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大肠杆菌otsA基因的克隆和表达 被引量:5
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作者 王忆琴 戴秀玉 +1 位作者 王韫恂 周坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期470-474,共5页
用PCR方法扩增了 1 5kb的otsA基因片段 ,将该片段连接到多拷贝克隆载体后转化otsBA缺失和otsA缺陷的大肠杆菌菌株 ,使转化株重新获得otsA基因功能。生长曲线表明转化株在高渗培养基中生长良好 ,薄层层析法 (TLC)检测海藻糖实验说明转... 用PCR方法扩增了 1 5kb的otsA基因片段 ,将该片段连接到多拷贝克隆载体后转化otsBA缺失和otsA缺陷的大肠杆菌菌株 ,使转化株重新获得otsA基因功能。生长曲线表明转化株在高渗培养基中生长良好 ,薄层层析法 (TLC)检测海藻糖实验说明转化株细胞经诱导后合成海藻糖 ,otsA基因的克隆和表达为赋予转基因植物抗高渗、耐干旱能力提供了实验依据和材料。 展开更多
关键词 otsa基因 海藻糖 PCR扩增 表达 大肠杆菌
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大肠杆菌otsA基因的克隆和转化本生烟草 被引量:2
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作者 陆玉建 张韩杰 刘南南 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期32-38,共7页
海藻糖是一类重要的渗透调节剂,可以提高植物抵抗多种非生物胁迫的能力。6-磷酸海藻糖合成酶(TPS)是海藻糖生物合成的关键酶,在大肠杆菌中,ots A基因编码TPS。本试验通过PCR技术克隆ots A基因,构建p2300-ots A-GFP表达载体,用农杆菌介... 海藻糖是一类重要的渗透调节剂,可以提高植物抵抗多种非生物胁迫的能力。6-磷酸海藻糖合成酶(TPS)是海藻糖生物合成的关键酶,在大肠杆菌中,ots A基因编码TPS。本试验通过PCR技术克隆ots A基因,构建p2300-ots A-GFP表达载体,用农杆菌介导的方法将ots A基因导入到本生烟草中。对筛选获得的转基因植株进行检测表明,ots A基因已成功整合到本生烟草的基因组中,并能进行有效转录。而且研究发现,转基因幼苗在含有150mmol/L Na Cl的培养基中能够生长,具有一定的抗盐胁迫能力。 展开更多
关键词 海藻糖 大肠杆菌 otsa基因 本生烟草 根癌农杆菌
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大肠杆菌otsAB融合基因表达载体的构建和转化小麦的初步研究
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作者 陆玉建 石东里 +3 位作者 张兰 田莎 张韩杰 刘南南 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第S1期1-7,共7页
在生物或非生物胁迫的条件下,小麦的产量和质量常会受到一定的影响。基因工程技术是小麦品质改良的有效手段,但目前小麦的转化效率还比较低。通过克隆大肠杆菌ots A和ots B基因,将目的基因和p2300-GFP相连,成功构建p2300-ots AB表达载... 在生物或非生物胁迫的条件下,小麦的产量和质量常会受到一定的影响。基因工程技术是小麦品质改良的有效手段,但目前小麦的转化效率还比较低。通过克隆大肠杆菌ots A和ots B基因,将目的基因和p2300-GFP相连,成功构建p2300-ots AB表达载体。以普通小麦品种为材料,在建立较完善再生体系的基础上,利用根癌农杆菌介导法进行转化,将ots AB导入到受体细胞,进而获得耐盐的转基因小麦新品种。遗传转化条件的优化结果表明,当农杆菌的OD600=0.5,侵染成熟胚或愈伤组织的时间为30 min,共培养时间为3 d,小麦的转化效率最高。结果可以为今后通过基因工程技术提高小麦的抗逆能力提供参考。 展开更多
关键词 小麦 otsa otsB 成熟胚 愈伤组织 农杆菌
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OsUgp2和otsAB基因共转化增强水稻抗旱抗寒能力 被引量:2
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作者 郑彦丽 穆虹 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期265-272,共8页
本研究通过农杆菌介导的转化技术,将水稻尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(OsUgp2)与大肠杆菌海藻糖-6-磷酸合成酶/海藻糖-6-磷酸合成酶磷脂酶融合基因(otsAB)共表达载体转化水稻愈伤组织,对获得的转基因植株分别进行干旱和寒冷处理,试... 本研究通过农杆菌介导的转化技术,将水稻尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(OsUgp2)与大肠杆菌海藻糖-6-磷酸合成酶/海藻糖-6-磷酸合成酶磷脂酶融合基因(otsAB)共表达载体转化水稻愈伤组织,对获得的转基因植株分别进行干旱和寒冷处理,试图明确OsUgp2和otsAB共表达是否可以进一步提高转基因水稻植株的抗胁迫能力。表型观察结果显示OsUgp2和otsAB共表达植株(ABU)经干旱和寒冷处理后恢复生长的能力,较otsAB和OsUgp2分别过量表达的转化植株(AB和U)均有所提高。定量PCR检测结果显示:经干旱处理后,转化植株ABU中otsAB和OsUgp2的表达量较未处理植株分别提高1.92倍和1.67倍,与转化植株AB和U中otsAB和OsUgp2表达的增加量相近;而寒冷处理后,转化植株ABU中otsAB和Os-Ugp2的表达量分别增加2.68倍和2.04倍,明显高于转化植株AB和U中otsAB和OsUgp2表达的增加量。液相色谱检测结果显示:OsUgp2和otsAB共表达和单表达均可以提高转化植株中海藻糖的生物合成量,且共转化植株ABU中海藻糖的含量在干旱和寒冷处理前后均是最高的。干旱和寒冷处理后,共转化植株ABU中蔗糖含量的增加也较明显。本研究结果表明OsUgp2和otsAB共表达可以增加转基因水稻植株中海藻糖和蔗糖分子的含量,同时转基因水稻植株的抗旱和耐冷胁迫的能力也得到了一定提高。 展开更多
关键词 水稻 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 OsUgp2 otsaB 共表达
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prd29A-otsAB表达载体的构建与转化本生烟草的研究
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作者 吴洪敏 朱秀左 +2 位作者 马龙雪 钮松召 陆玉建 《湖北农业科学》 2017年第11期2148-2152,共5页
分别以拟南芥(Arabidopsis thaliana)和大肠杆菌(Escherichia coli)的基因组DNA为模板,通过PCR技术克隆得到rd29A启动子、ots A和ots B基因,将其依次插入到p2300-gfp质粒中,从而构建p2300-prd29A-ots AB融合基因表达载体。利用农杆菌介... 分别以拟南芥(Arabidopsis thaliana)和大肠杆菌(Escherichia coli)的基因组DNA为模板,通过PCR技术克隆得到rd29A启动子、ots A和ots B基因,将其依次插入到p2300-gfp质粒中,从而构建p2300-prd29A-ots AB融合基因表达载体。利用农杆菌介导法将prd29A-ots AB融合基因导入到本生烟草(Nicotiana benthamiana)中,通过对转基因烟草进行筛选,初步获得具有卡那霉素抗性的转基因植株,为今后进一步研究相关基因的功能以及通过基因工程技术提高植物的抗胁迫能力奠定基础。 展开更多
关键词 海藻糖 prd29A otsa基因 otsB基因 本生烟草(Nicotiana benthamiana) 农杆菌
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大肠杆菌海藻糖合成酶基因对提高烟草抗逆性能的研究 被引量:30
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作者 戴秀玉 王忆琴 +1 位作者 杨波 周坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期427-431,共5页
编码大肠杆菌海藻糖合成酶的otsA基因由农杆菌介导引入野生型烟草植株并在花椰菜花叶病毒启动子序列 (CaMV35S)控制下获得表达。蒸发光散射高效液相层析法测定海藻糖实验表明 ,转基因烟草能够合成海藻糖 ,合成量达 1 4μg g叶片湿重 ;... 编码大肠杆菌海藻糖合成酶的otsA基因由农杆菌介导引入野生型烟草植株并在花椰菜花叶病毒启动子序列 (CaMV35S)控制下获得表达。蒸发光散射高效液相层析法测定海藻糖实验表明 ,转基因烟草能够合成海藻糖 ,合成量达 1 4μg g叶片湿重 ;转基因烟草表现为耐盐性生长、干燥失重缓慢等抗逆表型。说明海藻糖合成酶otsA基因的引入 ,改变了烟草的糖代谢途径 ,同时也提高了植物的耐盐碱、耐干旱特性。 展开更多
关键词 otsa基因 海藻糖 转基因烟草 抗逆性能
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农杆菌介导法将海藻糖合成酶基因转入芦荟的研究 被引量:5
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作者 陈杰 张佳星 +4 位作者 叶兴国 何聪芬 董银卯 赵华 秦允荣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期968-972,共5页
采用农杆菌介导法将海藻糖合成酶基因otsA导入芦荟,共培养后的芦荟外植体在含10-15 mg·L^-1G418筛选剂的MS培养基上经多次筛选和分化,获得了一定数量的抗性再生芽,对移栽成活的抗性再生植株进行PCR检测,表明otsA基因已经导入芦荟... 采用农杆菌介导法将海藻糖合成酶基因otsA导入芦荟,共培养后的芦荟外植体在含10-15 mg·L^-1G418筛选剂的MS培养基上经多次筛选和分化,获得了一定数量的抗性再生芽,对移栽成活的抗性再生植株进行PCR检测,表明otsA基因已经导入芦荟基因组中,转化率约为0.77%。Southern检测表明,目的基因在60%的阳性植株基因组中表现为单拷贝整合,进一步证明otsA基因已经整合到芦荟基因组中。气相色谱法测定转基因植株的海藻糖含量表明,转基因植株中的海藻糖含量为未转化植株的2.934倍,证明otsA基因在转基因芦荟植株中已得到表达。 展开更多
关键词 芦荟 农杆菌 海藻糖合成酶基因 分子检测
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基因枪介导转化芦荟获得转基因植株的研究 被引量:1
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作者 陈杰 叶兴国 +2 位作者 何聪芬 杜丽璞 董银卯 《西南农业学报》 CSCD 2005年第5期612-615,共4页
由于芦荟具有医疗、美容、保健、食用等多种功能,近年来成为研究热点.海藻糖对生物体及生物分子具有良好的非特异性保护作用,并已在食品、化妆品、分子生物学领域得到了广泛应用.将海藻糖合成酶基因转入芦荟,对于改良芦荟的商业价值有... 由于芦荟具有医疗、美容、保健、食用等多种功能,近年来成为研究热点.海藻糖对生物体及生物分子具有良好的非特异性保护作用,并已在食品、化妆品、分子生物学领域得到了广泛应用.将海藻糖合成酶基因转入芦荟,对于改良芦荟的商业价值有重要意义.目前为止,关于芦荟转化还没有报道.本实验将含有海藻糖合成酶otsA基因的pBI-otsA质粒与含有bar基因的pAHC25质粒混合包埋金粉子弹,利用基因枪介导的共转化法轰击预培养4~5 d的芦荟茎部外植体,经在含1.0~2.0 mg/ L glufosinate筛选剂的改良MS培养基上多次筛选和分化,获得了一定数量的抗性再生芽,对移栽成活的抗性再生植株进行了PCR检测.结果表明,otsA基因、nptII基因、bar基因已经整合到芦荟基因组中,首次获得了芦荟转基因植株. 展开更多
关键词 芦荟 基因枪 海藻糖合成酶基因 遗传转化 PCR检测
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Mg2+-Triggered and pH-Tuned in vitro Assembly of Trehalose-6-Phosphate Synthase
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作者 ZHANG Shanshan YANG Fan +4 位作者 ZHANG Yuping LIU Zaiman YU Linghui CHEN Ximing XIAO Jianxi 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS CSCD 2018年第5期396-402,共7页
The enzyme Ots A(trehalose-P synthase) plays a critical role in the biosynthesis of trehalose, which is a nonreducing disaccharide that plays important functions in many organisms. By using light scattering techniqu... The enzyme Ots A(trehalose-P synthase) plays a critical role in the biosynthesis of trehalose, which is a nonreducing disaccharide that plays important functions in many organisms. By using light scattering technique, we discovered that Ots A in Arthrobacter strain A3 polymerized in the presence of divalent metal ions(Mg2+ or Ca2+), and the kinetics of the assembly was dependent on their concentrations. We identified potential compounds that can affect the kinetics of the polymerization, particularly, heparin, which acts as a very promising inhibitor of the polymerization. The Ots A assembly turns out to be a very delicate process that is finely regulated by p H. Ots A may be in the polymerized form at physiological pH in vivo, suggesting a more complicated mechanism of the enzyme. These unique properties of Ots A provide novel insights into the molecular mechanism of the biosynthesis of trehalose. 展开更多
关键词 otsa(trehalose-P synthase) TREHALOSE POLYMERIZATION light scattering
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