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靶向survivin的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的抑制作用 被引量:7
1
作者 杨彤涛 李存孝 +5 位作者 高杰 黄立军 张勇 周勇 范清宇 马保安 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第2期125-128,共4页
目的:探讨针对人survivin基因的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的体内外抑制作用。方法:合成survivin基因的RNA干涉(RNA interferance,RNAi)特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数... 目的:探讨针对人survivin基因的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的体内外抑制作用。方法:合成survivin基因的RNA干涉(RNA interferance,RNAi)特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blotting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下MG63移植瘤的形成。结果:成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞MG63/pSiS。与MG63、MG63/pSi(空质粒对照细胞)相比,MG63/pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义(P<0.01);Western blotting显示,MG63/pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加(P<0.01)。MG63/pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论:Survivin特异性siRNA可明显促进骨肉瘤细胞MG63的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。 展开更多
关键词 骨肉瘤 survivin rna干涉 凋亡 抗肿瘤
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Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响 被引量:2
2
作者 李鲲 杨述华 +2 位作者 刘红云 吴强 傅德皓 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期373-375,i0002,共4页
[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建SurvivinshRNA表达载体pS ilence 2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞系MG-63,筛选稳定表达的克隆,倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,RT-PCR、W eston-... [目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建SurvivinshRNA表达载体pS ilence 2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞系MG-63,筛选稳定表达的克隆,倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,RT-PCR、W eston-b lot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,其抑制率分别为85.08%和81.14%;细胞增殖受到显著抑制,培养48 h后与空白组比较,抑制率达63.41%;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54%。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 survivin SIrna 短发夹状rna 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡
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Survivin特异性siRNA促进骨肉瘤细胞凋亡的实验研究 被引量:2
3
作者 杨彤涛 李存孝 +5 位作者 张勇 黄立军 张明华 范清宇 马保安 周勇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1334-1337,1340,共5页
目的构建人survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响。方法应用pSilencer3.0-H1neo,构建survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot分别检测survivin的蛋白的水平变... 目的构建人survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响。方法应用pSilencer3.0-H1neo,构建survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot分别检测survivin的蛋白的水平变化。透射电镜等形态学观察、Annexin V法、Hoechst染色检测细胞凋亡。结果成功构建了survivin基因shRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与正常MG63细胞、阴性对照细胞相比,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓,存在差异显著(P<0.01)。western blot显示MG63/PsiS细胞中蛋白表达减少。MG63/PsiS凋亡率增加(P<0.01)。结论特异性siRNA能够明显抑制survivin基因在MG63细胞中的表达并明显促进细胞凋亡,这为进一步研究survivn在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 骨肉瘤 survivin rna 干涉
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shRNA沉默Survivin基因对人骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响 被引量:2
4
作者 段大鹏 秦静 +5 位作者 卫文博 宋启春 李伟伟 段亮 范亚一 弓立群 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第22期3555-3558,共4页
目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染。细胞以1∶5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63... 目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染。细胞以1∶5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,Survivin-shRNA组为Survivin-shRNA转染的细胞,GFP组和CON组为阴性对照组。每3天用卡尺测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。颈椎脱臼法处死裸鼠,取骨肉瘤标本称重。Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达。结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质。骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长。肿瘤的重量结果显示,Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤重量的增加。Western blot结果显示,SUV、VEGF的表达在Survivin-shRNA组中明显低于对照组,而CAS-3表达相反。结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖及成瘤能力,其机制可能是通过调节SUV、VEGF、CAS-3的表达及抑制肿瘤新生血管形成等来实现的。 展开更多
关键词 骨肉瘤 survivin rna干扰 成瘤能力
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siRNA对骨肉瘤细胞细胞周期及survivin表达的影响 被引量:1
5
作者 杨彤涛 李存孝 +4 位作者 黄立军 张志培 范清宇 马保安 周勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期104-106,共3页
目的构建人survivin特异性siRNA,探讨其对骨肉瘤细胞MG63细胞周期及survivin表达的影响。方法构建sur-vivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系,以Westernblot法检测survivin蛋白表达变化,透射电镜、Hoechst染... 目的构建人survivin特异性siRNA,探讨其对骨肉瘤细胞MG63细胞周期及survivin表达的影响。方法构建sur-vivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系,以Westernblot法检测survivin蛋白表达变化,透射电镜、Hoechst染色检测细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体PsiS,获得了稳定转染的细胞系。与正常MG63细胞、阴性对照细胞相比,MG63/PsiS细胞中survivin蛋白表达减少,部分细胞核致密浓染或碎块状浓染,凋亡率增加了7倍,而G2/M期细胞减少近50%。结论特异性siRNA能够明显抑制survivin基因在MG63细胞中的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤 基因 survivin rna干涉
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利用siRNA抑制人骨肉瘤细胞survivin的表达
6
作者 李鲲 杨述华 +3 位作者 刘红云 傅德皓 宁旭 梅荣成 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期519-521,F0003,共4页
目的构建生存素(survivin)短发夹状RNA表达载体,检测其对骨肉瘤细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法体外构建survivin shRNA表达载体pSilence2.1-neo-survivin,转染骨肉瘤细胞系MG-63,RT-PCR、免疫组化方法检测转染前后survivin m... 目的构建生存素(survivin)短发夹状RNA表达载体,检测其对骨肉瘤细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法体外构建survivin shRNA表达载体pSilence2.1-neo-survivin,转染骨肉瘤细胞系MG-63,RT-PCR、免疫组化方法检测转染前后survivin mRNA及蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果pSilence2.1-neo-survivin载体转染能显著抑制survivin mRNA、蛋白表达,转染后48h细胞增殖的抑制率为61.83%。结论pSilence2.1-neo-survivin可显著抑制MG-63细胞survivinmRNA、蛋白的表达及细胞的增殖活性。 展开更多
关键词 survivin rna干扰 短发夹rna 骨肉瘤
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RNA干扰技术特异性抑制骨肉瘤survivin的表达
7
作者 王佳 吕刚 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期575-576,578,共3页
目的:体外转录合成survivin siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U2-OS中抑制survivin的表达情况。方法:体外转录合成survivin序列特异性双链RNA(dsRNA),转染U2-OS细胞株中,用RT-PCR和W estern b lot法检测转染前后survivin基因的mRNA和蛋白的表... 目的:体外转录合成survivin siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U2-OS中抑制survivin的表达情况。方法:体外转录合成survivin序列特异性双链RNA(dsRNA),转染U2-OS细胞株中,用RT-PCR和W estern b lot法检测转染前后survivin基因的mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,观察U2-OS细胞生物学特性的改变。结果:转染特异性siRNA的细胞其survivin mRNA及蛋白表达均下调,干涉后细胞的增殖受到抑制。结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制骨肉瘤细胞株U2-OS中survivin的表达,抑制细胞的增殖,RNA干扰技术为骨肉瘤的治疗提供了一种新策略。 展开更多
关键词 骨肉瘤 rna干扰 双链rna 生存素
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靶向survivin的siRNA对肝癌HepG2细胞增殖和转移能力的影响
8
作者 麻晓 荆晓岳 王利 《中国实用医药》 2009年第19期76-78,共3页
目的探讨针对人survivin基因的siRNA对肝癌细胞HepG2的体内外抑制作用。方法合成survivin基因的RNA干涉(RNA interferance,RNAi)特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染HepG2细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检... 目的探讨针对人survivin基因的siRNA对肝癌细胞HepG2的体内外抑制作用。方法合成survivin基因的RNA干涉(RNA interferance,RNAi)特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染HepG2细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blot-ting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过AnnexinV法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下HepG2移植瘤的形成。结果成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞HepG2/pSiS。与HepG2、HepG2/pSi(空质粒对照细胞)相比,HepG2/pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义(P<0.01);Western blotting显示,HepG2/pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加(P<0.01)。HepG2/pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论Survivin特异性siRNA可明显促进肝癌细胞HepG2的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。 展开更多
关键词 肝癌 survivin rna干涉 凋亡 抗肿瘤
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靶向生存素基因siRNA诱导骨肉瘤细胞株U-2OS的凋亡
9
作者 王佳 吕刚 +1 位作者 顾海伦 王岩峰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第1期27-31,共5页
目的:体外转录合成生存素(survivin)基因siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U-2OS中抑制survivin基因后细胞增殖及细胞凋亡情况。方法:将U-2OS细胞分为A组(空白对照组)、B组(非特异性转染组)、C组(特异性转染组),在荧光显微镜下观察转染前后细... 目的:体外转录合成生存素(survivin)基因siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U-2OS中抑制survivin基因后细胞增殖及细胞凋亡情况。方法:将U-2OS细胞分为A组(空白对照组)、B组(非特异性转染组)、C组(特异性转染组),在荧光显微镜下观察转染前后细胞形态的改变,用RT-PCR和Western blot法分别检测转染前后survivin基因mRNA和蛋白的干涉效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并比较各组结果。结果:荧光显微镜下可见转染后细胞增殖变慢, 凋亡细胞增加;RT-PCR结果显示survivin siRNA明显抑制survivin基因mRNA表达。Western blot法检测C组蛋白阳性表达率比A、B两组显著降低(P<0.01);特异性转染组的细胞增殖缓慢,与其它两组比较有显著性差异(P<0.01)。流式细胞仪检测C组细胞凋亡率与其他两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制U- 2OS细胞中survivin,in mRNA及蛋白表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。RNA干扰技术为骨肉瘤的基因治疗提供了一种新策略。 展开更多
关键词 骨肉瘤 rna干扰 SIrna 生存素基因 凋亡
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人存活素特异性siRNA促进SOSP-9607细胞凋亡的实验研究
10
作者 孙宏慧 范清宇 +3 位作者 孙嗣国 于哲 陈翔 纪振钢 《现代肿瘤医学》 CAS 2008年第5期697-700,共4页
目的:构建人存活素(survivin)基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞SOSP-9607凋亡的影响。方法:利用pSilencer3.0-H1neo,构建人存活素特异性的RNA干涉载体,转染SOSP-9607细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot检测survivi... 目的:构建人存活素(survivin)基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞SOSP-9607凋亡的影响。方法:利用pSilencer3.0-H1neo,构建人存活素特异性的RNA干涉载体,转染SOSP-9607细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot检测survivin蛋白水平变化。透射电镜等形态学观察、AnnexinV法、Hoechst染色检测细胞凋亡。结果:成功构建了人存活素基因siRNA真核表达载体PS。获得了稳定转染的细胞系。与正常SOSP-9607细胞、阴性对照细胞相比,SOSP-9607/PS生长曲线十分平缓,存在显著差异(P<0.01)。westernblot显示SOSP-9607/PS细胞中蛋白表达减少。SOSP-9607/PS凋亡率增加(P<0.01)。结论:特异性siRNA能够明显抑制survivin基因在SOSP-9607细胞中的表达并明显促进细胞凋亡,这为进一步研究survivin在SOSP-9607细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 骨肉瘤 存活素 rna干涉
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Survivin基因沉默对骨肉瘤裸鼠自噬相关蛋白的影响
11
作者 白星 周娇 +1 位作者 杜少蕊 田昕 《实用癌症杂志》 2022年第10期1567-1569,共3页
目的 研究Survivin基因沉默对骨肉瘤裸鼠自噬相关蛋白表达水平的影响。方法 重组腺病毒Survivin-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞,以1∶5进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,GFP组和CON组为阴性对照组。采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉... 目的 研究Survivin基因沉默对骨肉瘤裸鼠自噬相关蛋白表达水平的影响。方法 重组腺病毒Survivin-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞,以1∶5进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,GFP组和CON组为阴性对照组。采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型48只,每3天用卡尺测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;Western Blot法和免疫组织化学法分别检测自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR的表达。结果 成功构建出裸鼠骨肉瘤模型。骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长;Western blot结果显示,Survivin-shRNA组中LC3、P62蛋白表达升高,mTOR表达水平降低;免疫组织化学结果显示,Survivin-shRNA组中LC3、P62的表达升高,mTOR蛋白表达降低。结论 Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖能力,其机制可能与调节自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR的表达有关。 展开更多
关键词 骨肉瘤 survivin rna干扰 裸鼠 自噬
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靶向Survivin的小分子干扰RNA对骨肉瘤细胞的体内外抑制作用 被引量:2
12
作者 李鲲 马德彰 +3 位作者 勘武生 李鹏 肖军 王威 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1532-1534,共3页
目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织... 目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学(SP)法检测转染前后Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,建立裸鼠移植瘤模型,记录瘤体形成时间及肿瘤生长.结果 转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,转染后mRAN表达抑制率为85.08%,增殖指数为空白组的28.20% 细胞周期分析显示:shRNA组G0/G1期细胞明显增多,而G2/M期、S期细胞数目减少 吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54% 稳定转染组细胞裸鼠体内致瘤能力降低,转染组成瘤时间为(13.2±2.0)d,空白组为(6.5±1.6)d,两者比较差异有统计学意义(P<0.01).4周时同空白组相比转染组瘤体体积小62.89%(P<0.01),重量轻59.07%(P<0.01).结论 靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞MG-63增殖,促进细胞凋亡 明显抑制人骨肉瘤细胞的致瘤活性及裸鼠移植瘤的生长. 展开更多
关键词 survivin rna干扰 骨肉瘤 裸鼠 移植瘤
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siRNA联合顺铂抑制骨肉瘤细胞增殖的研究 被引量:1
13
作者 杨彤涛 李存孝 +3 位作者 王英禹 张勇 周勇 马保安 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期72-74,共3页
目的构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用。方法应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。半定量PCR和免疫荧光染... 目的构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用。方法应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化。Annexin V法检测细胞凋亡。MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用。结果构建Survivin基因siRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与MG63、阴性对照细胞比较,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓。MG63/PsiS细胞中Survivin的mRNA及蛋白表达明显减少。MG63/PsiS凋亡率增加为17.8%(P〈0.01)。1mg/L顺铂作用下,MG63/PsiS死亡率是其他各组的2.3倍(P〈0.01)。结论特异性siRNA能够明显阻断Survivin基因的表达促进MG63细胞凋亡.提高细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 骨肉瘤 survivin rna干涉 顺铂
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