重组人C1酯酶抑制剂中rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH含量检测

目的:分析重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH)中相关蛋白rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量。方法:采用反相高效液相色谱法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对4批样品中的相关蛋白进行检测。结果:低浓度下,rhC1INH对照品、rcc-rhC1INH对照品和ox-rhC1INH对照品能够较好分离。rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH 2种对照品质量浓度为0.2、1和1.4 mg·mL^(-1)时的回收率均在85%～115%的范围内。对同1批3个待测样品进行测定,rcc-rhC1INH含量为(0.082±0.008)%,RSD为9.8%;ox-rhC1INH含量为(0.35±0.05)%,RSD为14.3%,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度。4批测试样品中,rcc-rhC1INH的含量分别为0.083%、0.021%、0.033%、0.042%,ox-rhC1INH的含量分别为0.34%、0、0、0。结论:经方法学验证,RP-HPLC方法可用于rhC1INH中rcc-rhC1INH和ox-rhC1INH的含量检测。

遗传性血管性水肿患者C1 INH和C4测定结果

目的评估速率散射比浊法测定C1INH和C4的临床应用价值。方法应用速率散射比浊法测定60份(HAE23例,正常人37例)血清样本,并与免疫单扩散法比较。结果HAE患者的C1INH和C4水平与正常对照组比较有统计学显著性差异(P<0.01),两种方法测定结果的相关性良好(P<0.01)。速率散射比浊法批内变异系数小于4.6%,批间变异系数小于4.9%。结论速率散射比浊法测定血清C1INH和C4含量结果可靠,操作简便,适合于临床应用。

妊高征患者血浆ET-1、NO、INH和EGF检测的临床意义

目的:探讨了血浆ET-1、NO、INH和EGF水平在妊高征患者发病中的变化和意义。方法:分别采用生化法、ELISA法和放射免疫分析对41例妊高征孕妇进行了血浆ET-1、NO、INH和EGF水平测定,并与35名正常孕妇作比较。结果:妊高征患者血浆ET-1、INH水平显著地高于正常人组(P<0.01),而NO、EGF水平则显著低于正常人组(P<0.01)。结论:检测妊高征患者血浆ET-1、NO、INH和EGF水平的变化对判断病情的严重程度、病情的发展均具有重要的临床价值。

人补体C1INH基因的原核表达及其抗血清的制备

采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌;IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析表明,pET32a-C1融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6 400;Western-blot检测显示,抗血清可与原核表达的C1INH蛋白进行特异性结合,为进一步检测真核表达蛋白及研究rhC1INH的功能活性,并为C1INH的临床检测奠定基础。

妊高征患者血浆ET-1和血清INH、D-D检测的临床意义

目的:探讨了血浆内皮素-1(ET-1)和血清抑制素(INH)、D-二聚体(D-D)水平在妊高征患者发病中的变化和临床意义。方法:采用放射免疫分析、酶联法和生化法对32例妊高征患者进行了血浆ET-1和血清INH、D-D检测,并与35名正常孕妇作比较。结果:妊高征患者血浆ET-1和血清INH、D-D水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),且血浆ET-1水平与INH、D-D水平呈正相关(r=0.6138、0.5912,P<0.01)。结论:检测妊高征患者血浆ET-1和血清INH、D-D水平的变化对密切监视病情的严重程度、病情的发展均具有重要的临床价值。

恶性葡萄胎患者化疗前后血浆leptin、ET-1和血清INH检测的临床意义

目的:探讨了恶性葡萄胎患者化疗前后血浆leptin、ET-1和血清INH水平变化及临床意义。方法:分别应用放射免疫分析和酶联法对31例恶性葡萄胎患者进行了化疗前后血浆leptin、ET-1和血清INH测定,并与35例正常健康人做比较。结果:恶性葡萄胎患者在化疗前血浆leptin、ET-1和血清INH水平变化均非常显著地高于正常人组(P<0.01),化疗后6个月与正常人组比较仍有差异(P<0.05)。结论:恶性葡萄胎患者是一种可呈现自身免疫异常和免疫调节障碍的疾病。

糖化酵母在酒精工业中应用研究（Ⅰ）──去除INH1基因的酒精酵母的选育

二倍体耐高温酒精酵母经诱导生孢子，单孢子分离及营养缺陷型遗传标记的制作，获得了一株与亲本发酵性能相当且遗传性能稳定的单倍体菌株ＪＤ９－２２（α，ｓｔａ，ＩＮＨ１，ａｒｇ）。利用酵母的群体杂交方法，通过糖化酵母单倍体菌株２６０６７－４４（ａ，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｄｅ）于ＪＤ９－２２杂交，选育去除了ＩＮＨ１基因的耐高温酒精酵母单倍体，解除了ＩＮＨ１基因对ＳＴＡ基因在酒精酵母细胞内表达的抑制。

涠洲12-1海上油田硫酸钡锶垢防垢剂研究

涠洲12-1海上油田注入水(海水)与地层水不配伍,油井结垢严重,垢物含～70%硫酸钡,～30%硫酸锶.以体积比2:8的海水(矿化度35 g/L,含SO24-3 g/L)和地层水(矿化度26 g/L,含Ba2+30 mg/L)混合水为实验水样,测定了五大类15种商品防垢剂70℃时的防垢率,性能最好的5种是:聚天门冬酸PASA,防垢率68.9%,加量25mg/L;聚丙烯酸钠PAAS,67.4%,25 mg/L;部分水解聚马来酸酐HPMA,63.3%,5 mg/L;二亚乙基三胺五甲叉膦酸DETPMP,48.6%,5 mg/L;膦酸聚合物型防垢剂TS-7910,44.9%,25 mg/L.以这5种防垢剂为因素,4种加量(2,4,6,8 mg/L)为水平,按L1645正交表设计实验,考察了16个五组分复配防垢剂的防垢率,在70℃时4+2+4+6+8(mg/L)配方的防垢率最高,为83.0%;在90℃时所有配方的防垢率均较高,有5个配方的防垢率很高,在83.3%～84.8%范围:2+4+4+4+4,4+2+4+6+8,4+8+6+4+2,6+6+2+4+8,6+8+4+2+6;在120℃(油藏温度)时6+6+2+4+8和8+2+8+4+6两个配方的防垢率超过55%(55.7%+56.5%).讨论了防垢剂的作用机理:螯合和吸附.为防止油井结垢,可将防垢率经环空加入油井或置入地层适当部位.图2表3参4.

IFNγ对U937细胞C1抑制物合成调控作用的研究

为研究ＩＦＮγ对Ｃ１抑制物（Ｃ１ＩＮＨ）合成的调控作用，采用ＥＬＩＳＡ双夹心法检测了经不同剂量ＩＦＮγ刺激后Ｕ９３７细胞培养上清中Ｃ１ＩＮＨ的含量。结果表明：经ＰＭＡ预先作用７２ｈ后的Ｕ９３７细胞本身能合成微量Ｃ１ＩＮＨ，但在培养第２天后才能检测到。加入ＩＦＮγ作用后，细胞Ｃ１ＩＮＨ合成增加，培养第１天即可测得。说明ＩＦＮγ对Ｕ９３７细胞Ｃ１ＩＮＨ的合成有上调作用并呈时间和剂量依赖性，当其剂量达到１０００～１００００ｕ／ｍｌ时，与对照相比Ｃ１ＩＮＨ合成量有极显著性增加（Ｐ＜０．００１）。

2种方法检测结核分枝杆菌对10种药物耐药性的比较

目的 探讨应用比例法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性及可比性。方法 用比例法和绝对浓度法分别检测 2 4 0株结核分枝杆菌对异烟肼 (INH)、链霉素 (SM)、乙胺丁醇 (EMB)、利福平 (RFP)、乙硫异烟胺 (TH132 1)、对氨基水杨酸 (PAS)、丁胺卡那 (AN)、卡那霉素 (KM)、氧氟沙星 (OFLX)、卷曲霉素 (CPM)的耐药性。结果 SM、RFP、CPM、PAS、AN、KM绝对浓度法和比例法检出的耐药率无显著性差异 ,而INH、EMB、TH132 1、OFLX用比例法测试耐药率均明显高于绝对浓度法 (P <0 .0 1) ,两法药敏结果INH、SM、EMB、RFP、TH132 1、CPM、AN、KM、OFLX和PAS的符合率分别为 :81.7%、90 .8%、83.8%、97.9%、83.3%、94 .2 %、97.5 %、95 .4 %、83.3%、92 .5 %。结论 比例法和绝对浓度法耐药率的差别主要与选定的药物临界浓度有关。

慈姑多糖对异烟肼和利福平联用致HepG2细胞肝损伤CYP2E1和CYP3A4的影响

目的：研究慈姑多糖（Sagittaria sagittifolin polysaccharide,SSP）对异烟肼（Isoniazid,INH）和利福平（Rifampicin,RFP）联用致HepG2细胞肝损伤中细胞色素P450酶（cytochrome P450,CYP450）亚型CYP2E1和CYP3A4酶含量、基因及蛋白表达影响。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4酶含量,采用RT-PCR技术检测HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4的mRNA的表达,采用Western-blot法检测HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4蛋白的表达。结果：与正常对照组相比,INH和RFP联用诱导的肝损伤模型组CYP2E1和CYP3A4酶含量、基因及蛋白表达均显著升高（P〈0.05）;与模型组相比,SSP保护组的CYP2E1和CYP3A4酶含量、基因及蛋白表达均显著降低（P〈0.05）。结论：SSP可能通过抑制肝HepG2细胞中CYP2E1和CYP3A4酶的含量、基因及蛋白的表达,发挥其对INH和RFP联用致肝损伤的保护作用。

重组人补体C1抑制剂申请上市

Phamaing公司在欧洲已经提交了其重组人补体C1抑制剂（rhC1INH）的上市申请，并准备也向美国FDA提交该药的申请。如果能获得批准，则该药将成为欧洲和美国市场上30年来第一个用于遗传性血管性水肿（hereditaryangioedema）急性发作的罕见病用药。

人CT抑制物的分离及其抗血清的制备

本文采用PEG沉淀及抗人C_1^--INH Sepharose 4B、抗人IgG Sepharose 4B及抗人白蛋白Sepharose 4B柱层析等步骤,自人血清分离补体调节蛋白C_1^--INH,该制剂经免疫电泳试验,位于α_3,SDS-PAGE分析呈现分子呈为105KD的主带和90KD的次带,免疫家兔获抗C_1^--INH单价抗血清,以上结果表明,分离的C1-INH具有高纯度及免疫学活性。

血清学检测对妊娠合并肝内胆汁淤积症病人病情严重程度的评估价值

探讨血中总胆汁酸(TBA),血清抑制素A(INH-A)及可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)水平对妊娠合并肝内胆汁淤积症(ICP)病人病情严重程度的评估价值,选取本院100例ICP患者作为观察组,50例健康体检者作为对照组。结果显示,与对照组比较,观察组患者TBA,INH-A,sICAM-1显著增高,其中,重度组显著高于轻度组;联合TBA、INH-A、sICAM-1检测对诊断ICP病情程度进行诊断的敏感度、特异度及AUC均高于各指标单独诊断(P<0.05)。结果提示,TBA、INH-A、sICAM-1联合检测可作为评估ICP患者病情严重程度的重要指标。

罕见病新药:ecallantide

遗传性血管性水肿（HAE）是一种罕见的遗传性疾病,致病原因是编码C1酯酶抑制剂（C1INH）的基因突变。C1INH调节几种生物途径，其中包括血管舒缓素一激肽级联反应。HAE的特征是身体多个部位出现间歇性水肿，包括喉部、皮肤、胃肠道粘膜和生殖泌尿系统。HAE发作时患者非常痛苦，常持续1～5天，喉部血管水肿甚至可以致命。

免疫学检验与临床

遗传性血管性水肿患者C1INH和C4测定结果，透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价，血清超敏C反应蛋白和低密度脂蛋白测定对糖尿病并发动脉粥样硬化的价值，E-选择素基因多态性与脑梗死的相关性研究，噪声作业工人血浆热应激蛋白70抗体与高血压关系的研究，肾小管损害各种早期诊断指标的评价……

重组人C1酯酶抑制剂中异天门冬氨酸含量检测

目的:检测重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中异天门冬氨酸(Iso Asp)的含量。方法:采用异天冬氨酸甲基转移酶催化结合反相高效液相色谱的方法进行测定,对该方法进行专属性、准确性和精密度检验,并用该方法对3批样品的Iso Asp含量进行检测。结果:浓度分别为10、30、60 pmol/60μL的SAH标准品的检测结果均在90%～110%范围内。对同一批3个待测样品进行测定,IsoAsp含量为(0.413±0.020)μmol IsoAsp/g rhC1INH,RSD为4.8%,显示该方法具有较好的专属性、准确性和精密度。3批测试样品中,IsoAsp含量分别为0.633、0.827、0.487μmol IsoAsp/g rhC1INH。结论:经方法学验证,异天门冬氨酸检测试剂盒结合RP-HPLC方法适用于rhC1INH中IsoAspr的含量检测,可为类似蛋白制品中该项目的检测提供借鉴。

重组人C1酯酶抑制剂中聚合物含量的测定

目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相,流速0.5 mL·min^(-1)进行洗脱。结果:在25.0～85.0μg·m L^(-1)浓度范围内,rh C1INH标准品的峰面积与浓度的线性关系良好(R^2平均值为0.997)。rh C1INH样品中分离到3个聚合物峰,采用面积归一法计算6次进样的聚合物的平均含量分别为0.11%、0.15%和0.60%,RSD分别为10.7%、9.0%和3.9%。4批次rh C1INH样品中总聚合物的含量分别为0.82%、1.01%、0.97%和0.92%。结论:SEC-HPLC方法适用于rh C1INH中聚合物的检测,为其聚合物质量标准的建立和产品评价奠定了基础。

慈姑多糖对异烟肼/利福平联用致HepG2细胞损伤HO-1和GCLC的影响

目的:研究慈姑多糖(SSP)对异烟肼(INH)和利福平(RFP)联用致HepG2细胞损伤中血红素加氧酶-1(HO-1)和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)酶含量、基因及蛋白表达影响。方法:采用ELISA检测HepG2细胞中HO-1和GCLC含量变化;采用定量RT-PCR技术检测HepG2细胞中HO-1、GCLC mRNA的表达;采用Western Blot法检测HepG2细胞中HO-1和GCLC蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组HepG2细胞中HO-1和GCLC含量、mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,SSP最佳给药组中HO-1和GCLC mRNA、蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:SSP可能通过促进HepG2细胞中HO-1及GCLC含量、mRNA及蛋白的表达,发挥其对INH/RFP联用致肝损伤的保护作用。

新鲜冰冻血浆治疗遗传性血管性水肿一例

遗传性血管性水肿（HAE）是常染色体显性遗传病，表现为皮肤黏膜发作性、局限性水肿，部分患者可死于喉水肿。其病因与补体第一成分抑制因子（C1INH）含量减低或功能缺陷有关，但我国尚无C1INH制剂。目前新鲜冰冻血浆（FFP）对HAE急性期治疗有效。