川陈皮素纳米粒对破骨细胞作用的实验研究

目的:研究载川陈皮素(nobiletin,NOB)纳米粒(Nanoparticles,NPs)对破骨细胞的作用。方法:通过透析法制备载川陈皮素纳米胶束(NOB-poly(ethylene glycol)-block-poly(e-caprolactone micelles,NOB-PEG-PCL),以包封率和粒径作为评价指标。采用Malvern粒度仪测定纳米粒的粒径分布,透射电镜考察其形态,并考察纳米粒的体外释放行为。检测空白胶束和载药胶束对破骨细胞前体巨噬细胞的生物相容性,以及对破骨细胞相关基因的表达影响。结果:川陈皮素载药纳米粒的包封率为(76.34±3.25)%,载药量为(7.60±0.48)%,粒径为124 nm,透射电镜显示纳米粒粒径均一,成球状分布,12 h累积释放为65%,实验组NOB-PEG-PCL TRAP细胞阳性细胞数以及TRAP基因显著减少(P<0.05)。结论:实验表明载川陈皮素纳米粒能明显地减少破骨细胞数量,可进一步应用于牙槽骨骨组织工程。

正常人血清抗酒石酸盐酸性磷酸酶活性的观察

抗酒石酸盐酸性磷酸酶（Ｔａｒｔｒａｔｅ－ＲｅｓｉｓｔａｎｔＡｃｉｄＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＴＲＡＰ）是破骨细胞功能的重要标志物，它的活性与破骨细胞活性呈正相关。ＴＲＡＰ由破骨细胞产生后分泌入血，因此可通过测定血清中ＴＲＡＰ的活性来了解破骨细胞活性。本文为观察ＴＲＡＰ活性在正常人血清中动态变化趋势，采用对硝基酚磷酸盐法测定了２３７例（年龄０．５～７２岁，平均年龄３５．３±１８．０）不同年龄段（每隔１０岁为一年龄段）正常人血清ＴＲＡＰ活性。结果显示：①２３７例正常人血清ＴＲＡＰ活性水平为９．６８±５．６５Ｕ／Ｌ，其中男性为９．８８±５．８０Ｕ／Ｌ（ｎ＝１２９），女性为９．４７±５．４０Ｕ／Ｌ（ｎ＝１０８）；②血清ＴＲＡＰ活性水平与年龄呈明显负相关（ｒ＝－０．３３７，Ｐ＜０．０１），儿童及青少年时期，血清ＴＲＡＰ活性都较高；成年（２０岁）后，随年龄增长，其活性逐渐降低，在４０～４９岁达最低值（７．２１±２．７８Ｕ／Ｌ）。此后，男女两性的血清ＴＲＡＰ活性的变化表现出不同的趋势，男性血清ＴＲＡＰ活性基本保持在一定水平，而女性血清ＴＲＡＰ活性则开始逐渐回升。结果说明：血清ＴＲＡＰ活性可作为骨代谢过程中破骨细胞功能的较灵?

艾司氯胺酮对破骨细胞分化的影响

目的研究艾司氯胺酮在体外对核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导的破骨细胞分化的影响及机制。方法从C57BL/6小鼠骨髓中分离获得骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs),采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophages colony-stimulating factor,M-CSF)和RANKL诱导BMMs向破骨细胞分化。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测不同浓度艾司氯胺酮(0,3.125,6.25,12.5,25,50,100,200μmol/L)分别作用0,24,48,72 h对BMMs的毒性作用,并筛选出合适浓度,然后将诱导分化的破骨细胞分为3组:对照组、RANKL组和RANKL+艾司氯胺酮组。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察艾司氯胺酮对破骨细胞分化的影响;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测艾司氯胺酮对破骨细胞分化相关基因NFATc1、c-Fos和CTSK mRNA表达水平的影响。结果CCK-8检测结果显示,艾司氯胺酮在0~200μmol/L对BMMs无明显的毒性作用(P>0.05)。TRAP染色结果显示,与对照组比较,RANKL组和RANKL+艾司氯胺酮组中TRAP染色阳性的破骨细胞数量增加(P<0.01);与RANKL组比较,RANKL+艾司氯胺酮组中TRAP染色阳性的破骨细胞数量减少(P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,RANKL组NFATc1、c-Fos和CTSK mRNA表达升高(P<0.01);与RANKL组比较,RANKL+艾司氯胺酮组NFATc1、c-Fos和CTSK mRNA表达降低(P<0.01)。结论艾司氯胺酮可抑制RANKL诱导的破骨细胞分化,其机制可能与艾司氯胺酮抑制破骨细胞分化过程中特异性基因NFATc1、c-Fos、CTSK mRNA的表达水平有关。