T3-E1细胞、RAW264.7细胞分别诱导为成骨细胞(osteoblasts,OB)与破骨细胞(osteoclasts,OC),并将两者共培养。通过免疫细胞化学染色... 【目的】探讨补肾活血中药(珍骨丸)与祛湿活血中药(骨刺风湿丸)对体外骨重塑作用的影响。【方法】将MC3T3-E1细胞、RAW264.7细胞分别诱导为成骨细胞(osteoblasts,OB)与破骨细胞(osteoclasts,OC),并将两者共培养。通过免疫细胞化学染色鉴定该共培养体系构建成功与否;以灌胃的方法分别将双醋瑞因、珍骨丸及骨刺风湿丸制备成含药血清;运用含药血清处理共培养细胞并进行Western blotting和Real-time PCR分析。【结果】珍骨丸与骨刺风湿丸处理共培养细胞后骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达显著上升(P<0.05),糖蛋白130(glycoprotein 130,gp 130)表达显著下降(P<0.05)。【结论】珍骨丸、骨刺风湿丸通过抑制gp130来抑制OC的骨吸收,并通过RANKL-RANK-OPG系统促进骨形成,增加骨密度达到治疗骨关节炎的作用。 展开更多
关键词 补肾祛湿活血 骨关节炎/中药疗法 成骨细胞/病理学 破骨细胞/病理学 细胞培养 基因表达调控 大鼠
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骨硬化蛋白单克隆抗体治疗骨质疏松 被引量:3
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作者 王紫薇 田京 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第33期6021-6026,共6页
背景:骨硬化蛋白可负向调节骨代谢,其单克隆抗体可拮抗负向调节作用,在促进骨形成的同时抑制骨吸收。目的:旨在探讨骨硬化蛋白单克隆抗体在治疗骨质疏松中的作用机制及最新进展。方法:由第一作者应用计算机检索 PubMed、中国期刊全文数... 背景:骨硬化蛋白可负向调节骨代谢,其单克隆抗体可拮抗负向调节作用,在促进骨形成的同时抑制骨吸收。目的:旨在探讨骨硬化蛋白单克隆抗体在治疗骨质疏松中的作用机制及最新进展。方法:由第一作者应用计算机检索 PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库和万方数据库(2005年 5 月至 2013 年 5 月)相关文献。在标题、摘要、关键词中以"osteoporosis,antibody,sclerostin,Wnt,SOST"或"骨质疏松,单克隆抗体,骨硬化蛋白,Wnt 通路"为检索词进行检索。选择文章内容与骨硬化蛋白单克隆抗体有关者,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章。结果与结论:初检得到 170 篇文献,根据纳入标准选择关于骨硬化蛋白单克隆抗体的 54 篇文献进行综述。骨硬化蛋白通过与 Wnt 经典信号通路共受体低密度脂蛋白受体相关蛋白 5/6 结合以阻断 Wnt 通路,从而抑制成骨细胞分化及矿化。其单克隆抗体通过与骨硬化蛋白特异性结合而间接促进骨形成、抑制骨吸收,在骨质疏松的治疗中有重大意义。同时,与其他治疗方法相比,骨硬化蛋白作用靶点的组织特异性及骨硬化蛋白单克隆抗体的结合特异性为其增加了应用优势。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建综述 骨组织构建 骨硬化蛋白 骨硬化蛋白单克隆抗体 WNT 通路 SOST 基因 低密度脂蛋白受体相关蛋白 5 6 成骨细胞 破骨细胞 骨质疏松
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去势大鼠骨髓体外培养破骨细胞观察及OPG mRNA表达的变化
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作者 白孟海 葛宝丰 +2 位作者 白洁 陈克明 赵红斌 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2009年第4期272-274,共3页
目的观察去势大鼠骨髓源性破骨细胞形成的动态变化和骨髓细胞护骨素(OPG)基因的变化。方法健康Wistar雌性大白鼠60只,分为实验组(去卵巢组)和对照组(假手术组),每组30只,分别于术后2、4、6、8和12周取去卵巢组和对照组每只大鼠股... 目的观察去势大鼠骨髓源性破骨细胞形成的动态变化和骨髓细胞护骨素(OPG)基因的变化。方法健康Wistar雌性大白鼠60只,分为实验组(去卵巢组)和对照组(假手术组),每组30只,分别于术后2、4、6、8和12周取去卵巢组和对照组每只大鼠股骨骨髓细胞进行细胞培养,左侧股骨培养细胞作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数。右侧股骨培养细胞提取总RNA,通过RT-RCR来观察去势大鼠骨髓细胞OPG mRNA表达强度变化。结果术后2、4周去势组破骨细胞形成数多于同期对照组,6周去势组破骨细胞形成达到高峰,显著多于同期对照组P〈0.01。8周去势组破骨细胞数较6周有所下降,但仍明显高于对照组。骨髓培养细胞OPG mRNA表达,术后2、4周OPG mRNA表达较同期对照组无明显差别,6周去势组OPG mRNA表达明显低于对照组,8周去势组OPG mRNA表达与同期对照组比较无明显差异。结论大鼠去势后可引起破骨细胞形成数量增多和OPG mRNA表达降低,且均在术后6周表现明显。 展开更多
关键词 去卵巢大鼠 破骨细胞 护骨素 基因
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人破骨细胞抑制因子基因的克隆和表达
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作者 韩苇 张英起 +1 位作者 颜真 石继红 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第22期2036-2039,共4页
目的 克隆、表达和鉴定人破骨细胞抑制因子(OPG) .方法 从培养的人胚肺成纤维细胞 (WI- 38)中提取总 RNA,经 RT- PCR获得人破骨细胞抑制因子基因 .将该基因克隆到 p GEM3zf-载体中 ,测序鉴定 .继而将 OPG基因插入 TNFHis融合表达载体... 目的 克隆、表达和鉴定人破骨细胞抑制因子(OPG) .方法 从培养的人胚肺成纤维细胞 (WI- 38)中提取总 RNA,经 RT- PCR获得人破骨细胞抑制因子基因 .将该基因克隆到 p GEM3zf-载体中 ,测序鉴定 .继而将 OPG基因插入 TNFHis融合表达载体中 ,4 2℃诱导表达 4~ 5 h,做 SDS-PAGE分析 .以免疫印迹法鉴定 TNFHis OPG融合蛋白的表达 .结果  DNA测序证明 ,获得了 OPG基因 ,其序列与国外文献报道不完全一致 .SDS- PAGE分析表明 ,TNFHis OPG融合蛋白获得表达 ,其 Mr为 7.1× 10 4 ku,表达量约占菌体总蛋白的 10 % .免疫印迹法鉴定显示 ,该融合蛋白可与抗 TNF-α单抗产生阳性反应 .结论  OPG基因的克隆和表达均获得了成功 . 展开更多
关键词 破骨细胞 抑制因子免疫 逆转录聚合酶链反应 基因表达 克隆
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人DC-STAMP真核表达载体的构建及鉴定
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作者 曾志勇 陈君敏 《福建医科大学学报》 2012年第1期31-35,共5页
目的构建和鉴定人DC-STAMP基因的真核表达载体,并分析在293T细胞中的表达情况。方法通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人破骨细胞体外扩增DC-STAMP的cDNA片段,连接入真核表达载体pEGFP-N1-FLAG后转入293T细胞中,Western blot进... 目的构建和鉴定人DC-STAMP基因的真核表达载体,并分析在293T细胞中的表达情况。方法通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人破骨细胞体外扩增DC-STAMP的cDNA片段,连接入真核表达载体pEGFP-N1-FLAG后转入293T细胞中,Western blot进行表达鉴定。结果成功扩增出人DC-STAMP全长,构建了重组质粒pEGFP-DC-STAMP-FLAG,并在其转染的293T细胞检测到融合蛋白的表达。结论成功构建了DC-STAMP融合基因表达载体pEGFP-DC-STAMP-FLAG。 展开更多
关键词 基因 基因扩增 破骨细胞 真核细胞 遗传载体 载体蛋白质类 重组 遗传 逆转录-聚合酶链反应
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Transwell小室内建立小鼠成骨-破骨细胞共培养体系 被引量:5
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作者 莫国业 张顺聪 +7 位作者 李永贤 郭惠智 郭丹青 李大星 唐永超 莫凌 罗培杰 马延怀 《中国骨伤》 CAS 2018年第3期241-247,共7页
目的 :Transwell小室内建立体外小鼠成骨-破骨细胞共培养体系,并检测体系对成骨及破骨细胞活性的影响。方法:体外培育小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,RANKL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞后,于Transw... 目的 :Transwell小室内建立体外小鼠成骨-破骨细胞共培养体系,并检测体系对成骨及破骨细胞活性的影响。方法:体外培育小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,RANKL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞后,于Transwell小室内建立成骨-破骨细胞共培养体系。通过CCK-8实验、茜素红染色、TRAP染色检测细胞的成骨、破骨活性。采用PCR、Western Blot方法检测成骨细胞MC3T3-E1中OPG、ALP、RANKL、TGF-b1的基因表达以及RANKL的蛋白表达,检测破骨细胞RANK、NF-κB的基因表达和蛋白表达。结果 :小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系;共培养体系影响小鼠成骨细胞与破骨细胞的分化活性,镜下可见成骨细胞分化增多,破骨细胞分化稍减少。共培养体系中成骨细胞基因OPG(0.65±0.08)、ALP(0.16±0.01)较单独培养OPG(1.00±0.08)、ALP(1.01±0.16)表达下降,而TGF-b1(4.42±0.21)、RANKL(4.12±1.04)较单独培养组TGF-b1(1.00±0.10)、RANKL(1.00±0.09)表达上升;破骨细胞相关RANK(0.63±0.06)、NF-κB(0.64±0.08)基因表达较单独培养组的RANK(1.00±0.08)、NF-κB(1.00±0.09)下降,差异均有统计学意义。同时共培养组的OPG(0.43±0.05)、NF-κB(0.59±0.05)的蛋白表达较单独培养组的OPG(0.84±0.06)、NF-κb(1.13±0.03)减少;共培养组RANKL(0.54±0.03)的蛋白表达则较单独培养组的RANKL(0.31±0.03)增加,差异有统计学意义,均与基因表达变化趋势一致。结论:小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系,共培养体系中成骨细胞活性高于破骨细胞活性。 展开更多
关键词 成骨细胞 破骨细胞 基因表达
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柚皮苷对破骨细胞分化和极化影响的初步探究 被引量:9
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作者 刘朝晖 马剑雄 +4 位作者 田爱现 孙晓雷 张杨 郭悦 马信龙 《天津医药》 CAS 北大核心 2020年第12期1141-1145,共5页
目的探究柚皮苷对破骨细胞分化和极化功能的影响。方法体外培养RAW264.7细胞,设置对照组(培养基不含柚皮苷)和实验组(培养基中柚皮苷剂量分别为2、20、200μg/L)连续培养7 d,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对比组间诱导分化结果,通... 目的探究柚皮苷对破骨细胞分化和极化功能的影响。方法体外培养RAW264.7细胞,设置对照组(培养基不含柚皮苷)和实验组(培养基中柚皮苷剂量分别为2、20、200μg/L)连续培养7 d,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对比组间诱导分化结果,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)对比组间组织蛋白酶K(CK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、整合素β3(integrinβ3)和非受体酪氨酸激酶(c-src)mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法对比组间CK、MMP-9、integrinβ3、磷酸化产物p-src蛋白表达水平。结果与对照组相比,各实验组TRAP染色阳性细胞数显著降低(P<0.05);与对照组相比,20μg/L与200μg/L组CK、MMP-9、integrinβ3及c-src m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,20μg/L与200μg/L组CK、MMP-9、integrinβ3及p-src蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论柚皮苷对破骨细胞的分化和极化有一定的抑制作用,其作用机制可能与下调integrinβ3、c-src及p-src表达有关。 展开更多
关键词 破骨细胞 骨质疏松 细胞分化 基因 SRC 整合素Β3 组织蛋白酶K 基质金属蛋白酶9 柚皮苷
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