重组人OCIF结构域D1～D6基因在毕赤酵母中的表达

利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称O CIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.

血清OCIF水平与2型糖尿病骨代谢关系初探

目的 探讨 2型糖尿病 (type 2diabetesmellitus ,T2DM )血清破骨细胞生成抑制因子 (osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF) 骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG)的变化及与骨密度 (bonemineraldensity ,BMD)、骨代谢生化指标的关系。方法 对 60例T2DM患者及 3 0例正常人用酶联免疫吸附法测定血清OCIF ,同时测定血清骨钙素 (osteocalcinBGP)、尿脱氧吡啶啉 (deoxypyridinoline ,DPD)、血糖、血钙、磷、碱性磷酸酶和桡骨BMD。结果 无论糖尿病组或对照组 ,血清OCIF水平均随年龄增加而增加 ,尤其在 60岁组增加明显 ;除 70岁组男性较女性增高外 ,其余各组无明显差异 ;糖尿病组血清OCIF较对照组增高 (P <0 0 1) ,伴骨质疏松组较骨量正常组低 (P <0 0 5 ) ;血清OCIF与年龄、BMD、BGP呈正相关 ,与尿DPD呈负相关。结论 血清OCIF不足或相对缺乏是糖尿病骨质疏松的重要因素之一 ;

机械力作用下人牙周膜细胞ODF及OCIF的表达及意义

目的 :观察周期性机械牵张力对人牙周膜细胞破骨细胞分化因子 (ODF)及破骨细胞生成抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响 ,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法 :通过体外细胞培养加载系统施于人牙周膜细胞周期性牵张力 ,利用RT PCR检测技术 ,观察人牙周膜细胞ODF及OCIFmRNA表达的相对强度。结果 :体外培养的人牙周膜细胞在正常情况下表达ODF及OCIF ,当间歇性牵张力作用 6、12、2 4h后 ,随着作用时间的延长 ,人牙周膜成纤维细胞ODFmRNA的表达有减弱趋势 ;而OCIFmRNA的表达有增强趋势。结论 :机械牵张力可以调节人牙周膜细胞ODF、OCIF的表达 ,从而可以调节骨吸收作用。

前列腺癌骨转移患者血清ODF、OCIF含量及临床价值评估

目的:研究前列腺癌骨转移患者血清ODF、OCIF含量及其临床价值。方法:采集前列腺癌骨转移骨转移和非骨转移患者的血清,检测ODF、OCIF含量;培养前列腺癌DU145细胞,用不同浓度的ODF、OCIF处理后,检测细胞迁移率以及LASS-2/TMSG-1的mRNA含量。结果:骨转移组血清中ODF、OCIF的含量以及ODF/OCIF的比值均高于非骨转移组(P<0.05);骨转移病灶数目越多,血清ODF含量越高、而OCIF含量越低;ODF处理能够剂量依赖性地增加前列腺癌细胞迁移率、减少LASS-2/TMSG-1的mRNA含量;OCIF处理能够剂量依赖性地降低前列腺癌细胞迁移率、增加LASS-2/TMSG-1的mRNA含量。结论:前列腺癌骨转移患者血清中ODF、OCIF含量均升高,且以ODF升高的效应更为明显;ODF具有促进前列腺癌细胞迁移的作用、而OCIF具有抑制作用。

血清Omentin-1、SF、ODF及OCIF在骨质疏松性椎体骨折中的表达及与骨密度的相关性分析

目的探讨血清网膜素-1(Omentin-1)、铁蛋白(SF)、破骨细胞分化因子(ODF)及破骨细胞生成抑制因子(OCIF)在骨质疏松性椎体骨折中的表达及与骨密度的相关性。方法选择2017年3月至2018年3月该院接诊的130例骨质疏松性椎体骨折患者作为观察组,并选择同期体检健康者100例作为对照组,分析血清Omentin-1、SF、ODF、OCIF、腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度的表达及其相关性。结果观察组患者血清Omentin-1水平低于对照组,SF、ODF、OCIF水平高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度水平低于对照组(P<0.05)。低骨量患者Omentin-1水平高于骨质疏松、严重骨质疏松患者,SF、ODF、OCIF水平低于骨质疏松、严重骨质疏松患者(P<0.05)。相关性分析结果中显示,血清Omentin-1与腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度均呈正相关(r=0.920、0.883,P<0.05),血清SF、ODF、OCIF与腰椎正位骨密度(r=-0.904、-0.768、-0.725,P<0.05)、股骨颈骨密度均呈负相关(r=-0.872、-0.740、-0.695,P<0.05)。结论在骨质疏松性椎体骨折患者中血清Omentin-1、SF、ODF、OCIF的表达和骨密度密切相关。

血清破骨细胞分化因子和抑制因子检测对肺癌骨转移的诊断价值

目的探讨血清破骨细胞分化因子(ODF)和破骨细胞生成抑制因子(OCIF)水平对肺癌骨转移的诊断价值。方法入选的研究对象为经细胞学和病理学确诊为原发性肺癌的患者(186例):分为骨转移组(104例)和无骨转移组(82例);该院健康体检者(30例)作为对照组;肺部其他疾病组(66例)。采用ELISA测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果骨转移组患者血清ODF和OCIF水平分别为(32.22±6.22)ng/L、(41.23±8.13)ng/L明显高于无骨转移组的(8.35±5.42)ng/L、(10.15±4.42)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);骨转移组ODF和OCIF检测的诊断灵敏度为90.38%和86.54%,特异度为86.59%和84.15%;不同肺癌病理类型的骨转移组患者血清ODF和OCIF水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清ODF和OCIF是诊断肺癌骨转移的重要参考指标,其水平的增高可用于诊断肺癌骨转移的发生。

人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的克隆人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区基因并在真核 细 胞中表达，为进一步研究OPG/OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR法得到人OPG/OCIF 的 编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OP G/OCIF在真核细胞中表达。结果获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCI F) 编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG/OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致 。成功构建OPG/OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳 定转染OPG/OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG/OCIF在真核细 胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区全长cD NA并证实在真核细胞中表达，为OPG/OCIF进一步的功能研究奠定了基础。

破骨细胞形成抑制因子研究进展

破骨细胞形成抑制因子 (OPG/OCIF)是最近发现的一种参与调节骨密度的糖蛋白 ,是一个肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的新成员 ,其氨基酸序列中具有TNF受体结构类似区 .成熟的OPG/OCIF具有 7个结构域 ,可分为三个功能区 ,即 :TNF受体结构区、致死结构区和肝素结合区 .OPG/OCIF基因定位在 8q2 3～ 2 4上 ,由5个外显子和 4个内含子组成 ,其表达受到与骨的形成和破坏有关因子的调控 :如TGF β1、 1,2 5 (OH) 2 VD3、TNF α等等 .OPG/OCIF抑制骨的破坏和吸收机制主要是抑制破骨细胞的存活 。

人破骨细胞生成抑制因子编码区基因的克隆及在成肌细胞中的表达

目的 :克隆人破骨细胞生成抑制因子 (OPG/OCIF)编码区基因并在真核细胞中表达。方法 :以人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA为模板 ,采用RT -PCR法得到OPG/OCIF的编码区cDNA ,构建真核表达载体 pIRES2 -OPG -EGFP ,在脂质体介导下转染小鼠成肌细胞系C2C12 ,经G418压力筛选建立稳定转染人OPG/OCIF的细胞系 ,共聚焦荧光显微镜及核酸杂交方法检测OPG/OCIF在细胞中的表达。结果 :获得的人OPG/OCIF编码区全长cDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致 ,核酸杂交证实稳定转染人OPG/OCIF编码区cDNA的小鼠成肌细胞系中有OPG/OCIFmRNA的表达。结论 :获得人破骨细胞生成抑制因子编码区全长cDNA并证实在真核细胞中稳定表达。

血清破骨细胞分化因子及生成抑制因子测定在前列腺癌骨转移诊断中的价值

摘要：目的探讨检测破骨细胞分化因子（osteoclastdifferentiationfactor，ODF）和破骨细胞生成抑制因子（osteo—clastogenesisinhibitoryfactor，OCIF）对前列腺癌骨转移诊断及病情评价的临床价值。方法分析2010年1月～2011年12月114例初诊为前列癌患者的资料。前列腺癌骨转移组和非骨转移组分别为61例和53例，采用ELISA法测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果骨转移组患者血清ODF和OCIF分别为（31．35±5．34）和（42．12±9．04）ng／L，明显高于非骨转移组的（8．42±1．73）和（9．84±2．15）ng／L，差异有显著性（P〈0．01）。ODF和OCIF诊断前列腺癌骨转移ROC曲线下面积分别为0．92和o．88，具有良好的诊断价值。诊断前列腺癌骨转移的灵敏度、特异度，ODF分别为91．42％和87．35％；OCIF分别为87．51％和85．37％。ODF随骨转移部位数量增加而明显升高，OCIF随骨转移部位数量增加而明显降低。新发骨转移组和骨转移组血清ODF和OCIF浓度均显著高于非转移组，差异有显著性（P〈o．01）；新发骨转移组血清ODF和OCIF浓度与骨转移组比较，两组间无显著性差异（P〉0．05）。结论前列腺癌患者发生骨转移时，血清ODF和OCIF含量明显增高，可作为判断前列腺癌患者骨转移及监测病情的参考指标，在临床上有广泛的应用前景。

张力作用下牙周组织破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子表达变化的研究

目的:运用原位杂交的方法,观察破骨细胞分化因子(ODF)、破骨细胞发生抑制因子(OCIF)在正畸大鼠牙周组织改建过程中张力侧的表达变化,探讨ODF、OCIF与正畸牙周组织改建的关系。方法:8周龄成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、牙齿移动1d组、3d组、5d组、7d组,共5组,每组6只。在大鼠上颌右侧第一磨牙与上颌切牙之间安置正畸矫治器装置,施力50g。在相应时间段处死实验动物,取材固定,进行原位杂交染色、图像分析。结果:在牙齿移动3d后,OCIF原位杂交染色在张力侧逐渐深染,OCIF mR-NA阳性细胞数量逐渐增多,OCIF阳性表达在5d时达到最高,并可见到有新骨形成;7d时OCIF阳性表达及分布情况与3d时相类似。张力侧牙周膜细胞、成骨细胞的ODF原位杂交染色阳性反应随天数的增加有逐渐增强趋势,并可观察到有ODFmRNA阳性破骨细胞出现,但表达变化并不明显。结论:ODF及OCIF参与了正畸牙周组织改建过程,OCIFmRNA在张力区随正畸牙齿移动表达升高具有时间依赖性。

人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达

目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。

人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达

目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。 结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。 结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。

磁共振成像联合血清RANKL、OPG水平诊断早期类风湿关节炎及骨关节损伤的价值

目的探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)联合血清破骨细胞抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)水平诊断早期类风湿(rheumatoid arthritis,RA)及骨关节损伤的临床价值。方法选择2014年1月-2015年12月我院收治住院的RA患者241例,其中早期RA 118例,非早期RA 123例,另选择100例正常人为对照组;抽取各组晨空腹静脉血并测定血清RANKL、OPG水平;采用GE3.0OHDXT仪器评估滑膜炎、骨髓水肿、骨侵蚀等关节损伤表现,采用RAMRIS系统进行评估。结果 3组RANKL水平逐渐上升,早期RA组OPG明显低于对照组及非早期RA组,而非早期RA组又高于对照组,差异均有统计学差异(P<0.05)。MRI肌腱炎与骨髓水肿及滑膜炎均呈正相关(r=0.385,P<0.05;r=0.385,P<0.05),OPG下降或MRI显示骨侵蚀阳性率为92.87%,骨髓水肿阳性率为73.14%,滑膜炎阳性率为88.36%,肌腱炎阳性率为57.24%,RAMRIS 3项或4项高于0分及OPG下降均为100%。RANKL上升或MRI显示骨侵蚀阳性率为91.25%,骨髓水肿阳性率为73.68%,滑膜炎阳性率为88.42%,肌腱炎阳性率为58.49%,RAMRIS 3项或4项高于0分、OPG上升均为97.48%。结论 MRI联合血清OPG、RANKL水平可明显提高早期RA骨关节损伤诊断水平。

激素性骨坏死骨质丢失与骨保护蛋白表达的相关研究

目的 探讨在激素性骨坏死的病程中 ,股骨不同部位骨保护蛋白 /破骨细胞形成抑制因子 (OPG/OCIF)的表达情况 ,与局部骨质丢失是否存在着相关性。 方法 31只新西兰白兔复制Yamamoto激素性骨坏死模型 ,内毒素和甲基强地松龙给药结束 3d后存活 2 4只 ;随机选 4只作为对照组 ,其余随机分为 4个不同时间组 ,每组 5只 ;按照不同时间组处死动物 ,进行股骨的骨密度值测量、病理切片H E染色和茜素红染色病理及OPG/OCIF组织化学染色 ,并进行图像处理和统计分析。结果 在激素性骨坏死早期 ,给药后 2周股骨的OPG/OCIF表达明显降低 (P <0 0 1) ,同时局部骨髓内出现了大量的破骨细胞 ;继而出现明显的骨质丢失 (从 0 375± 0 0 37、0 2 97± 0 0 2 2降至 0 173±0 0 2 4、0 183± 0 0 6 1,P <0 .0 5 )。 结论 糖皮质激素可抑制骨骼局部OPG/OCIF的表达 ,从而促进了破骨细胞分化与活性 ,加剧激素性坏死局部的骨质丢失。

骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子和破骨细胞分化因子的表达及意义

目的探讨骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子(osteoclast suppressor,OCIF)和破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)的表达及意义。方法选择衢州市人民医院2013年1月—2016年12月符合标准的骨质疏松性椎体骨折患者70例为骨质疏松组,非骨质疏松性椎体骨折患者70例为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(Double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定血清OCIF和ODF水平。采用双能X线骨密度仪测量腰椎正位总体L1～4骨密度及左侧股骨颈骨密度。采用SPSS20. 0统计软件对数据进行分析。结果骨质疏松组血清OCIF和ODF水平均高于对照组(均P <0. 05)。骨质疏松组腰椎正位骨密度和股骨颈骨密度均低于对照组(均P <0. 05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度均呈负相关(均P <0. 05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与骨折程度无显著相关性(均P> 0. 05)。结论骨质疏松性椎体骨折患者血清OCIF、ODF水平升高,血清OCIF、ODF水平与骨质疏松性椎体骨折患者的骨密度关系密切,与骨折的严重程度关系不大。

补肾法对去卵巢大鼠OPG/RANK/RANKL信号通路影响的Meta分析

目的:随着全球老龄化趋势的发展,绝经后骨质疏松症(PMOP)已成为世界性的女性健康问题。目前常用的生物制剂存在不良反应多、无法长期用药等缺陷。多项Meta分析已证明补肾法对PMOP患者的安全性和有效性,但其治疗机制尚不明确。该文Meta分析评估基于PMOP动物模型的补肾法对骨保护素(OPG)/核转录因子(NF)-κB受体激活因子(RANK)/NF-κB受体激活因子配体(RANKL)信号通路的影响,为用补肾法治疗PMOP提供实验依据。方法:计算机检索PubMed,Ovid Medline,Embase,中国知网(CNKI),维普和万方数据库,以收集检索从建库至2020年1月的研究,并对每篇纳入文章的研究质量进行了评估。根据SYRCLE的偏倚风险工具对每一篇纳入的文章的研究质量进行评价。使用RevMan 5.3软件根据Cochrane系统评价方法进行Meta分析。结果:包括619只大鼠的32项研究,纳入研究的质量分数都在3~5分。Meta分析结果表明,补肾法在增加骨密度(BMD)值方面优势明显[标准化均数差(SMD)=2.01,95%置信区间(CI)=1.50~2.52,P<0.000 01]。同时补肾法可增加卵巢切除(OVX)大鼠骨组织中血清OPG水平(SMD=3.33,95%CI=2.59~4.07,P<0.000 01),提高OPG mRNA表达(SMD=11.81,95%CI=7.49~16.13,P<0.000 01)和促OPG蛋白生成(SMD=4.95,95%CI=3.09~6.81,P<0.000 01)。补肾法可以降低血清RANKL水平(SMD=-4.88,95%CI=-6.01~-3.75,P<0.000 01)和RANK水平(SMD=-7.30,95%CI=-9.53~-5.07,P<0.000 01);补肾法还可降低骨RANKL mRNA(SMD=-6.22,95%CI=-8.95~-3.49,P<0.000 01)和骨RANK mRNA(SMD=-3.18,95%CI=-6.19~-0.18,P<0.05)及RANKL蛋白在骨组织中的表达(SMD=-3.99,95%CI=-5.47~-2.50,P<0.000 01)。结论:该研究发现补肾法在调节PMOP的动物模型中OPG/RANK/RANKL信号通路平衡方面具有重要优势,但仍然需要更多的样本,合理的设计和高质量的动物实验来进行进一步的验证。