丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法以四甲基偶氮唑蓝(M TT)法测定TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖抑制;流式细胞仪检测细胞周期。结果TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的生长具有抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强。实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少。4.0mg/L TanⅡA作用0、24、48、72h后的凋亡率分别为4.52%、19.7%、25.3%、40.4%,随时间的延长而凋亡细胞增多。结论TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,且其作用呈时间-剂量依赖性。

miR-574-3p通过下调CBX2增强了卵巢癌A2780细胞对紫杉醇的敏感性

目的探讨miR-574-3p通过染色体盒同源物2(chromobox homolog 2,CBX2)调控卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性的影响。方法采用RT-qPCR方法检测miR-574-3p在正常卵巢上皮IOSE386和IOSE397细胞以及卵巢癌A2780细胞和紫杉醇耐药A2780/Tax细胞中的表达水平。CCK-8检测A2780/Tax细胞增殖活力;Transwell实验检测A2780/Tax细胞侵袭情况;双荧光素酶报告基因验证miR-574-3p与CBX2的调控关系;Western blot检测CBX2蛋白的表达。结果miR-574-3p在A2780细胞和A2780/Tax细胞中低表达,且在紫杉醇耐药A2780/Tax细胞中表达最低。过表达miR-574-3p可显著抑制A2780/Tax细胞增殖和侵袭。双荧光素酶报告基因结果证实miR-574-3p靶向下调CBX2的表达水平。证实过表达miR-574-3p通过下调CBX2抑制A2780/Tax细胞增殖和侵袭。结论miR-574-3p靶向下调CBX2增强了A2780细胞对紫杉醇的敏感性。

下调Beclin1抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探究敲减Beclin1表达对卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法:以Western blotting及qPCR检测卵巢癌细胞株A2780及耐药细胞株A2780/DDP中Beclin1的表达情况;A2780/DDP细胞转染Beclin1 siRNA后,用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化,克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡,MDC荧光染色检测细胞的自噬情况,Western blotting检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果:顺铂耐药细胞株A2780/DDP中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780细胞株(均P<0.05),在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。敲减Beclin1表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP细胞的凋亡(P<0.05)、抑制细胞自噬的发生(P<0.05)、减少细胞克隆形成(P<0.05)和增加细胞对顺铂的敏感性(P<0.05);Western blotting结果显示,敲减Beclin1可上调A2780/DDP细胞中cleaved-caspase 3和Cathepsin B的蛋白水平,下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平(均P<0.05)。结论:敲减Beclin1表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能,从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。

CD59 RNAi逆转录病毒载体转染卵巢癌细胞株A2780的构建

目的获得携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780。方法设计能转录产生靶向CD59小发夹RNA(sh RNA)转染逆转录病毒载体p SUPER retro neo+gfp质粒,构建p SUPER-si CD59重组质粒,将重组质粒导入卵巢癌细胞株A2780内。鉴定转染后细胞株能形成稳定的扩增。结果重组质粒经PCR凝胶电泳、核苷酸测序证实与设计序列一致;重组质粒转染卵巢癌细胞株A2780,可稳定表达绿色荧光蛋白。结论携带针对人CD59基因p SUPER retro RNAi逆转录病毒载体的卵巢癌细胞株A2780的建立为深入进行肿瘤细胞研究奠定了基础。

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制,为临床化疗提供有效的依据。方法:①通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中,分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异,并筛选出高表达基因和低表达基因;使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。②利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。③利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。④利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:①两组数据集的高表达共同耐药基因共37个,低表达共同耐药基因共2个。②GO分析结果显示:生物学过程(BP)分析结果表明,耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等;细胞组成(CC)分析表明,耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面;分子功能(MF)分析表明,耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示,耐药基因主要在细胞因子与细胞因子受体相互作用的信号通路、趋化因子信号通路上发挥作用。③PPI网络及Hub基因筛选结果显示:CCR5、POSTN、LOX、DACT1、RTN1、CCR1、CXCL6、PITX2、SNCA、AREG是核心耐药基因。④Hub基因中POSTN、LOX、DACT1、RTN1、PITX2的高表达与卵巢癌的不良预后有关(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株A2780中顺铂耐药基因的异常表达,在卵巢癌化疗耐药中发挥着重要的作用,需要进一步的体外实验研究来证实其在临床化疗耐药中的作用。

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780细胞的恶性生物学行为

目的:探讨mi R-141-3p通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:收集2014年4月至2017年10月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用q PCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI双染流式术检测卵巢癌A2780细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测mi R-141-3p对PTEN-PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:miR-141-3p在卵巢癌组织和细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p靶向作用于PTEN并下调其表达水平(P<0.01)。与对照组相比,敲降miR-141-3p后A2780细胞的增殖受到显著抑制(48 h时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05)、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数(45.14±7.88)vs(215.32±16.04)个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[(9.29±0.65)%vs(1.85±0.26)%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780细胞中p-Akt的表达(均P<0.01)、抑制细胞增殖和侵袭能力(均P<0.01)而明显促进细胞凋亡(均P<0.01),在过表达PTEN的同时过表达mi R-141-3p或添加IGF-1后可逆转上述的变化。结论:miR-141-3p能够促进A2780细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。

OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长作用的研究

目的研究卵巢癌特异性结合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP)与顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)偶联物(OSTP-DDP)对卵巢癌A2780细胞的靶向抑制作用。方法化学合成OSTP-DDP,体外培养卵巢癌A2780细胞,采用CCK-8法分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用;通过Annexin V-FITC凋亡试剂盒分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡作用。结果通过质谱分析和高效液相色谱(HPLC)分析,提示成功合成OSTP-DDP。CCK-8法检测显示,OSTP-DDP与DDP分别以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^(-1))处理卵巢癌A2780细胞24、48、72 h后,均可对该细胞的生长起到抑制作用,且呈时间、浓度依赖性。且OSTP-DDP的作用强于DDP(P<0.05),提示OSTP-DDP具有靶向抑制细胞生长作用。流式细胞术检测结果显示,经OSTP-DDP和DDP处理后,细胞周期均被阻滞于G_1期,作用72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的周期抑制作用强于DDP,差异具有统计学意义(P<0.05)。作用24、48、72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞凋亡的作用强于DDP(P<0.01)差异具有统计学意义,提示OSTP-DDP具有较强的靶向诱导细胞凋亡作用。结论 OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长具有靶向抑制作用,OSTP作为化疗药物靶向载体治疗卵巢癌有良好的应用前景。

LncRNA LINC01138靶向miR-193a-3p对卵巢癌A2780细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC01138(LncRNA LINC01138)通过吸附微小RNA-193a-3p(miR-193a-3p)调控其表达,对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR法检测40例卵巢癌及相应癌旁正常卵巢组织、正常卵巢上皮细胞(HOSE)及3种卵巢癌细胞(A2780、SKOV3、OVCR3)中LINC01138与miR-193a-3p的表达水平。分别将si-con、si-LINC01138、si-LINC01138与anti-miR-con、si-LINC01138与anti-miR-193a-3p转染至A2780细胞,转染后48 h采用MTT法、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力,Annexin V-FITC/PI染色后采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与癌旁正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中LINC01138的表达升高,miR-193a-3p的表达降低(P<0.001);与正常卵巢上皮细胞HOSE比较,卵巢癌细胞A2780、SKOV3、OVCR3中LINC01138的表达升高,miR-193a-3p的表达降低(P<0.05),其中LINC01138在卵巢癌A2780细胞中的表达相对较高,选用卵巢癌A2780细胞进行后续实验。与si-con组比较,si-LINC01138组细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);与si-LINC01138+anti-miR-con组比较,si-LINC01138+anti-miR-193a-3p组细胞活力增强,迁移及侵袭细胞数增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:抑制LINC01138可通过上调miR-193a-3p的表达进而减弱卵巢癌A2780细胞增殖、迁移、侵袭能力,诱导细胞凋亡。

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。

丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法用不同浓度丹参酮ⅡA作用于卵巢癌A2780细胞24 h,CCK-8法测定不同浓度丹参酮ⅡA对A2780细胞增殖的影响,计算其IC_(50)值;依据IC_(50)值将卵巢癌A2780细胞分为4个组:0 mg/L组(即对照组)、0.3 mg/L组、0.6 mg/L组、1.2 mg/L组;应用划痕实验检测丹参酮ⅡA对A2780细胞迁移能力影响;Western Blot实验检测丹参酮ⅡA对A2780细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)表达的影响。结果CCK-8实验结果显示,丹参酮ⅡA能够抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,且抑制作用呈现浓度依懒性,其IC_(50)值为(2.97±0.09)mg/L;划痕结果显示,与对照组相比,丹参酮ⅡA能够抑制卵巢癌A2780细胞的迁移能力,呈剂量依赖性关系;Western Blot结果显示,丹参酮ⅡA可抑制Bcl-2蛋白表达,增强Bax蛋白表达,且Bax/Bcl-2比值增高,自噬相关蛋白Beclin-1表达增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增高。结论丹参酮ⅡA可抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移及促进细胞凋亡和自噬的发生。

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对卵巢癌A2780/DDP细胞生物学活性影响及其机制研究

目的探讨超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对卵巢癌A2780/DDP细胞生物学活性影响,并进行机制研究。方法将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为A组(空白对照)、B组(微泡造影剂+超声辐照)、C组(miR-520c-3p mimics+miR-132 negative control+微泡造影剂+超声辐照)、D组(miR-132 mimics+miR-520c-3p negative control+微泡造影剂+超声辐照)、E组(miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照),48h后收集细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-520c-3p、miR-132表达水平以及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)信使核糖核酸(mRNA)相对表达量,蛋白免疫印迹法测定GPC3和Hippo信号通路蛋白相对表达量。MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果与A组和B组比较,C组和E组miR-520c-3p表达水平显著上调,D组和E组miR-132表达水平显著上调(P<0.05);与A组和B组比较,C组、D组和E组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加,穿膜细胞数和Yes相关蛋白(YAP)和TAZ蛋白相对表达量显著减少,其中E组变化最明显(P<0.05);与A组和B组比较,C组和E组GPC3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。结论超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡可显著抑制卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和迁移,并诱导其凋亡,作用机制可能与调节GPC3蛋白表达和Hippo-YAP/TAZ通路传导有关。

桥接整合因子1在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探讨桥接整合因子1(BIN1)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及其临床意义,以及BIN1对EOC细胞A2780增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2017年7月至2018年1月河北医科大学第四医院手术切除的67例EOC患者的肿瘤组织及同期因其他妇科疾病手术切除的30例非肿瘤患者的卵巢组织(正常对照组)标本。用免疫组织化学染色法检测EOC组织和非肿瘤卵巢组织中BIN1蛋白的表达水平,χ;检验分析BIN1表达与患者临床病理特征之间的关联,Kaplan-Meier法分析BIN1表达与患者的无病生存期(DFS)和总生存期(OS)之间的关系。用qPCR和WB法检测EOC细胞SKOV3、A2780和人卵巢上皮细胞IOSE80中BIN1 m RNA和蛋白的表达水平。利用基因转染技术将BIN1质粒CMV-MCS-GFP-SV40-NeomycinBIN1和空载体质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin分别转染到A2780细胞以构建过表达BIN1细胞及其对照,用qPCR和WB法分别检测转染细胞中BIN1 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8、划痕愈合和Transwell实验分别检测过表达BIN1对A2780细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:EOC组织中BIN1阳性表达率显著低于正常卵巢组织(P<0.01)。BIN1表达与EOC患者较晚的术后病理分期、较差的组织学分级、淋巴结转移及腹膜转移存在正向关联(均P<0.05);BIN1低表达组患者的DFS和OS均短于BIN1高表达组患者(均P<0.05)。SKOV3和A2780细胞中BIN1 mRNA和蛋白的表达水平均显著低于IOSE80细胞(均P<0.01);过表达BIN1显著抑制A2780细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。结论:BIN1在EOC组织和细胞中呈低表达状态,与患者的不良预后有关;过表达BIN1可降低EOC细胞A2780的增殖、迁移和侵袭能力。

ATP-生物荧光法在筛选卵巢癌化疗药物中的应用

为了探讨ATP -生物荧光法在临床体外化疗药敏试验中应用的可行性 ,本文以卵巢癌细胞株A2 780为实验模型 ,建立稳定和适宜的实验条件 ,并对卵巢癌临床化疗药物体外筛选进行了初步研究。结果表明该方法稳定性好 ,能检测出不同药物浓度对细胞作用的剂量 -效应关系 ,最小检出细胞数为 4 0个 ,实验变异系数小于 8.2 % (0 .2 % - 8.2 % ) ,预测准确率高 (90 .6 % )。ATP -生物荧光法稳定性、重复性和敏感性均较好 。

基于开放数据的卵巢癌细胞铂类耐药机制分析和治疗药物选择研究

目的探索卵巢癌细胞系耐药基因表达改变及其生物学机制,为卵巢癌细胞系铂类耐药成因及治疗提供生物信息学依据。方法从基因表达数据库(GEO)下载A2780耐铂类化疗和原始细胞株相关基因芯片数据集并分组,应用R软件筛选差异表达基因,使用clusterProfiler R包对差异基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析和可视化,找出相关高度表达的基因通路。通过STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白互作网络,分析网络的hub基因。通过Cytoscape软件构建蛋白互作网络并分析生物过程。利用CMap网站,通过差异基因在细胞株内导致的药物反应区别,识别与耐药相关的药物。结果卵巢癌铂类耐药的形成在基因表达层面的关键变化基因数量较少,不同研究芯片同样高表达的基因仅有32个,低表达的基因仅有126个,细胞外基质信号通路和MAPK信号通路相关基因表达升高,外泌体分泌相关蛋白增加,胆固醇储存的正向调控过程增强,生长板软骨细胞分化,单核细胞分化等生物学过程增强,说明卵巢癌细胞耐铂类机制可以沿着上述2个机制探索。而Cycloheximide、Emetine、Cephaeline、Homoharringtonin、Verrucarin-A、Puromycin等6种药物可以在铂类耐药的生物学研究中有所侧重。结论本研究对人卵巢癌细胞铂类耐药成因及治疗进行了探索及分析,对人卵巢癌细胞铂类耐药的进一步研究提供了生物信息学理论依据。

人卵巢癌耐药细胞株的放射敏感性研究

为了研究具有耐药性的卵巢癌细胞系对放射线治疗的影响,以人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/Taxol为研究对象,以MTT法检测细胞的药物敏感性并评判分析细胞放射敏感性;克隆形成实验分析细胞放射抗拒性;实时荧光定量PCR分析照射前后细胞耐药基因MDR1的变化。实验结果显示:A2780/Taxol的耐药指数为43.96;随着放射剂量增大,A2780细胞和A2780/Taxol细胞的相对存活率明显下降,以A2780细胞明显(p<0.05);A2780细胞及其耐药A2780/Taxol细胞D0值分别为4.90和6.06,D0越大,放射抗拒性越强,表明耐药A2780/Taxol细胞的放射抗性强于A2780细胞(p<0.01);照射前及不同剂量照射作用后,耐药基因MDR1在A2780/Taxol细胞中的表达均明显高于A2780细胞(p=0.000)。这些结果揭示耐药卵巢癌细胞株A2780/Taxol对辐射具有耐受性,表明卵巢癌细胞系具有放化疗交叉耐受性,并且射线和药物诱导卵巢癌细胞耐药基因MDR1的过表达,可能是引起放化疗交叉耐受性的原因之一。

卵巢癌特异性结合肽OSTP的鉴定

目的验证卵巢癌特异性结合肽(OSTP)对卵巢癌A2780细胞的特异性结合作用。方法合成OSTP并标记荧光素5-FAM。将培养的卵巢癌A2780细胞及对照组胃癌SGC7901细胞、骨肉瘤MG63细胞分别加5-FAM-OSTP孵育,荧光显微镜下观察拍照。构建卵巢癌A2780细胞荷瘤小鼠模型,尾静脉注入5-FAM-OSTP,循环1 h后进行左心室灌注,取肿瘤组织及各脏器组织,行冰冻切片,荧光显微镜下观察拍照。结果成功合成和标记5-FAM-OSTP。荧光显微镜观察显示:5-FAM-OSTP孵育后的卵巢癌A2780细胞产生明亮的黄绿色荧光,而对照组SGC7901、MG63细胞不产生荧光。裸鼠体内实验结果显示:肿瘤组织可见强荧光信号,平均荧光强度为17.656±1.980;肝组织平均荧光强度4.277±0.291;肾组织平均荧光强度4.422±0.767;其他脏器均无可见荧光信号。肿瘤组织与肝、肾组织的荧光强度间差异有显著性(P<0.05)。结论通过体内外实验证实了5-FAM-OSTP对卵巢癌A2780细胞具有特异结合作用,有望成为卵巢癌靶向化疗药物的导向肽。

BKM120对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究BKM120对卵巢癌A2780细胞和紫杉醇耐药卵巢癌A2780/Taxol细胞的抑制作用。方法采用MTT法检测A2780和A2780/Taxol细胞存活情况,设溶剂对照组和实验(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组(BKM120浓度分别为0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0μmol/L)。PI单染检测细胞周期的分布情况;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平,设阳性对照组[顺铂(DDP)组,10μmol/L]、溶剂对照组和实验A,B,C,D组(BKM120浓度分别为0,0.3,1.0,3.0,10.0μmol/L)。结果与溶剂对照组比较,实验(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)组A2780和A2780/Taxol细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01或P<0.05);BKM120对A2780和A2780/Taxol细胞半数抑制浓度分别为(2.25±0.13)μmol/L和(4.17±0.43)μmol/L。与溶剂对照组比较,实验C,D组G2期A2780和A2780/Taxol细胞显著增多(P<0.01或P<0.05);DDP组和实验A,B,C,D组A2780和A2780/Taxol凋亡细胞显著增多(P<0.01或P<0.05);实验C组、D组A2780和A2780/Taxol细胞Bcl-2、Pro-caspase 3、P-gp蛋白表达水平和PAkt/Akt显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论BKM120可降低紫杉醇耐药卵巢癌A2780/Taxol细胞的存活率,其机制可能与抑制A2780和A2780/Taxol细胞的增殖,下调P-Akt及P-gp蛋白表达水平诱导细胞凋亡有关。

丹皮酚通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制人卵巢癌A2780细胞增殖的实验研究

目的探讨丹皮酚对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制及诱导凋亡作用,揭示Wnt/β-catenin信号转导通路分子机制。方法对数生长期人卵巢癌A2780细胞分为对照组(0mmol/L丹皮酚)和0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组,采用CCK-8法检测丹皮酚作用24、48、72h时人卵巢癌A2780细胞增殖活性;丹皮酚作用48h后,应用流式细胞仪检测人卵巢癌A2780细胞周期,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、β-catenin和c-Myc蛋白表达水平;丹皮酚作用0、24、48h,采用划痕实验检测人卵巢癌A2780细胞迁移能力。结果丹皮酚作用24、48、72h,人卵巢癌A2780细胞增殖活性在对照组为(100.00±3.28)%、(100.00±2.34)%、(100.00±2.89)%,在0.4 mmol/L丹皮酚组为(93.26±4.21)%、(80.23±5.43)%、(72.04±4.89)%,在0.8mmol/L丹皮酚组为(81.25±3.13)%、(71.65±4.78)%、(62.32±4.39)%,在1.6mmol/L丹皮酚组为(60.85±2.35)%、(45.89±5.34)%、(35.74±3.19)%,除0.4mmol/L丹皮酚组作用24h外,0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组不同作用时间人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于对照组(P<0.05),0.8 mmol/L丹皮酚组作用24h,1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.4 mmol/L丹皮酚组(P<0.05),1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.8 mmol/L丹皮酚组(P<0.05),0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组作用72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性低于24h(P<0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组G1期细胞比例(73.08%,68.46%、52.95%)低于对照组(78.30%),S期细胞比例(19.61%、26.11%、39.05%)高于对照组(17.48%)(P<0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组Bax蛋白表达明显高于对照组,0.8、1.6mmol/L组Bcl-2、β-catenin和c-Myc蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);划痕实验结果表明,细胞迁移能力随丹皮酚浓度增加和作用时间延长明显下降(P<0.05)。结论丹皮酚可抑制人卵巢癌A2780细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

KDM2A对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780增殖和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨赖氨酸脱甲基酶2A(Lysine-specific demethylase 2A,KDM2A)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人卵巢癌细胞A2780细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法:通过构建慢病毒载体转染A2780/DDP,分为A2780、A2780/DDP、A2780/DDP/KDM2A(转染KDM2A)、A2780/DDP/Jagged1(转染Jagged1)以及A2780/DDP/NC(转染病毒载体)组。采用Western blot检测3组KDM2A、Jagged1、Bcl2和BAX蛋白表达,CCK8和平板克隆形成实验检测细胞对顺铂的敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:A2780/DDP细胞KDM2A和Jagged1的蛋白表达水平均显著高于A2780细胞(P<0.05),且A2780/DDP/KDM2A细胞中KDM2A和Jagged1的蛋白表达均低于A2780/DDP以及阴性对照组A2780/DDP/NC(P<0.05);A2780/DDP/Jagged1细胞的Jagged1蛋白表达低于A2780/DDP以及A2780/DDP/NC(P<0.05),而其KDM2A蛋白的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度DDP处理的A2780/DDP/KDM2A细胞的生长抑制率均显著高于A2780/DDP/NC和A2780/DDP细胞(P<0.05),A2780/DDP/KDM2A细胞克隆形成数量亦明显高于A2780/DDP/NC和A2780/DDP细胞(P<0.05)。A2780/DDP/KDM2A细胞凋亡率为(25.84±3.27)%,明显高于A2780/DDP细胞[(14.29±1.96)%](P<0.05)和A2780/DDP/NC细胞[(12.46±2.15)%](P<0.05)。A2780/DDP/KDM2A细胞中Bcl-2蛋白表达明显低于A2780/DDP细胞(P<0.05),而A2780/DDP/KDM2A细胞Bax的表达水平却高于A2780/DDP细胞(P<0.05)。结论:KDM2A可能通过上调Jagged1的表达,促进人卵巢癌细胞A2780的增殖并抑制其凋亡,进而降低人卵巢癌耐药细胞A2780的顺铂敏感性。

积雪草诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡机制研究

目的:观察积雪草对人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响并探讨相关机制。方法:用10μmol·L^(-1)、25μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)的积雪草处理人卵巢癌细胞A2780 24 h,用MTT法检测细胞活性;用流式细胞术检测卵巢癌细胞A2780凋亡;用qRT-PCR检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2 mRNA的表达;用western blot法检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)的积雪草作用于细胞后,乳腺癌细胞A2780细胞形态发生明显改变,细胞皱缩、变圆。与对照组比较,75μmol·L^(-1)积雪草对卵巢癌细胞A2780抑制效果最明显。与对照组比较,50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)积雪草能够有效升高Bcl-2 mRNA的表达,降低Bax mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度积雪草均能有效升高Bax的表达并降低Bcl-2的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:积雪草可抑制肿瘤的生长,其作用可能是通过诱导卵巢癌细胞A2780凋亡来实现的。