羊消化道4种易混淆线虫虫卵的形态学观察与比较

为了方便临床上鉴定羊消化道常见且易混淆线虫虫卵并丰富相关资料,试验从羊消化道中采集疑似捻转血矛线虫、夏伯特线虫、食道口线虫和奥斯特线虫共4种线虫,采用形态学和分子生物学方法鉴定虫种,将4种线虫于体外短暂培养后得到纯种虫卵,通过观察虫卵不同发育阶段的胚胎形态变化获取每种线虫虫卵形态特征,并对虫卵的长径、宽径和长宽比进行测定。结果表明:经鉴定4种线虫分别为捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫、粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫。4种线虫虫卵初期胚胎多呈收缩状态且形似桑葚,在外观形态上具有相似性,均为双层卵壳,多数对称,少数不对称。捻转血矛线虫虫卵呈短椭圆形,颜色较浅;绵羊夏伯特线虫虫卵呈椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深;粗纹食道口线虫虫卵呈长椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深,与绵羊夏伯特线虫虫卵相近;普通奥斯特线虫虫卵亦呈长椭圆形,颜色与捻转血矛线虫相近,较绵羊夏伯特线虫和粗纹食道口线虫虫卵浅。虫卵在生理盐水中培养1~6 d后,捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫和普通奥斯特线虫依次进入蝌蚪期和幼虫期,但仅凭肉眼依然难以区分虫卵种类;绵羊食道口线虫未观察到含蝌蚪或含幼虫的虫卵,仅在桑葚期观察到胚胎收缩成1团及分裂成2团或3团不同形态的虫卵。部分粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫虫卵可观察到明显的气室。捻转血矛线虫卵大小为(61.22~102.05)μm×(37.96~69.33)μm,长宽比为1.51;绵羊夏伯特线虫卵大小为(81.89~139.14)μm×(43.97~90.60)μm,长宽比为1.57;粗纹食道口线虫卵的大小为(84.57~104.59)μm×(40.86~59.18)μm,长宽比为1.83;普通奥斯特线虫卵大小为(82.83~117.22)μm×(41.70~71.79)μm,长宽比为1.76。说明4种线虫虫卵的外观形态虽有细微差异,但没有特征性标识,临床上易造成误判,因此采用分子生物学方法进行鉴定更为可靠。

羊鲍(Haliotis ovina)和耳鲍(H.asinina)MtDNA COⅠ和COⅡ基因片段序列的比较研究

采用基因测序的方法,对我国海南产的羊鲍和耳鲍两个自然种群的COⅠ和COⅡ基因片段进行了PCR扩增和测序。结果表明,羊鲍和耳鲍COⅠ基因片段的核苷酸序列均为193bp,4种碱基组成非常相似,且其A+T的含量也非常相似,分别为45.08%和45.60%。羊鲍和耳鲍COⅠ基因片段的核苷酸序列之间有29bp的差异,其中有8处发生碱基颠换,21处发生碱基转换,差异为15.03%,同源性为84.97%;羊鲍和耳鲍COⅡ基因片段的核苷酸序列均为157bp,羊鲍和耳鲍4种碱基组成差异较大,且其A+T的含量也不同,分别为59.24%和55.41%。羊鲍和耳鲍COⅡ基因片段的核苷酸序列之间有19bp的差异,其中3处发生碱基颠换,16处发生碱基转换,达到12.10%的差异,同源性为87.90%。分子变异分析表明羊鲍和耳鲍物种间的变异组成为0.50,变异百分数为100.00,羊鲍和耳鲍物种间的遗传分化显著(FST=1,P<0.001)。

γ-氨基丁酸、氯化钾和5-羟色胺对羊鲍(Haliotis ovina)幼虫存活、附着和变态的影响

使用γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)、氯化钾和5-羟色胺,进行羊鲍(Haliotis ovina)幼虫存活、附着和变态过程中的诱导实验。结果表明,γ-氨基丁酸对羊鲍幼虫存活、附着及变态都有促进作用。γ-氨基丁酸浓度为10–4mol/L时处理72h的附着率(26.27%)和变态率(22.26%)高于其他组别, 10–6mol/L处理72h存活率(30.84%)高于其他组别。氯化钾能在高浓度(10–2—10–3mol/L)下诱导附着,而对变态和存活没有影响。氯化钾浓度为10–3mol/L处理时间为24h和72h的附着率高于其他组别,分别为11.3%和16.4%。5-羟色胺可诱导附着和变态,对幼虫的存活无影响或有抑制作用。5-羟色胺浓度为10–5mol/L处理72h的附着率(20.73%)和变态率(20.18%)高于其他组别。因此,γ-氨基丁酸可作为羊鲍育种培育过程的有效诱导剂,可以应用推广于羊鲍幼虫的培育过程乃至大规模生产养殖中。

南海岛礁羊鲍(Haliotis ovina)资源及其栖息地环境研究

鲍是重要的海珍品,羊鲍(Haliotis ovina)是主要生活在热带岩岸潮间带大型经济鲍类底栖动物。为了研究南海岛礁羊鲍资源及其栖息环境,我们在宣德群岛的永兴岛和七连屿,永乐群岛的羚羊礁、甘泉岛和晋卿岛进行了羊鲍资源分布及其栖息水环境研究。按照《海岛调查技术规程》中潮间带岩岸大型底栖生物调查方法,对羊鲍进行取样调查。按照《海洋调查规范第4部分:海水化学要素调查》(GB T 12763.4-2007),对羊鲍栖息地水环境的总无机氮、活性磷酸盐、悬浮物和叶绿素a等海水化学要素进行分析。结果表明,羊鲍在永乐群岛和宣德群岛都有分布,这些岛礁按永兴岛、七连屿、羚羊礁、甘泉岛和晋卿岛的顺序,分布密度依次增加,个头大小依次增大,总体来说羊鲍资源量小,有的岛礁海区几乎绝迹,亟需开展生态增殖和资源养护研究工作。水质调查表明,除永兴岛站位的悬浮物指标因填海作业未达标外,各站位的水质指标均达一类水标准且具有一定稳定性。因此,尽管南海岛礁受人类活动的影响,但该海域仍适合羊鲍栖息,是羊鲍资源养护、底播生态增殖和生态养护的适宜场所,符合建立海洋保护区的国家水质标准和环境条件。

青藏高原5种牧草木质素含量及其体外消化率研究

在海拔高度3200m的中国科学院海北高寒草甸生态系统定位站选取羊茅 Festucaovina 、早熟禾 Poaannua 、艹洽草 Koeoeriacristata 以及莎草科的矮嵩草 Kobresiahumilis 、黑褐苔草 Carexalrofusca 5种青藏高原重要牧草品种,分别测定羊茅、早熟禾、艹洽草、矮嵩草茎、矮嵩草叶、黑褐苔草茎和黑褐苔草叶的木质素含量,并采用二级离体培养法测定其体外消化率,比较不同牧草间木质素含量及消化率差异.1999和2000年两年的实验结果表明,牧草木质素含量与其体外消化率之间为极显著负相关 P<0.01 ;就同种牧草不同器官而言,牧草茎的木质素含量明显高于叶,其降解率较低;3种禾本科牧草及2种莎草科牧草不同牧草品种间木质素含量和体外消化率差异不显著.

羊鲍野生群体遗传多样性与分化的研究

运用随机扩增片段长度多态性DNA标记(RAPD)技术对中国海南省英州、安游和亚龙湾海域的3个羊鲍(Haliotis ovina)野生群体进行遗传多样性与分化的研究。利用14个10bp随机引物,在90个个体中共检测到72个位点,其中英州,安游和亚龙湾群体的多态位点数分别为65,61和62个,多态位点百分数(P)分别为90.28%、84.72%和86.11%;Shannon's信息指数(I)分别为0.443、0.456和0.400;Nei's基因多样性指数(H)分别为0.292、0.305和0.262。3个羊鲍群体间的遗传距离(D)介于0.0504～0.0731之间;群体间的遗传分化系数(GST)为0.0976。结果表明,羊鲍3个野生群体的遗传多样性水平较高,群体间的遗传分化较小。

青藏高原不同海拔高度对禾本科牧草体外消化率的影响

利用大板山北坡 32 0 0 m～ 380 0 m的海拔梯度 ,分别在 32 0 0 m、340 0 m、36 0 0 m和 380 0 m处选取羊茅、一年生早熟禾和 艹洽 草用二级离体培养法测定其体外消化率。 1999和 2 0 0 0年测定结果表明 ,随着海拔的升高 ,3种牧草的体外消化率呈增加趋势 ,海拔从 32 0 0 m升到 380 0 m,羊茅、早熟禾、艹洽 草的体外消化率分别增加 6 .4 2、6 .35、8.6 9和4 .89、9.8和 5 .1个百分点。显著性分析结果表明 ,供试牧草的体外消化率与其生长的海拔高度之间的正相关关系差异显著 (P<0 .0 5 )。

羊茅种子愈伤组织诱导及再生体系的建立

以羊茅(Festuca ovina)成熟种子为外植体材料,在改良的MS(MSM)培养基上分别添加不同质量浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、激动素(KT)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、奈乙酸(NAA),探讨不同的激素组合对愈伤组织诱导、植株分化以及植株生根的影响,以建立羊茅无性系的高效再生体系。结果表明,羊茅在MSM+6.0 mg/L 2,4-D+0.02 mg/L KT的培养基中愈伤组织诱导生长最好;在MSM+2.0 mg/L6-BA+0.6 mg/L NAA培养基上植株分化率最高,达82%;在1/2 MSM+0.6 mg/L NAA培养基上生根率达100%。

天山北坡羊茅草原群落结构与数量特征的动态变化

为了解天山北坡羊茅(Festuca ovina)草原长时期自然放牧条件下草地植物群落特征的变化,采用连续定位测定的方法,对1985-2004年天山北坡羊茅草原群落结构与主要数量特征的测定数据进行了分析。结果表明:在连续测定的20年间,草地植物群落的种类组成与结构没有发生变化,而草地植物群落的数量特征始终处于动态变化过程;1985-1995年时段内与自然降水量的波动规律基本一致,影响草地基本数量特征变化的主因是降水量;在1996-2004年时段内,放牧利用干扰成为影响草地基本数量特征波动的主因;同时在后10年,草地地上平均生物学产量较前10年下降了15.7%。

三种草坪草对土壤水分利用特征的比较研究

为了筛选出抗旱性较强的乡土草坪草种,在2010年6～9月期间利用盆栽试验研究了持续干旱胁迫对洽艹草、羊茅与对照植物草地早熟禾种群的存活期、日均蒸腾量及其动态、萎蔫系数等指标的影响。结果表明:(1)在持续干旱胁迫下,与草地早熟禾相比,洽艹草、羊茅种群总存活时间延长了18d～22d,出现暂时萎蔫症状时间推迟了14d～17d。(2)在植物发生暂时萎蔫之前,野生羊茅、洽艹草种群的日均蒸腾量都显著低于草地早熟禾,二者的日均蒸腾量分别仅为草地早熟禾日均蒸腾量的60.44%、65.38%。(3)洽艹草和羊茅种群发生暂时萎蔫、永久萎蔫时的土壤临界含水量均显著低于草地早熟禾,它们的平均最大土壤水分利用率为75.26%,也显著高于草地早熟禾。三种植物土壤水分最大利用率大小依次为:羊茅>■草>草地早熟禾。

野生羊茅和■草在不同沙/土配比坪床上的生长适应性

为了筛选出能够在含沙量较高的土壤上生长的内蒙古乡土草坪草种,2009年6~9月用盆栽试验研究了4种不同土壤配比对野生羊茅和[艹洽]草草坪的盖度、分蘖数、生物量等指标的影响。结果表明：（1）野生羊茅和[艹洽]草都具有良好的抗沙性;在任一土壤处理下,[艹洽]草草坪的盖度、地下生物量、根冠比都高于羊茅草坪,而其分蘖数、地上生物量低于羊茅草坪。（2）在30%耕作土＋70%沙的土壤配比下羊茅草坪的生长特征优于其他土壤配比,[艹洽]草草坪在100%耕作土下生长发育最好,当沙土超过50%后,含沙量的增加对其各个指标的影响不显著,说明羊茅耐土壤贫瘠、粗糙的能力要强于[艹洽]草,而洽艹草对土壤的适应范围大于羊茅。

不同放牧模式对贵南县高寒草甸优势种羊茅叶属性的影响

以青海省贵南县高寒草甸的不同放牧管理模式(适度放牧、重度放牧、季节性休牧及封育)草地为对象,通过对不同放牧模式下高寒草甸优势种羊茅8个叶属性的定量分析,研究不同放牧模式对高寒草甸优质牧草羊茅的影响。结果表明:与适度放牧样地相比,羊茅比叶面积在重度放牧后显著升高(P<0.05),封育后显著下降(P<0.05),叶干物质含量均呈现下降趋势(P<0.05)。放牧使羊茅叶N、P含量表现出增加趋势,N/P表现出降低趋势,在重度放牧样地中表现最为明显(P<0.05)。各样地均有较高N/P,说明P元素是限制羊茅生长的主要营养元素。主成分分析表明,季节性休牧模式下羊茅生长状况较好,重度放牧模式下羊茅生长状况最差。因此,从羊茅叶属性看,应提高休牧模式在草地利用中的比重,降低草地放牧强度,以保证草地质量。

秦岭野生草坪植物—羊茅的引种驯化

通过对秦岭野生草坪植物—羊茅两个生态型(变种)的引种试验观察,初步发现它们具有绿期长、抗逆性强、繁殖能力强、抗杂草病害等特点,为具有开发前景的优良冷季型草坪植物。

绵羊夏伯特线虫对成年牦牛的致病作用及对局部黏膜免疫功能的影响

对自然感染绵羊夏伯特线虫的牦牛(感染组)进行了病理学观察,并同正常牦牛(对照组)进行了比较。结果显示,虫体寄生部位主要在大肠回盲口、盲肠以及结肠前约1/3处,寄生数量为30～50条。寄生部位黏膜增厚,呈脑回样增生,颜色灰白,偶见散在点状出血现象,表面附有较多黏液。黏膜上皮、固有层内肠腺及杯状细胞、浆细胞、弥散淋巴组织均有增生,固有层、黏膜肌层以及黏膜下层可见大量嗜酸性粒细胞浸润,黏膜下层淋巴小结、淋巴集结以及血管周围肥大细胞显著增生,偶见黏膜出血、黏膜上皮坏死脱落等变化。结果表明,肠黏膜脑回样病变实际是由宿主机体自身组织增生所致。成年牦牛对绵羊夏伯特线虫的抗感染能力较强,其原因可能是成年牦牛寄生部位的黏膜相关淋巴组织发育成熟完善,可通过增生加强局部免疫力来抵抗寄生虫的寄生。

天山北坡4种典型草原植物叶干重与叶面积的关系

【目的】研究4种典型草原植物冷蒿(Artemisia frigida)、针茅(Stipa capillata)、羊茅(Festuca ovina)和短柱苔草(Carex turkestanica)的叶片干重与叶片面积之间的关系,找到快速测定草原植物叶面积的方法,为大范围遥感监测及估产提供理论依据。【方法】以天山北坡中段山地草原4种典型植物为材料,以叶片干重和叶片面积作为测量指标,建立4种植物叶片干重与叶片面积的回归方程。【结果】冷蒿的回归方程为:Y=0.00849 X+0.002 7(R2=0.880 81);针茅为:Y=0.007 03 X+0.004 38(R2=0.750 14);羊茅为Y=0.015 38 X-0.001 25(R2=0.677 27);短柱苔草为:Y=0.007 05 X+0.008 895(R2=0.498 58)(P<0.01)。【结论】4种植物的回归方程对叶面积的预测准确性表现为冷蒿>针茅>羊茅>短柱苔草。可通过叶干重与叶面积建立回归方程并且为4种典型草原植物的叶面积测定提供科学参考。

海南不同地理群体羊鲍18S rDNA的克隆与序列分析

[目的]对海南不同地理群体羊鲍18S rDNA进行克隆,并对其进行序列分析。[方法]采用分子生物学的方法,对海南不同海区的2个羊鲍地理群体18S rRNA基因全长进行克隆和序列分析,并将得到的羊鲍18S rRNA基因序列与同海域耳鲍的进行比较。[结果]同一地理群体内羊鲍核糖体18S rRNA基因序列完全一致;不同地理群体间羊鲍核糖体18S rRNA基因在碱基组成上的相似率为99.5%,仅在某些位点处发生了碱基替换,即腺嘌呤(T)被鸟嘌呤(G)替换;同时,将这两个不同群体中羊鲍的18S rRNA基因与同一海域耳鲍18S rRNA基因序列进行比较分析发现,它们之间也只是发生了碱基替换。[结论]为海南鲍鱼特别是羊鲍的遗传多样性、遗传结构、种质鉴定及其种质资源的保护和利用等方面的研究提供可靠依据。

围栏封育对巴音布鲁克草原两种建群草光合日变化的影响

利用PP system公司生产的CIRAS光合作用仪,对巴音布鲁克亚高山草原的围栏内外的两种建群种针茅(Stipa capillata)和狐茅(Festuca ovina)的光合作用速率、蒸腾速率等指标进行了研究,结果表明:①围栏内针茅和狐茅的日变化曲线呈现弱的三峰曲线,针茅的光合速率(Pn)日平均为12.23μmol/m2.s,狐茅为6.92μmol/m2.s;而围栏外针茅和狐茅的日变化曲线呈现强的双峰曲线,针茅的光合速率(Pn)日平均为13.28μmol/m2.s,狐茅为5.48μmol/m2.s;围栏内两种草的光合速率日变化曲线表现出先强后弱的趋势,而围栏外则相反。②围栏封育条件下,针茅CO2固定平均速率为1.937 gCO2/m2.h,略低于围栏外的2.103 gCO2/m2.h;而狐茅则呈现相反趋势,即围栏内CO2固定平均速率(1.096 gCO2/m2.h)高于围栏外(0.869 gCO2/m2.h)。③从单叶水平上看,无论是围栏封育还是自然放牧的条件下,针茅对CO2的同化固定能力要强于狐茅;从群体水平来看,围栏内人工封育草地要比围栏外自然放牧草地CO2固定能力弱一些。

绵羊夏伯特线虫外生性发育的研究

把绵羊夏伯特线虫（Ｃｈａｂｅｒｔｉａｏｖｉｎａ）虫卵置于消毒粪便培养基内，于２５℃温箱内及１７℃（±２℃）室内进行培养。结果表明：在２５℃下经４０～４４ｈ第一期幼虫逸出卵壳，６２～６９ｈ完成第一次蜕皮成为第二期幼虫，１６２～１８９ｈ完成第二次蜕皮成为第三期幼虫；第三期幼虫肠细胞呈矩形，共３２个，尾鞘长０．１７５～０，２２０ｍｍ，生殖原基距头端０．３４５～０．３８１ｍｍ；在室内培养的虫卵发育缓慢，约经１０ｄ才发育为第三期幼虫。

温度和盐度对羊鲍胚胎发育及幼虫发育的影响

为探究水温和盐度对羊鲍胚胎发育和幼虫发育的影响,以人工驯化后的野生羊鲍为实验材料,采用温度、盐度单一和双因子组合方法设计实验。结果表明,羊鲍孵化率和成活率受温度、盐度影响显著,28°C时,胚胎发育时间最短,孵化率最高,26°C时,幼虫发育时间最短,成活率最高。胚胎发育适宜温度为24～28°C,最适温度为26～28°C。盐度为24时,羊鲍胚胎发育和幼虫发育时间最短,孵化率和成活率最低;盐度分别为30和32时,孵化率和成活率最高。胚胎发育和幼虫发育的适宜盐度为28～32,最适盐度为30～32。温度盐度交互作用对羊鲍孵化率影响差异不显著,对成活率影响差异显著。通过响应曲面模型优化,得出温度为24.61°C,盐度为32时,孵化率和成活率均达到最大值,分别为95.32%和81.20%,满意度为0.848。研究表明,羊鲍胚胎发育和幼虫发育对温度、盐度的敏感性不同,对高温高盐的耐受性强于低温低盐。

绵羊夏柏特线虫线粒体pcox1基因的克隆及序列分析

以从陕西省泾阳县山羊大肠中采集的5条绵羊夏柏特线虫为研究对象,用通用引物JB3及JB4.5扩增绵羊夏柏特线虫的线粒体细胞色素c氧化酶第1亚基(cox1)基因部分序列(pcox1),将测序获得的序列用ClustalX 1.81程序进行比对,并用PAUP程序MP法构建系统发育树。结果表明:所获得的5个绵羊夏柏特线虫样品pcox1序列长度均为393 bp;种系发育分析表明,绵羊夏柏特线虫5个样品位于同一分支,且绵羊夏柏特线虫的pcox1序列种内相对保守(0.5%～2.0%),种间变异显著(9.4%～18.8%),pcox1序列可作为种间变异研究的可靠遗传标记。