1种新型脂质配体对J774A.1小鼠巨噬细胞动脉粥样硬化相关基因表达的影响

目的探讨源于oxLDL的1种新型脂质配体7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷(oxLig-1)对巨噬细胞动脉粥样硬化差异表达基因的调控。方法本实验室化学合成oxLig-1,分别以20μg/ml oxLig-1和DMSO作用J774A.1细胞2 h,随后使用Trizol reagent(Invitrogen,Calsbad,CA)提取细胞总RNA,用小鼠动脉粥样硬化RT2ProfilerTMPCR Array同时检测84个基因的mRNA水平。基因表达上调以正值表示,下调以负值表示。结果基因芯片结果显示oxLig-1处理组细胞相较于未经oxLig-1处理组正常细胞,以差异倍数大于2的基因为差异显著基因,总共有20个基因。对其中差异倍数大于4的8个基因进行着重的分析,其中上调显著的5个基因分别是:Apolipoprotein A-I(Apoa1,34.62倍),Apolipoprotein B(Apob,4.50倍),Interleukin 1 receptor type I(Il1r1,6.40倍),Interleukin 3(Il3,6.10倍),Neuropeptide Y(Npy,6.99倍)。下调显著的基因分别是:Kinase insert domain protein receptor(Kdr,6.43倍),Laminin alpha 1(Lama1,20.24倍)和Transforming growth factor-beta 1(Tgfb1,4.62倍)。这些上、下调差异显著基因分别涉及脂类代谢、血液凝固与循环、细胞黏附、应激反应与细胞外基质分子。结论 oxLig-1对巨噬细胞动脉粥样硬化基因产生了较为广泛的调控作用。

血浆糖蛋白β_2-GPI分子结构域与ox-LDL结合机制

通过酵母重组P.rβ_2-GPI-DV(β2糖蛋白I第5结构域)蛋白的荧光、圆二色谱及分子对接模拟,分析血浆糖蛋白β2-GPI-DV分子结构域与ox-LDL的结合机制。SDS-PAGE、Western blotting验证重组蛋白P.rβ_2-GPI-DV表达正确性及纯度;荧光、圆二色光谱、分子对接模拟解析重组蛋白与oxLDL、oxLDL配体oxLig-1可能存在的结合机制和位点。SDS-PAGE、Western blotting显示,在12 kDa大小处有目的蛋白存在且与特异性抗体结合;荧光、圆二色谱的发色基团、二级结构的变化趋势及分子对接模拟结果揭示,P.rβ_2-GPI-DV的Cys281-Lys-Asn-Lys-Glu-Lys-Lys287和Leu313-Ala-Phe-Trp316区域组成的活性口袋与oxLig-1的ω-COOH羧基是实现二者结合的关键。以上结果表明,β2-GPI通过其第5结构域(DV)的赖氨酸阳性区域与ox-LDL的ω-COOH基团识别结合,为血清中β2-GPI特异性结合ox-LDL的机制研究提供理论依据。