大肠杆菌海藻糖合成酶基因的克隆和表达

利用Ｍｕ转座子细胞内克隆了大肠杆菌海藻糖合成酶 ｏｔｓＢＡ基因，克隆频率为１．４５ ｘ １０(－３)／ Ｋａｎ(ｒ)转导子。经遗传互补、酶切和部分序列分析表明ｏｔｓＢＡ基因位于克隆质粒。亚克隆 ２．８７ｋｂ ＤＮＡ片段至不同拷贝数表达质粒并分别转化大肠杆菌ｏｔｓＢＡ基因缺失株，转化株恢复 在０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ培养基上生长的功能，高渗透压诱导实验表明，转化株能够合成克隆基因 产物海藻糖，但合成量不受克隆质粒拷贝数影响。海藻糖良好的抗高渗能力可能在农作物育 种方面发挥重要作用。为构建含有海藻糖合成酶基因的植物表达载体，并在农杆菌的介导下 转入植物，赋予其抗高渗、耐干旱能力奠定了重要的研究基础。

合成海藻糖乳酸菌重组菌株的构建及其抗逆性评价

目的:构建表达载体pMG76e-OtsBA,合成重组菌,分析内源合成海藻糖对重组菌多重胁迫具有保护作用。方法:将OtsBA基因克隆与表达载体pMG76e酶切后连接转化,得到重组表达载体pMG76e-OtsBA,并通过Bio-Rad Gene Pulsor电穿孔法将重组质粒转入副干酪乳杆菌L14中,检测蛋白的表达后对其抗逆性进行评价。结果:成功构建了重组菌株,表达蛋白方面没有明显的差异。在抗逆性方面,重组菌株对热胁迫的耐受性在10min时相比提高62倍,对H2O2胁迫的耐受性在15min时提高3倍,渗透胁迫的耐受性在1h时提高1倍,对酸胁迫的耐受性没有显著提高,冷冻干燥处理后的对数期重组菌株存活率相比提高3倍。结论:成功获得重组菌株,內源合成海藻糖对于重组菌的多重胁迫整体具有保护作用。