蛇床子素化学结构修饰研究进展

蛇床子素,其化学名为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素,又名甲氧基欧芹酚,是蛇床子成熟果实中的主要有效成分,属香豆素类化合物,拥有丰富的生物活性。为深入研究蛇床子素活性与其结构的关系,人们对其进行了大量的结构修饰研究工作,修饰部位主要集中在内酯环、C-7位甲氧基和C-8位异戊烯基。综述蛇床子素的结构修饰研究进展,以期为该类化合物结构修饰深入研究和应用开发提供参考。

蛇床子素通过减轻阿尔茨海默病大鼠模型中的神经炎症改善认知功能障碍

目的抗炎治疗为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供了一个潜在的靶点。蛇床子素(Ost)已被证明可以改善记忆并具有多效性保护作用,但其在AD治疗过程中的确切机制尚不清楚。方法在本研究中,作者研究Ost对β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导的认知功能障碍和海马炎症反应的保护作用。采用双侧海马注射Aβ_(1-42)建立AD大鼠模型,在Aβ_(1-42)注射前7 d至注射后7 d每日给予Ost。采用Morris水迷宫(MWM)试验评估大鼠的认知功能。采用免疫组化和Western blot法检测海马神经胶质反应及Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和核因子-κB(NF-κB)的表达。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定促炎细胞因子的产生。结果Ost治疗显著改善了AD大鼠模型海马中Aβ_(1-42)毒性诱导的认知障碍,减轻了胶质细胞的激活,降低了炎症细胞因子的释放(P<0.01)。经Ost处理后,Aβ_(1-42)诱导的TLR4、TRAF6和NF-κB表达的明显降低(P<0.01)。结论Ost通过抑制TLR4/NF-κB信号通路而减轻Aβ_(1-42)诱导的神经炎症,可能是一种很有前途的治疗药物。

蛇床子素通过NF-kB信号通路调控退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应及凋亡

目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OGD培养+蛇床子素处理)、PDTC组(OGD培养+NF-κB通路抑制剂PDTC处理)和蛇床子素+PDTC组(OGD培养+蛇床子素+PDTC处理)。采用Western blot检测细胞中Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col2al)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、P65和p-P65蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中炎性因子血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较,OGD组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显降低,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,细胞凋亡率明显升高,细胞中p-P65蛋白表达明显升高;与OGD组比较,蛇床子素组和PDTC组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显升高,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,细胞凋亡率明显降低,细胞中p-P65蛋白表达明显降低,而蛇床子素+PDTC组上述指标改变最为明显。结论 蛇床子素可能通过抑制核因子激活的B细胞的κ轻链增强(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的活性,促进退变髓核细胞的细胞外基质合成、抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡。

蛇床子素调节PI3K/Akt/m TOR信号通路对老龄自发性高血压大鼠肾氧化应激损伤的影响

目的:探究蛇床子素对老龄自发性高血压大鼠的影响机制。方法:购买20月龄的老龄自发性高血压大鼠(SHRs)及健康Wistar-Kyoto(WKY)大鼠,对SHRs进行蛇床子素灌胃治疗处理持续8周。对大鼠收缩压及舒张压进行监测,使用苏木精-伊红(H&E)、碘酸雪夫染色(PAS)和Masson染色观察大鼠肾脏组织病理学变化。使用ELISA试剂盒检测大鼠肾脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性。采用Western blot对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白进行检测。结果:蛇床子素降低SHRs收缩压及舒张压,改善了SHRs大鼠肾脏的组织病理学变化,降低SHRs肾脏MDA活性,提升SOD及GSH活性。蛇床子素降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR水平。结论:蛇床子素通过降低PI3K/Akt/mTOR信号通路活性发挥对老龄自发性高血压大鼠肾氧化应激损伤的保护作用。

基于BMP2/Smad4信号通路探究蛇床子素对骨质疏松性骨折大鼠愈合过程的影响

目的基于骨形态发生蛋白(BMP)2/Smad4信号通路探究蛇床子素对骨质疏松性骨折(OPF)大鼠愈合过程的影响。方法将90只SD大鼠分成Sham组、OPF组、低剂量组(10 mg/kg蛇床子素)、高剂量组(20 mg/kg蛇床子素)、高剂量+NC组(2μl shRNA)、高剂量+shRNA-BMP2组(2μl shRNA-BMP2),15只/组;摘除大鼠的双侧卵巢以构建骨质疏松(OP)模型,在此模型基础上进行右侧股骨干骨折建立OPF大鼠模型,术后除Sham组及OPF组外其余组灌胃相应剂量蛇床子素,而Sham组及OPF组给予等量生理盐水灌胃,高剂量+NC组、高剂量+shRNA-BMP2组在灌胃第1天于尾静脉注射相应慢病毒,其余组则注射等量生理盐水,灌胃8 w(1次/d);使用双能X线BMD仪检测骨痂部位骨密度(BMD);酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和碱性磷酸酶(ALP)水平;三点弯曲实验进行股骨生物力学性能检测;Micro-CT扫描股骨骨痂;HE染色观察骨痂组织形态;Western印迹检测骨痂组织成骨细胞特异性转录因子(Osterix)、Runt相关转录因子2(RUNX2)及BMP2/Smad4通路蛋白表达。结果与Sham组比较,OPF组股骨骨痂BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著降低,股骨刚度及最大载荷、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)显著减小,TRACP水平显著升高,骨小梁分离度(Tb.Sp)显著增大(均P<0.05);与OPF组比较,低、高剂量组BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著升高,股骨刚度及最大载荷、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著增加,TRACP水平显著降低,Tb.Sp显著减小(均P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+shRNA-BMP2组BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著降低,股骨刚度及最大载荷、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著减小,TRACP水平显著升高,Tb.Sp显著增大(均P<0.05)。结论蛇床子素通过激活BMP2/Smad4信号通路来促进OPF大鼠的骨折处愈合。

含(杂)芳磺酰基哌嗪的蛇床子素衍生物的合成及抗菌活性

设计合成了25个含(杂)芳磺酰基哌嗪的蛇床子素衍生物,经核磁共振波谱(1H NMR和13C NMR)及元素分析确证了其结构.抗菌活性测试结果表明,化合物4q对金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠杆菌(E.coli)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐氟喹诺酮大肠杆菌(FREC)的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.5,1,2和2μg/mL,化合物4s对S.aureus,E.coli,MRSA和FREC的MIC分别为0.25,0.5,1和2μg/mL,化合物4u对S.aureus,E.coli,MRSA和FREC的MIC分别为0.5,2,1和4μg/mL,3个化合物的抗S.aureu活性与对照药苯唑西林相似,且优于诺氟沙星;抗E.coli,MRSA和FREC活性优于对照药苯唑西林和诺氟沙星.研究结果表明,(杂)芳磺酰基哌嗪的引入能有效提高抗菌活性,扩大抗菌谱.

蛇床子素通过阻断钙通道降低蛙坐骨神经复合动作电位幅度

目的探讨蛇床子素对蛙坐骨神经复合动作电位的作用以及离子机制。方法通过细胞外空气间隔法诱导蛙坐骨神经复合动作电位,观察蛇床子素作用及其机制。结果蛇床子素剂量依赖降低蛙坐骨神经复合动作电位幅度。胞外0钙能够减小蛇床子素的抑制效应。广谱钙通道阻断剂氯化镉,氯化镧阻断蛇床子素的抑制效应。L型钙通道阻断剂地尔硫卓、维拉帕米,P/T型钙通道阻断剂氯化镍都能阻断蛇床子素的抑制效应。结论蛇床子素通过抑制钙通道降低蛙的坐骨神经复合动作电位幅度。

芳香丙烯酸酯类蛇床子素衍生物的合成与抗菌活性

在前期对蛇床子素研究的基础上,保留其优势结构,与芳香丙烯酸组合,设计合成了24个酯类衍生物,经^(1)HNMR、^(13)CNMR和元素分析对其进行结构确证。抗菌活性测试结果显示:化合物(E,E)-4-硝基苯基丙烯酸[(7-甲氧基-2-氧代-2H-色烯-8-基)-3-甲基-2-丁烯]酯(Ⅲh)和(E,E)-噻唑-2-丙烯酸[(7-甲氧基-2-氧代-2H-色烯-8-基)-3-甲基-2-丁烯]酯(Ⅲt)的抗菌效果最为显著,前者对金黄色葡萄球菌(S. aureus)、大肠杆菌(E. coli)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐氟喹诺酮大肠杆菌(FREC)的最小抑菌浓度(MIC)分别为4、16、8和16 mg/L,后者对S. aureus、MRSA、E. coli和FREC的MIC分别为2、8、4和8 mg/L,对所测细菌的抑制活性优于前期化合物,具有潜在的研究价值。

蛇床子素下调miR-143-3p抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的 观察蛇床子素对小鼠肺成纤维细胞(MLF)增殖和胶原合成的影响并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养MLF,将其分为对照组、TGF-β1组、低剂量蛇床子素组、中剂量蛇床子素组、高剂量蛇床子素组、anti-miR-NC组、anti-miR-143-3p组、高剂量蛇床子素+miR-NC组、高剂量蛇床子素+miR-143-3p组;RTqPCR检测微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)的表达水平;MTT检测细胞活力;Western blotting检测蛋白表达。结果 与对照组比较,TGF-β1组MLF的miR-143-3p表达水平、增殖和胶原合成能力显著升高,细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达水平显著升高(P <0.05);与TGF-β1组比较,中、高剂量蛇床子素组MLF的miR-143-3p表达水平、增殖和胶原合成能力显著降低,CyclinD1、PCNA、ColⅠ和ColⅢ表达水平显著降低(P <0.05);下调miR-143-3p显著降低MLF的增殖和胶原合成能力,CyclinD1、PCNA、ColⅠ和ColⅢ表达水平显著降低(P <0.05);上调miR-143-3p逆转了蛇床子素对MLF增殖和胶原合成的影响(P <0.05)。结论 蛇床子素可能通过下调miR-143-3p表达抑制小鼠MLF的增殖和胶原合成。

蛇床子素对乳腺癌细胞的放疗增敏作用及其机制

目的探讨蛇床子素(OST)对4T1细胞放疗增敏的作用及其机制。方法4T1细胞经不同浓度OST(25,50,75,100,125,150,175,200μmol/L)处理24 h后用CCK-8法检测细胞活力。将4T1细胞分为IR组和OST(50μmol/L)+IR组,采用克隆平板形成实验检测放疗增敏影响。将4T1细胞分为对照组、OST组(50μmol/L)、IR组(2 Gy)、OST(50μmol/L)+IR(2 Gy)组,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot检测细胞内Nrf2及NQO1蛋白表达水平变化。结果与0μmol/L OST组相比,不同浓度OST(25,50,75,100,125,150,175,200μmol/L)组4T1细胞的增殖活力明显降低(P<0.05)。与IR组相比,OST+IR组细胞克隆存活分数显著降低(P<0.05);与IR组相比,OST+IR组细胞的增敏比为1.14。与对照组相比,OST组和IR组细胞凋亡率均增加(P<0.05);与IR组相比,OST+IR组细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。与对照组相比,OST组Nrf2及NQO1蛋白表达水平明显增加(P<0.05),IR组Nrf2及NQO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与IR组相比,OST+IR组Nrf2及NQO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论蛇床子素可以增加乳腺癌细胞的放疗敏感性,其可能与Nrf2/NQO1通路机制有关。

蛇床子素对脂肪干细胞成膜和成骨能力的影响

研究蛇床子素对脂肪干细胞增殖、细胞膜片形成和成骨分化能力的影响。方法 分离培养C57BL/6小鼠脂肪干细胞(ASCs)并鉴定其多向分化能力;根据细胞培养液中加入蛇床子素的含量(0、10-5、10-6、10-7mol/L)将细胞分为空白对照组、10-5组、10-6组和10-7组。CCK-8 法检测各组细胞增殖水平。用含蛇床子素的成膜诱导液诱导7天收获细胞膜片,冰冻包埋切片后焦油紫染色观察各组膜片厚度。用含蛇床子素的成骨诱导液培养ASCs和ASC膜片,成骨诱导7天后行碱性磷酸酶染色,成骨诱导28天后行茜素红染色,检测其成骨能力。Image J 测量膜片厚度和染色阳性区域面积。结果 蛇床子素对ASCs的增殖没有显著影响;10-7 mol/L蛇床子素可以使ASC膜片显著增厚(P<0.01);成膜诱导与蛇床子素二者联合运用对ASCs成骨能力有更好的促进作用,其中10-7 和10-6mol/L蛇床子素可显著促进ASC膜片的成骨能力(P<0.01),10-7组效果最好。结论 蛇床子素可以促进ASCs的成膜能力;成膜诱导与蛇床子素共同应用对于ASCs的成骨能力具有协同促进效应。

蛇床子素对去卵巢大鼠近侧胫骨代谢影响的定量研究

切除３月龄ＳＤ大鼠双侧卵巢１２周后，其骨形成的参数值明显增加（％Ｌ．Ｐｍ＋５８％，ＢＦＲ／ＢＶ＋１０５％，ＢＦＲ／ＢＳ＋７４％，％０．Ｐｍ＋１８８％），同时骨吸收的参数值增加（％Ｅｒ．Ｐｍ＋１５５％），荧光标记周长与吸收周长的比率－４１％，由于骨吸收大于骨形成，骨质丢失（％Ｔｂ．Ａｒ－５９％，Ｔｂ．Ｔｈ一１４％），出现高转换型骨质疏松。分别用蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌｅ）６．７ｍｇ·ｋｇ￣（－１）ｉｇ，每周６次，尼尔雌醇（ｎｉｌｅｓｔｒｉｏｌ）１ｍｇ·ｋｇ￣（－１）ｉｇ，每周１次，持续１２周，均能明显抑制去卵巢诱导的骨高转换，防止骨质丢失。但蛇床子素抑制骨高转换的效应比尼尔雌醇低（蛇床子素治疗组比尼尔雌醇治疗组％Ｔｂ．Ａｒ一５５％）。

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚小鼠免疫功能的影响

采用醋酸氢化可的松肾阳虚小鼠模型，观察蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ）和蛇床子总香豆素（ＴＣＲ）对肾阳虚小鼠免疫功能的影响。结果：肾阳虚组与正常对照组比较，腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数、血清溶血素５０％溶血值、脾淋巴细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入数等指标明显降低（Ｐ＜０．０１）；肾阳虚用ｏｓｔｈｏｌ及ＴＣＲ组与肾阳虚小鼠比较，上述各项指标均有显著提高（Ｐ＜０．０５，＜０．０１）。提示ｏｓｔｈｏｌ和ＴＣＲ可以增强肾阳虚小鼠的免疫功能。

HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素含量

目的用高效液相色谱法同时测定中药蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量。方法采用KromasilC8(2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm)为色谱柱 ,以甲醇 水 (体积比 6 5∶35 )为流动相的HPLC法 ,检测波长为 310nm ,流速为 0 8mL·min-1,柱温为室温。结果以醋酸氟轻松为内标 ,蛇床子素和欧前胡素分别在 13～ 2 0 8mg·L-1和 8～ 12 8mg·L-1内 ,线性关系良好 (r≥ 0 9998) ;平均回收率分别为 98 2 %和 97 5 % ;RSD分别为 1 7%和 2 0 % (n =9)。结论本法简便快速 ,回收率及重现性良好 。

蛇床子素对学习记忆的影响及其机制分析

目的：观察蛇床子素对小鼠学习记忆的影响并探讨其作用机制。方法：采用避暗实验、跳台实验、Ｙ型水迷路实验观察蛇床子素对小鼠学习记忆的影响，并通过测定脂质过氧化物含量，胆碱酯酶活性分析其作用机制。结果：蛇床子素可显著改善小鼠记忆获得、巩固及方向辨别障碍，但对小鼠记忆再现障碍无明显改善。并能显著延长小鼠断头耐缺氧时间，抑制大鼠肝、脑组织中脂质过氧化物的生成，降低小鼠全血、脑内胆碱酯酶活性。结论：蛇床子素有促进小鼠学习记忆的作用，其机制可能与影响脑内胆碱酯酶活性及延缓细胞老化等因素有关。

复方蛇床子洗剂中蛇床子素的RP-HPLC测定

目的 建立复方蛇床子洗剂中蛇床子素定量分析的 RP- HPL C方法。方法 选择醋酸甲地孕酮为定量内标物 ,采用 Hypersil- ODS2 (2 0 0 mm× 4.0 m m,5μm )色谱柱 ,流动相为 0 .0 1m ol/L磷酸二氢钠 -乙腈 (5 2∶ 48) ,流速1.2 m L/min,检测波长 32 0 nm。结果 蛇床子素和内标在 12 min之内实现理想分离。在 0 .12 3 8～ 2 .970 μg/m L范围内 ,蛇床子素与内标峰面积比与其相应浓度呈良好的线性关系 (r=0 .9996 ) ,方法平均回收率为 (98.4±0 .90 ) % ,RSD为 0 .91%。结论 本法操作简便快速 ,定量准确可靠 ,可用于复方蛇床子洗剂的质量控制。

蛇床子素的抗炎作用及其机制

目的研究蛇床子素的抗炎作用及其分子机制。方法用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α、IL-6、NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用。以ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTT法评价细胞毒性。Western blot法检测iNOS、COX-2及内参蛋白β-actin水平。比色法检测COX-2酶活性。结果蛇床子素在12.5～100μmol.L-1浓度范围内可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7释放炎症介质TNF-α、IL-6、NO,并呈现良好的剂量依赖关系。Western blot结果表明蛇床子素能够明显下调iN-OS和COX-2蛋白表达水平。比色法测定酶活性结果提示蛇床子素对COX-2酶活性无明显抑制作用。结论蛇床子素通过下调iNOS和COX-2蛋白表达水平,能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6和炎症介质NO,这可以为蛇床子素以及相关制剂的临床应用提供一定的理论依据。

蛇床子素对植物病原真菌抑制机制的初步研究

天然化合物蛇床子素(osthol)对草坪纹枯病菌Rhizoctoniasolani、芒果炭疽病菌Colletotrichummusae、苹果叶枯病菌Rhizoctoniasolani、辣椒疫霉病菌Phytophoracapsici、辣椒炭疽(红)病菌Collectotrumgloesporioides、番茄灰霉病菌BotrytiscinereaPers、油菜菌核病菌Sclerotiniasclerotiorum、小麦赤霉病菌Fusariumgraminearum、苹果轮纹病菌Macrophomakawatsukai、水稻稻瘟病菌Pyriculariagrisea、西瓜枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.niveum、棉花枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum、棉花黄萎病菌Verticilliumdahliae等有不同的抑制活性,对大多数病菌其抑制中浓度(EC50值)在21.15～61.62μg/mL之间。以小麦赤霉病菌为研究对象,结果表明50μg/mL蛇床子素对其孢子萌发有显著的抑制作用;100μg/mL蛇床子素处理24h后,菌丝大量断裂,可溶性蛋白含量增加,菌体葡萄糖含量呈"V"型变化,几丁质水解酶活性和几丁糖含量均高于对照。

独活活性成分蛇床子素的药理学研究进展

独活是具有千年药用历史的古老中药,其主要活性成分为蛇床子素(7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素),具有广泛的药理作用。综述近20年国内外关于蛇床子素药理学研究进展,为蛇床子素临床应用奠定坚实的理论基础,并为创新药物研发提供一个可行的先导化合物。

蛇床子素对AlCl_3致急性衰老模型小鼠记忆障碍的保护作用

目的 研究蛇床子素对AlCl3 致急性衰老模型小鼠记忆障碍的保护作用及其机制。方法 通过小鼠避暗实验和跳台实验、血浆和脑组织超氧物歧化酶 (SOD)活性及全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)活性测定 ,观察蛇床子素对AlCl3 造成小鼠记忆障碍模型的保护作用。结果 蛇床子素能明显改善AlCl3 所致被动回避性记忆障碍 ,增强SOD和GSH PX活性。结论 蛇床子素对AlCl3 致急性衰老模型小鼠记忆障碍有保护作用 ,其作用机制可能是通过增强抗氧化酶GSH PX和SOD活性来清除氧自由基对中枢神经系统神经细胞的损伤。