血清sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1在非小细胞肺癌患者中的表达及相关性分析

目的探讨血清可溶性MHC-I类链相关蛋白A(sMICA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与病理分型的相关性。方法2020年7月至2022年8月诊治的86例NSCLC患者作为研究对象,并设立为观察组,同期选取43例健康体检者设立为对照组;并根据不同病理分型将观察组分为腺癌组(n=33)和鳞癌组(n=53),对比血清sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1;并采用Logistic回归模型分析sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1对非小细胞肺癌的影响;采用ROC曲线模型分析sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1诊断非小细胞肺癌的AUC、敏感度及特异度。结果观察组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1均高于对照组(P<0.05)。腺癌组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1均高于鳞癌组(P<0.05)。二元Logistic回归模型分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1高表达会对非小细胞肺癌的发生产生影响(P<0.05)。ROC曲线分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1及四项联合诊断NSCLC的AUC值分别为(0.750、0.654、0.819、0.788、0.843,P均<0.05),敏感度分别为57.00%、46.50%、67.40%、90.70%、79.10%;特异度分别为93.00%、93.00%、88.40%、58.10%、86.00%。结论sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1在NSCLC患者中呈高表达趋势,其表达水平会随病理分型而升高。

胃癌组织中MCP-1、MMP-9的表达与间质中TAMs浸润的关系

目的检测胃癌组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,分析它们与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润的关系及对胃癌生物学行为的影响。方法采用免疫组化SP法检测50例胃癌组织中MCP-1、MMP-9的表达及TAMs计数,以20例胃炎作对照组。结果(1)MCP-1在胃癌组织中的阳性率为(53.27±30.98)%,高于对照组的(16.21±7.64)%,两者差异有统计学意义(P<0.01);MCP-1与胃癌的淋巴结转移有关(P<0.05),与分化及分型均无关。(2)胃癌中MMP-9表达的阳性率为(37.64±24.88)%,高于对照组的(16.96±12.88)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9与胃癌的分化、分型和转移均相关(P<0.05)。(3)TAMs在胃癌组织中的计数为16.94±5.98,高于对照组的6.72±3.41,两者差异有统计学意义(P<0.01);在胃癌组织中TAMs计数与胃癌的组织学分型及分化无关(P>0.05),但有淋巴结转移组的TAMs计数明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论MCP-1与TAMs之间可能具有协同作用,共同促进肿瘤的生长和转移;TAMs有可能通过上调肿瘤细胞MMP-9表达,促进肿瘤的侵袭和转移。

抑制MTAl对雌二醇调控ER阳性乳腺癌细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的：观察转移相关蛋白1（ Metastasis associated protein 1，MTA1）在雌激素调控雌激素受体（Estrogen Recepto，ER）阳性乳腺癌细胞基质金属蛋白酶－9（Matrix metalloproteinase －9，MMP－9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子（ Tissue inhibitor of metalprotease －1，TIMP－1）中的可能作用。方法采用慢病毒转染MTA1－shRNA的方法建立特异性抑制MTA1表达的MCF－7模式细胞株。采用10 nM雌二醇（17β－estradiol，E2）处理细胞48 h，Real－time PCR、Western blot分别检测MMP－9、TIMP－1 mRNA与蛋白表达。结果 MTA1－shRNA最大抑制效率为84．9％，提示成功建立了抑制MTA1表达的MCF－7模式细胞株（MCF－7MTA1－shRNA）。 MCF－7野生株（MCF－7WT）在E2处理后MMP－9 mRNA和蛋白表达水平分别上升了46％（P＜0．05）和37％（P＜0．05），TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平分别降低了32．3％（P＜0．05）和18．2％（P＜0．05）；相对MCF－7WT，MCF－7MTA1－shRNA MMP－9 mRNA和蛋白表达水平分别降低了42．9％（P＜0．05）和36．7％（P＜0．05），TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平未见显著变化；采用E2处理MCF－7MTA1－shRNA后，MMP－9 mRNA和蛋白表达水平未见明显变化，TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平分别降低了25．4％（P＜0．05）和32．2％（P＜0．05）。结论 MTA1在雌激素上调ER阳性乳腺癌细胞MMP－9表达的信号转导通路中可能发挥重要作用，但未参与雌激素调控ER阳性乳腺癌细胞TIMP－1表达的信号转导通路。

HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达及临床意义

目的:研究造血细胞特异蛋白1相关蛋白X1(haematopoietic lineage cell specific protein 1-associated protein X-1, HAX-1)和基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7, MMP-7)在大肠癌中的表达情况及与临床病理特征和预后的关系。方法:应用免疫组化法检测99例经手术切除的大肠癌标本和38例正常肠黏膜组织中HAX-1和MMP-7的表达,观察HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达情况及与临床病理特征和预后的关系,分析两者在大肠癌组织中表达的相关性。结果:大肠癌组织中HAX-1和MMP-7的阳性表达率分别为81.82%和53.54%,与正常黏膜组织比较差异有统计学意义(P<0.05)。HAX-1表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度相关(P<0.05),MMP-7与肿瘤分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。HAX-1和MMP-7在大肠癌组织中的表达呈正相关。HAX-1及MMP-7的表达与大肠癌患者的预后密切相关。结论:HAX-1及MMP-7在大肠癌中均高表达,在大肠癌的发病过程中它们的高表达具有协同效应,与大肠癌淋巴结转移、临床分期及预后密切相关,并可作为判断大肠癌患者预后的重要指标之一。

细胞因子对人冠脉平滑肌细胞PAPP-A、MMP-3、TIMP-1基因表达的影响

目的探讨细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6对人冠脉平滑肌细胞中妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法应用相同浓度IL-1β(20μg/L)、IL-6(10μg/L)各自刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养0、2、4、8、24、36h后收集细胞。应用不同浓度IL-1β(0、5、20、40μg/L)、IL-6(0、5、10、50μg/L)刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6h后收集细胞。应用实时定量PCR的方法检测细胞内PAPP-A、MMP-3、TIMP-1基因表达量。结果同剂量IL-1β刺激下,MMP-3和PAPP-A基因表达量在2 h时开始发生上调,8 h左右达高峰,而后开始下降;而TIMP-1表达量在2h时开始发生下降,8h左右达最低,而后开始上升。在不同剂量IL-1β刺激下,MMP-3、PAPP-A基因表达量随着剂量加大呈上升趋势(MMP-3:r=0.907,P=0.000;PAPP-A:r=0.972,P=0.000),TIMP-1呈下降趋势(r=-0.768,P=0.004)。不同剂量组MMP-3、TIMP-1、PAPP-A表达量具有显著性差异(MMP-3:F=24.047,P=0.000;TIMP-1:F=33.737,P=0.000;PAPP-A:F=264.699,P=0.000)。MMP-3在20μg/L和40μg/L组间没有显著性差异(P=0.154);TIMP-1仅40μg/L组和其他组间具有显著性差异,其余组间无显著性差异(P=0.383);PAPP-A在各组间均有显著性差异。在同剂量IL-6的刺激下,MMP-3、PAPP-A表达量随时间变化趋势和IL-1β相似,而TIMP-1则在4 h时就达到最低,随后开始上升。在不同剂量IL-6刺激下,MMP-3、PAPP-A亦有随剂量加大表达量上升趋势(MMP-3:r=0.919,P=0.000;PAPP-A:r=0.941,P=0.000),TIMP-1呈下降趋势(r=-0.799,P=0.002)。不同剂量组MMP-3、TIMP-1、PAPP-A表达量均有显著性差异(MMP-3:F=14.081,P=0.001;TIMP-1:F=5.727,P=0.022;PAPP-A:F=25.128,P=0.000)。MMP-3在5μg/L和10μg/L组间没有显著性差异(P=0.292);TIMP-1对照组与10μg/L和50μg/L组间具有显著性差异,其余各组间没有显著性差异(P=0.253);PAPP-A基因表达量在5μg/L和10μg/L组没有显著性差异(P=0.065)。结论炎症因子IL-1β、IL-6对冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物PAPP-A、MMP-3、TIMP-1表达的影响,可能是炎症在急性冠脉综合征发生发展中作用机制之一。

基于KIM-1等肾损伤标志物探讨苗药痛风停汤对尿酸性肾病的保护作用

目的通过构建尿酸性肾病动物模型,检测给药后KIM-1、NGAL、TIMP-1、MCP-1等肾损伤标志物,探讨苗药痛风停汤对尿酸性肾病的保护作用。方法将70只SD大鼠随机分为空白组、模型组、苗药痛风停高、中、低剂量组、别嘌醇组和苯溴马隆组,构建尿酸性肾病动物模型,造模后各组灌胃给药治疗28天,末次给药后收集大鼠血清及肾脏标本。生化检测大鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐含量,用免疫组化法、Western Blot检测肾组织的KIM-1、NGAL、TIMP-1的表达、RT-PCR法检测肾脏组织KIM-1、MCP-1mRNA的表达。结果生化结果:别嘌醇、高剂量、中剂量、苯溴马隆组组间比较,其BUN、SCR、UA含量差异无统计学差异(P>0.05)。免疫组化结果:(1)痛风停高、中、低剂量、别嘌醇组KIM-1平均光密度比苯溴马隆组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);(2)痛风停高、中剂量、别嘌醇组NGAL、TIMP-1平均光密度与苯溴马隆组相比,无明显差异(P>0.05)。RT-PCR结果与别嘌醇及苯溴马隆组相比,痛风停高剂量组KIM-1、MCP-1mRNA表达量与其无明显差异(P>0.05)。Western Blot结果(1)与别嘌醇组相比,痛风停高剂量组KIM-1、NGAL、TIMP-1蛋白表达均与其无明显差异(P>0.05);(2)与苯溴马隆组对比,痛风停高剂量组NGAL蛋白表达与其无明显差异(P>0.05);其余各组KIM-1、NGAL、TIMP-1蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苗药痛风停汤可显著降低尿酸性肾病大鼠血肌酐、尿素氮及尿酸水平,并可通过降低肾损伤因子KIM-1、NGAL、TIMP-1、MCP-1的表达,从而实现保护肾脏功能作用。

干预肝细胞氧化应激感受器Keap1对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及其活性调节的影响

目的:建立稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1)的模型,探讨稳定下调Keap1的缺氧肝细胞对小鼠肝星状细胞(HSCs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性及其调控分子基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)、MMP-14、小窝蛋白-1(Cav-1)的影响。方法:根据本组建立的方法,构建Keap1下调的稳转肝细胞株,缺氧条件下培养Keap1下调的肝细胞,通过蛋白质印迹法和QPCR验证肝细胞中Keap1mRNA是否下调以及其下游分子和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。利用上述肝细胞培养上清液干预小鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分别收集小鼠HSC-T6细胞培养上清液和细胞,通过蛋白质印迹法检测小鼠HSC-T6细胞的Keap1、抗氧化应激分子核因子E2相关因子2(Nrf2)、MMP-2等蛋白表达,明胶酶谱法检测小鼠HSC-T6细胞培养液上清中MMP-2活性。结果:稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Keap 1后,Nrf2表达增高,肿瘤坏死因-α(TNF-α)表达减少。与对照组相比,敲低Keap1的肝细胞培养液上清使小鼠HSC-T6细胞的MMP-2、Cav-1、MT1-MMP、TIMP-2蛋白表达减少而MMP-2的活性增高。结论:缺氧条件培养稳定敲低Keap1的肝细胞,肝细胞损伤程度减轻,合成及释放TNF-α减少。肝细胞培养上清液对HSC-T6细胞内吞相关分子Cav-1表达的刺激作用降低,减轻了Cav-1对膜表面的MMP-2活化的干扰,使MMP-2活性得以升高。

强心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织OMA1、OPA1表达及线粒体形态的影响

目的探讨强心汤治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金属蛋白酶相关蛋白1(OMA1)封闭组、强心汤组、OMA1封闭+强心汤组,每组10只。除假手术组外其余各组大鼠采用结扎左冠状动脉前降支建立慢性心力衰竭大鼠模型,OMA1封闭组和OMA1封闭+强心汤组在建立模型前第1和第7天各尾静脉注射2×10^(10)pfu OMA1干扰腺病毒对大鼠OMA1表达封闭。自建模成功后第2天开始,强心汤组、OMA1封闭+强心汤组给予强心汤混悬液每次1.62g/kg灌胃,每天2次;其余各组给予2ml生理盐水灌胃,每天2次。各组均灌胃14天后检测心功能,包括左室舒张末期内径(LVDD)、左室收缩末期内径(LVDS)、射血分数(EF);采用RT-PCR和免疫组化检测各组大鼠心肌组织OMA1、视神经萎缩蛋白1(OPA1)mRNA表达及OMA1、OPA1、长链形式视神经萎缩蛋白1(L-OPA1)、短链形式视神经萎缩蛋白1(S-OPA1)蛋白表达,同时通过透射电镜观察各组大鼠心肌组织线粒体形态。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVDD、LVDS升高,EF降低,心肌组织OMA1 mRNA和OMA1、S-OPA1蛋白表达升高,OPA1 mRNA和OPA1、L-OPA1蛋白表达降低(P<0.05),线粒体呈重度肿胀,大多线粒体板呈不规则形、膜内基质变淡,嵴断裂、消失。与模型组比较,各干预组大鼠上述各指标均明显改善,且OMA1封闭+强心汤组改善程度优于OMA1封闭组和强心汤组,OMA1封闭组改善程度优于强心汤组(P<0.05)。结论强心汤可能通过抑制OMA1表达、降低OPA1的蛋白水解及减少L-OPA1向S-OPA1过度裂解,从而发挥保护线粒体形态和改善心功能的作用,并且能与OMA1基因封闭发挥协同作用。

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

经阴道超声测量宫颈长度联合实验室指标fFN、PAPP-A、IGFBP-1、hCG、MMP-8预测先兆早产的价值

目的探讨经阴道超声测量宫颈长度(CL)联合实验室指标胎儿纤维连接蛋白(f FN)、妊娠相关蛋白-A(PAPP-A)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)、人绒毛膜促性腺激素(h CG)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)预测先兆早产的价值,为先兆早产的防治提供参考,促进优生优育。方法选取2018年1月至2019年12月我院收治的148例先兆早产孕妇作为研究组,同期52例正常产检孕妇作为对照组。采用经阴道超声测量两组孕妇宫颈长度,采用胶体金法或酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组孕妇宫颈分泌物f FN、IGFBP-1、MMP-8和血清PAPP-A、hCG水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CL和上述实验室指标预测先兆早产的价值。结果研究组CL及PAPP-A、IGFBP-1水平均低于对照组,而f FN、hCG、MMP-8水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示:CL、f FN、PAPP-A、IGFBP-1、h CG、MMP-8对先兆早产均具有一定预测价值(AUC分别为0.823、0.820、0.821、0.808、0.818、0.843,P<0.01)。进一步Logistic回归分析显示:联合检测预测先兆早产的AUC、敏感度、特异度分别为0.980、92.6%、94.2%,均高于CL、f FN、PAPP-A、IGFBP-1、h CG、MMP-8单项检测(P<0.01)。结论经阴道超声测量CL和实验室指标f FN、PAPP-A、IGFBP-1、h CG、MMP-8均可作为先兆早产的预测指标,且联合检测可提高先兆早产的预测效能。

儿童急性肾损伤相关新型生物标志物的研究进展

急性肾损伤(AKI)是儿童住院患者常见的急重症,其发病率和死亡率都很高。AKI病程进展迅速,早期诊断和风险预测能够辅助临床医生及时开展治疗,有效改善患儿预后。传统的生物标记物血清肌酐(SCr)与肾功能相关,但不能及时反映肾脏的损伤情况。目前,许多新的、有潜力的生物标志物,如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP7)以及金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)等被广泛研究。儿童有其独特的生长发育规律,同一生物标志物在不同年龄段的基线水平不同。文章综述了这些新的AKI生物标志物的病理生理学基础,在AKI患儿早期诊断、风险分层、预后评估中的应用及其与成人患者的差异。

人肝癌细胞系MHCC-97H干细胞体外培养及其生物学行为观察

目的培养人肝癌细胞系MHCC-97H中具有干细胞特性的细胞群,探讨其分子生物学特点。方法将人肝癌细胞系MHCC-97H分别培养于干细胞培养体系及普通培养体系(分别为观察组及对照组)。培养10 d后显微镜(100倍及400倍)观察细胞生长情况;免疫荧光法检测细胞表面蛋白CD133、细胞核相关抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、多药耐药蛋白1(MDR1)表达;West-blot法检测相应蛋白表达。结果观察组细胞呈半贴壁悬浮生长的克隆球;对照组细胞呈贴壁生长。观察组CD133、MDR1、MMP9呈高表达,对照组未见表达,P<0.05;两组Ki67均呈高表达。结论 MHCC-97H中存在一定数量的肿瘤干细胞,该群细胞是介导肝癌发生转移和耐药的主要因素。

术后急性肾损伤的研究现状与进展

术后急性肾损伤(AKI)是大手术常见并发症之一,与死亡率和长期不良事件相关。改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)提出AKI的定义,将血肌酐的升高和尿量减少作为诊断标准。然而,这种传统的诊断标准是不准确的,需要通过新的生物标志物协助诊断。术后发生AKI的危险因素可以从术前、术中和术后多个方面考虑,通过优化围手术期危险因素,从而减少AKI的发生。AKI的治疗方式有限,仍以对症支持治疗为主,因此早期识别、诊断和治疗是改善患者预后的关键步骤。