白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

白藜芦醇激活Sirt1/Nrf2信号通路抑制高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡

目的:观察白藜芦醇(Res)对高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响,并探究其可能的作用机制。方法:将心肌细胞系H9C2随机分为对照组(5×10^(5),常规培养未给予任何干预)、高糖组(5×10^(5),采用50 mmol/L的葡萄糖干预)和干预组(5×10^(5),采用100μmol/L Res+50 mmol/L葡萄糖干预)3组。采用四甲基偶氮唑盐实验和流式细胞仪检测Res干预对H9C2细胞增殖和凋亡的影响,采用酶联免疫吸附试验法检测H9C2细胞氧化应激指标,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot检测Res对H9C2细胞中Sirt1和Nrf2 mRNA和蛋白相对表达的影响。结果:干预8、24和48 h时,对照组H9C2细胞增殖率高于高糖组和干预组,干预组H9C2细胞增殖率高于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和干预组H9C2细胞凋亡率均低于高糖组,对照组H9C2细胞凋亡率低于干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和干预组H9C2细胞超氧化物歧化酶和总抗氧化能力均高于高糖组,丙二醛均低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和干预组Sirt1和Nrf2 mRNA和蛋白相对表达水平高于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Res可保护高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,机制可能与激活Sirt1/Nrf2信号通路有关。

日粮中添加白藜芦醇对不同部位牛肉抗氧化性能的影响

为研究肉牛日粮中添加白藜芦醇对血清抗氧化性能及高氧气调包装牛肉抗氧化性能的影响,选用12头杂交牛(西门塔尔牛×鲁西黄牛),随机分为全混合日粮(对照组)和补充白藜芦醇[5 g/(头·d),白藜芦醇组]饲喂120 d。检测饲养60 d和120 d时血清抗氧化能力和宰后45 min不同部位肌肉中抗氧化酶活性、mRNA和蛋白表达的差异,并分析不同部位牛肉高氧气调包装贮藏期间脂质和蛋白质氧化程度的变化。研究发现,与对照组相比,日粮中添加白藜芦醇显著增强了血清和肌肉中的抗氧化酶活性(P<0.05),增加了Nrf2及其下游靶基因的表达(P<0.05),降低了高氧气调包装牛肉在贮藏期间的脂质和蛋白质氧化程度(P<0.05)。因此,日粮中添加白藜芦醇提高了不同部位牛肉的抗氧化性能,可以作为一种有效的方法来缓解牛肉贮藏流通期间的氧化缺陷。

白藜芦醇提高多囊卵巢综合征大鼠卵巢局部抗氧化水平的研究

目的:探讨白藜芦醇(RSV)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢形态、血浆抗苗勒管激素(AMH)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平及氧化应激参数的影响。方法:采用注射脱氢表雄酮方法构建PCOS大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=12)、模型组(n=12)、罗格列酮组(RSG组,n=11)和白藜芦醇组(RSV组,n=11)。RSG组给予3.0 mg/(kg·d)的RSG灌胃,RSV组给予10 mg/(kg·d)的RSV灌胃,模型组和对照组均给予等量生理盐水灌胃,连续用药4周。以光学显微镜观察卵巢组织学,以酶联免疫吸附法检测血浆AMH和IGF-1水平,以Ellman法检测卵巢组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以Sun法检测卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,以AEBI法测定卵巢组织过氧化氢酶(CAT)活性。结果:给药4周后,模型组与对照组相比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05),RSG和RSV组与模型组相比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:RSV可提高PCOS大鼠卵巢局部抗氧化能力,降低IGF-1和AMH水平,改善PCOS大鼠卵巢组织形态,提示其治疗PCOS的潜在价值。

氧化白藜芦醇处理对黄皮果实贮藏特性和采后品质的影响

黄皮[Clausena lansium(Lour.)Skeels]属于芸香科,原产于我国华南地区,内含大量生物活性物质,有利于人体健康。然而,黄皮果实因其果皮较薄、果肉较软,易受到机械损伤或发生果实腐烂、果皮褐变、贮藏特性丧失等症状,最终降低了果实采后商品价值及食用价值。因此,有必要开发一种安全、环境友好的采后保鲜技术,以提升黄皮果实贮藏特性及其采后品质,从而延长果实保鲜期。氧化白藜芦醇(OXY)是一种天然活性产物,具有抗褐变、抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒等功效。有研究表明,OXY在药用保健领域研究较多而在食品保鲜中研究较少。目前尚无关于外源OXY处理提高黄皮果实贮藏特性与采后品质的研究报道。因此,为探究外源OXY处理对黄皮果实采后保鲜效应的影响,以鸡心黄皮果实为试材,分别采用0.2 g/L OXY溶液与蒸馏水(CK)浸泡处理黄皮果实30 min,随后取出果实晾干并装袋(每袋装50颗果实),置于相对湿度为85%、温度为(25±1)℃的条件下贮藏10 d,每2 d取样观察,测定黄皮果实的贮藏特性与采后品质相关指标的变化。结果表明:与CK相比,OXY处理能减缓采后黄皮果实的果皮细胞膜透性、褐变度和褐变指数的上升趋势,维持较高水平的果实商品率与较低水平的果实失重率。另外,OXY处理能维持采后黄皮果实较高的果皮L^(*)值、色调角h值和较高的果皮总酚含量,而降低果皮过氧化物酶和多酚氧化酶等酚酶活性。此外,OXY处理也可维持采后黄皮果实较高的果肉可溶性固形物、维生素C、可滴定酸、蔗糖与可溶性总糖含量。因此,外源OXY处理能有效提高黄皮果实的采后贮藏特性,稳定果实果皮的外观品质与果肉营养品质,进而延长黄皮果实的采后保鲜期。

白藜芦醇在慢性肾脏病中的抗氧化作用研究进展

氧化应激是导致慢性肾脏病发生和进展的重要病理变化,因此抗氧化成为治疗慢性肾脏病的关键策略。白藜芦醇的一个重要生物学功能便是抗氧化,它可以通过减少体内自由基、调节细胞信号通路、调节肾脏微生态环境、抑制线粒体功能障碍等方式来减轻肾脏氧化应激的程度发挥保护肾脏组织的作用。本文对白藜芦醇在慢性肾脏病中的抗氧化作用进行综述。

白藜芦醇对黄曲霉毒素B1致兔空肠氧化损伤的保护作用

为了研究白藜芦醇(Res)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的兔空肠氧化应激的保护作用,本试验取21只40日龄的健康肉兔,随机分为对照组(饲喂基础饲粮)、AFB1组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw)AFB1]和AFB1+Res组[饲喂基础饲粮+0.3 mg/(kg·bw)AFB1+30 mg/(kg·bw)Res]。饲喂对应饲粮21 d后,采用苏木精-伊红(H.E.)染色和过碘酸雪夫氏(PAS)染色,观察空肠形态结构的改变;使用试剂盒检测空肠组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示,AFB1组兔空肠绒毛断裂,顶端溶解;与对照组相比,AFB1组绒毛高度极显著下降(P<0.01)而隐窝深度极显著上升(P<0.01),绒毛高度与隐窝深度的比率(V/C)极显著下降(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著下降(P<0.05);与AFB1组相比,AFB1+Res组肠道绒毛结构恢复,绒毛高度极显著上升(P<0.01),隐窝深度极显著下降(P<0.01),V/C极显著上升(P<0.01),杯状细胞数量和黏液层厚度均显著上升(P<0.05);与对照组相比,AFB1组GSH-Px和SOD活性均极显著下降(P<0.01),T-AOC显著下降(P<0.05),MDA含量极显著上升(P<0.01);与AFB1组相比,AFB1+Res组GSH-Px和SOD活性均极显著上升(P<0.01),T-AOC显著上升(P<0.05),MDA含量极显著下降(P<0.01)。结果表明,在饲粮中添加30 mg/(kg·bw)Res可提高空肠抗氧化能力,缓解AFB1诱导的兔空肠结构损伤,为临床缓解AFB1中毒提供理论依据。

花生红衣中反式白藜芦醇对HEK293T细胞抗氧化的影响

目的:分析花生红衣中的白藜芦醇成分,探究其主要成分反式白藜芦醇(RES)对人胚胎肾细胞293(HEK293T)抗氧化的影响及其潜在的分子机制。方法:采用超声波辅助酶法提取花生红衣中的白藜芦醇,采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术分析花生红衣中白藜芦醇粗提液的组成成分。通过测定细胞活力,检测RES对HEK293T细胞的最高毒性。通过荧光素酶报告基因试验及免疫印迹试验检测其对Keap1-Nrf2-ARE抗氧化信号通路的影响,以DPPH自由基清除率评价其体外抗氧化能力。结果:HPLC-MS结果表明,花生红衣中含有白藜芦醇苷、白皮杉醇和RES。由于白藜芦醇在自然界中主要以反式白藜芦醇形式存在,因此选择RES进行后续试验。细胞存活力检测结果表明,RES对HEK293T细胞的最高无毒浓度为50μmol/L,体外抗氧化作用呈浓度依赖性。荧光素酶报告基因分析表明,RES显著诱导了ARE介导的转录激活。免疫印迹结果显示,RES能诱导Nrf2介导的3个抗氧化蛋白表达【血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)】表达。此外,DPPH自由基清除率测定结果表明,RES能有效清除DPPH自由基,具有体外抗氧化能力。结论:花生红衣中白藜芦醇的主要成分RES对HEK293T细胞有抗氧化作用,可通过Keap1-Nrf2-ARE信号通路激活潜在的抗氧化活性。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯致人脐静脉内皮细胞氧化损伤及白藜芦醇的修复作用

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的氧化损伤,以及白藜芦醇对该损伤的修复作用。方法:通过CCK8实验筛选DEHP的损伤浓度和白藜芦醇的修复浓度;化学分光光度比色法检测HUVEC丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)的不同表达情况;活性氧荧光探针检测不同处理组HUVEC内活性氧水平;JC-1试剂盒检测不同组HUVEC线粒体膜电位;CCK8实验、Transwell实验、划痕愈合实验观察HUVEC增殖、迁移能力;细胞流式实验、蛋白质印迹实验观察HUVEC的凋亡情况和凋亡相关蛋白的表达。结果:80μmol/L DEHP作用HUVEC 24 h后,细胞增殖能力明显降低(P<0.01),40μmol/L白藜芦醇对细胞无明显毒性;损伤组细胞的丙二醛水平和SOD活性较对照组均明显上升(P均<0.01),修复组丙二醛水平和SOD活性较损伤组均明显下降(P均<0.05);损伤组细胞的活性氧表达较对照组明显上升(P<0.01),修复组较损伤组明显下降(P<0.01);损伤组细胞的线粒体膜电位较对照组明显下降(P<0.01),修复组较损伤组明显上升(P<0.01);损伤组细胞的增殖、迁移、成管能力较对照组明显下降(P均<0.05),修复组较损伤组明显上升(P均<0.05);损伤组细胞的凋亡水平较对照组明显上升(P<0.05),修复组较损伤组明显下降(P<0.05)。结论:DEHP能够通过氧化应激途径抑制HUVEC的增殖、迁移和成管能力,并诱导其凋亡,而白藜芦醇可以有效修复该种损伤。

白藜芦醇对膝骨关节炎模型大鼠关节液中氧化应激和炎症因子的调控作用

背景:膝骨关节炎是临床常见退行性关节疾病,主要表现为慢性炎症和氧化应激反应。白藜芦醇具有抗炎和抗氧化应激的生物作用,因此可对症进行治疗,有望为膝骨关节炎治疗提供新的策略。目的:探讨白藜芦醇通过沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)/叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FOXO1)通路对大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组,每组10只,除对照组外均建立膝骨关节炎模型,分别在造模的第1,4,7天注射4%木瓜蛋白酶溶液与0.3 mol/L半胱氨酸溶液(1∶1混置0.5 h)的混合液20μL。造模成功后1 d开始给药,白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组大鼠经关节腔注射白藜芦醇25 mg/kg或100 mg/kg,对照组和模型组经关节腔注射等体积生理盐水。治疗28 d后,测定4组大鼠膝关节最大活动度;应用放射免疫法和ELISA法检测膝关节液中氧化应激指标和炎症因子水平;番红O-固绿染色分析膝关节中胶原纤维含量;采用Mankin组织学评分分析关节炎病变程度;蛋白质免疫印迹法检测膝关节SIRT1和FOXO1水平。结果与结论:①与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节最大屈伸角度明显增加,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.05);②与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节液中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平显著增加;而丙二醛水平显著下降,且高剂量组明显优于低剂量组(P<0.05);③与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节液炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显下降,且高剂量组明显低于低剂量组(P<0.05);④与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节胶原纤维含量增加,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.05);⑤与模型组比较,白藜芦醇低剂量组和高剂量组大鼠膝关节SIRT1表达水平显著增加,乙酰化FOXO1水平显著下调,且高剂量组变化幅度明显优于低剂量组(P<0.05);⑥提示白藜芦醇可显著改善膝骨关节炎大鼠关节液中的氧化应激和炎症因子水平,缓解关节炎症状,且呈剂量依赖性,可能是通过SIRT1/FOXO1通路实现的。

沉默信息调节因子1靶点在白藜芦醇抗氧化治疗骨质疏松症中的研究进展

骨质疏松症(OP)是骨科常见的慢性疾病之一,以骨量降低和骨结构破坏为特征,骨折是其最严重的并发症,极大地影响患者生活质量。OP发生发展过程中所涉及的生理机制极其复杂,而年龄增长和雌激素不足引起的体内氧化应激水平的上升,是发生OP的一项重要原因。虽然目前治疗骨质疏松的药物众多,但均存在着或轻或重的不良反应,甚至可能加重患者的痛苦。白藜芦醇是一种天然存在的植物化合物,具有抗氧化的性质,能通过多种途径降低体内氧化应激水平,沉默信息调节因子1即为其中一个靶点。本文将综述白藜芦醇激活沉默信息调节因子1后,通过不同机制发挥其抗氧化应激效应治疗OP的研究进展,以期为科研工作者提供新的思路,也为临床医师在治疗OP时提供新的方向。

氧化白藜芦醇抗诺卡菌活性及作用机制

目的探究氧化白藜芦醇(oxyresveratrol,OXY)的抗诺卡菌活性,明确其抗菌效果,同时初步探索其抑制诺卡菌的机制,为筛选新型抗诺卡菌药物提供更多理论基础。方法借鉴纸片扩散法对临床收集的12株诺卡菌进行OXY抗菌活性筛选;通过测定OXY对诺卡菌的MIC值和MBC值,明确其抗诺卡菌活性;通过测定A620的方法,评价OXY对诺卡菌的生长的影响;采用光学显微镜、扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察的方法,明确OXY对诺卡菌形态结构变化的影响;最后通过检测培养液上清中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)和钾离子的含量探索OXY对诺卡菌细胞壁和细胞膜完整性的影响。结果通过借鉴纸片扩散法的筛选发现25和50 mg/mL OXY都能较好地抑制12株诺卡菌的生长,12.5 mg/mL OXY能一定程度上抑制诺卡菌的生长;OXY对12株诺卡菌的MIC值和MBC值分别为0.2和0.4mg/mL;A620的结果表明0.5×MIC OXY和1×MIC OXY都能显著抑制诺卡菌的生长;OXY作用使圣乔治教堂诺卡菌形态发生显著改变,细菌皱缩、变圆、细胞壁变粗糙,细胞发生破裂;OXY还能破坏诺卡菌细胞壁和细胞膜的完整性,上清液中AKP和钾离子含量随着OXY作用浓度的升高而升高。结论OXY具有较好抗诺卡菌活性,其MIC值和MBC值分别为0.2和0.4 mg/mL,OXY可能是通过破坏诺卡菌细胞壁和细胞膜的完整性发挥抗菌作用。

白藜芦醇对H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用

目的研究白藜芦醇(Res)对H_(2)O_(2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤的作用。方法选取一定剂量H_(2)O_(2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤模型,通过检测Res对氧化损伤SH-SY5Y细胞的活力影响,筛选后续试验剂量。分别选取20,10,5,1μmol/L Res处理SH-SY5Y细胞24 h,加入1.2 mmol/L H_(2)O_(2),作用24 h,采用MTT法、生长曲线法测定细胞活力,流式细胞术测细胞周期,HE染色观察细胞形态,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量及细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果1.2 mmol/L的H_(2)O_(2)造成SH-SY5Y细胞氧化损伤,细胞活力降低,细胞周期改变,细胞形态变化,SOD和GSH-Px活力下降,细胞内MDA含量、细胞外LDH活力升高(P<0.01)。与模型组相比,20,10,5μmol/L Res组细胞活力升高,G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞百分率显著升高,S期降低(P<0.01);细胞内SOD和GSH-Px活力上升(P<0.01),MDA含量、细胞外LDH活力明显降低(P<0.01)。结论20,10,5μmol/L Res对H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤有一定的保护作用。

白藜芦醇激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α缓解脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤和细胞凋亡

为揭示白藜芦醇(RES)是否通过介导过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)起到缓解奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)炎性反应,本试验对PGC-lα进行干扰(si-PGC-lα),采用单因素随机试验设计方法,设置si-NC+LPS组(含10μg/mL LPS配制的饥饿培养基)、si-PGC-lα+LPS组(si-PGC-lα干扰片段+含10μg/mL LPS配制的饥饿培养基)、si-NC+RES+LPS组(含10μg/mL LPS以及15μmol/L RES共同配制的饥饿培养基)、si-PGC-lα+RES+LPS组(si-PGC-lα干扰片段+10μg/mL LPS以及15μmol/L RES共同配制的饥饿培养基)。结果发现:si-PGC-lα后加入LPS可显著或极显著上调炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的mRNA相对表达水平和含量(P<0.05或P<0.01),极显著上调氧化因子丙二醛(MDA)的mRNA相对表达水平(P<0.01),显著或极显著上调促凋亡因子B-细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(BAX)的mRNA相对表达水平和bMECs凋亡率(P<0.05或P<0.01),极显著降低抗氧化基因谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的mRNA相对表达水平(P<0.01);而RES可逆转这一反应。当si-PGC-lα后再用RES处理则无法缓解LPS诱导的bMECs产生的氧化应激、炎性反应和细胞凋亡,说明RES是通过激活PGC-1α起到缓解LPS诱导的bMECs炎性损伤和细胞凋亡。由此可见,外源添加RES可通过激活PGC-1α起到缓解LPS诱导的bMECs线粒体损伤、氧化应激、炎性反应并抑制细胞凋亡。

白藜芦醇通过MCU抑制mPTP开放减轻H9c2细胞氧化应激损伤

目的观察白藜芦醇(resveratrol)保护心肌细胞减轻氧化应激损伤的过程是否与线粒体通透性转换孔(mPTP)和线粒体钙离子单向转运蛋白(MCU)相关,并探讨可能的机制。方法H9c2心肌细胞常规培养,随机分为对照组、过氧化氢组、白藜芦醇+过氧化氢组、MCU抑制剂(钌红)+白藜芦醇+过氧化氢组。微板法检测细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western印迹法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78、GRP94和MCU蛋白表达;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子(Ca^(2+))、活性氧(ROS)和mPTP变化。结果与对照组相比,过氧化氢显著增加细胞外液中LDH的含量、GRP78、GRP94和MCU蛋白表达、细胞内Ca^(2+)和ROS含量,显著减少mPTP特异性探针TMRE的荧光强度(均P<0.05)。白藜芦醇明显抑制过氧化氢引起的变化,而钌红显著增强白藜芦醇的作用(均P<0.05)。结论白藜芦醇通过MCU减少细胞内Ca^(2+)超载和ROS生成进而抑制mPTP开放,减轻氧化应激引起的内质网应激损伤,保护心肌细胞。

氧化白藜芦醇通过核因子E2相关因子2信号通路缓解心肌缺血再灌注损伤

目的探讨氧化白藜芦醇(Oxy)在缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌损伤中的保护作用。方法小鼠心肌HL-1细胞培养于DMEM高糖完全培养基作为Ctrl组;通过缺氧6 h/复氧2 h刺激HL-1细胞,建立心肌细胞H/R损伤模型,作为H/R组;Ctrl组细胞在20μM Oxy的DMEM高糖完全培养基预孵育2 h,后进行H/R刺激,作为H/R+Oxy组。通过细胞计数试剂盒-8检测细胞活力;采用蛋白免疫印迹技术检测B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、核因子E2相关因子2(Nrf-2)蛋白表达水平;使用终端尿苷核苷酸末端标记法和烟酸己可碱染色法评估各组细胞凋亡情况;使用实时荧光定量PCR技术分析Nrf-2、血红素加氧酶1(Ho-1)、醌氧化还原酶1(Nqo-1)mRNA表达水平;采用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒,利用酶标仪检测各组细胞内SOD和MDA水平。结果与Ctrl组比较,H/R组细胞活力降低、Bax蛋白升高、Bcl-2蛋白降低、Bax/Bcl-2升高、细胞凋亡数量升高、细胞内SOD水平降低、MDA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组比较,H/R+Oxy组细胞活力升高,Bax蛋白降低、Bcl-2蛋白升高、Bax/Bcl-2降低、细胞凋亡数量降低、细胞内SOD水平升高、MDA水平降低、Nrf-2蛋白升高、Nrf-2、Ho-1、Nqo-1 mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Oxy可抑制H/R诱导的心肌细胞损伤,可能通过激活Nrf-2信号通路发挥抗氧化作用。

酶法提取草莓中白藜芦醇及其抗氧化性研究

以草莓为原料,乙醇为提取剂,采用纤维素酶法,对草莓中白藜芦醇的最佳提取工艺条件以及草莓白藜芦醇的抗氧化性进行了研究。采用单因素实验,考察了提取剂浓度、pH值、酶添加量、料液比对草莓中白藜芦醇的提取量的影响,同时采用正交试验对白藜芦醇的提取工艺条件进行优化。结果表明:草莓白藜芦醇提取的最佳工艺为提取剂浓度60%,pH值=5,酶添加量25 mg,料液比1∶40(g/mL),提取量最高为5.23 mg/g。草莓白藜芦醇对DPPH自由基和·OH自由基清除活性较强,最高清除率分别为77.1%和70.2%,极具开发潜力。

白藜芦醇对自发性高血压大鼠脑基底动脉重构的影响

目的:探究白藜芦醇对高血压诱导的大鼠脑血管重构的逆转作用,并探讨其作用机制。方法:6周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)适应性喂养,WKY正常饲养大鼠作为对照组,正常喂养SHR大鼠分为模型组、阳性药物组、白藜芦醇高剂量组、白藜芦醇低剂量组,每组8只。2周后测量各组大鼠尾动脉收缩压,苏木精-伊红(HE)染色检查大鼠基底动脉病理改变,提取基底动脉原代平滑肌细胞,胆囊收缩素八肽(CCK-8)、Transwell及划痕实验评估各组细胞增殖迁移与侵袭能力变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠静脉血中氧化应激因子变化,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞增殖相关磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)通路蛋白和上皮间质转化及增殖相关Snail蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠基底动脉血管横断面积更小,基底动脉血管壁厚度增加,细胞迁移能力、增殖能力与侵袭能力增加,血液中丙二醛(MDA)含量升高,超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及过氧化氢酶(CAT)活性降低,磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)以及Snail蛋白表达水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,阳性药物组、白藜芦醇低剂量组与白藜芦醇高剂量组基底动脉血管横断面积增加,基底动脉血管壁厚度下降,细胞增殖能力、迁移能力与侵袭能力下降,血液中MDA含量降低,SOD、GSH、CAT升高,p-PI3K、p-AKT以及Snail蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:白藜芦醇可以通过抑制PI3K-AKT信号通路的激活来改善SHR大鼠高血压病理条件诱导的脑基底动脉血管重构及细胞功能异常。

虎杖中白藜芦醇提取工艺的优化及其抗氧化性

利用单因素和响应面试验考察了超声功率、提取时间、乙醇体积分数和料液比对从虎杖中提取白藜芦醇工艺的影响。利用大孔吸附树脂和反相柱层析联合分离及高效液相色谱对产物进行鉴,并对细胞内外抗氧化性和对紫外照射成纤维细胞的保护作用进行试验。白藜芦醇最佳提取条件为超声功率496W、提取时间33min、乙醇体积分数64%、料液比1∶17,最佳条件下提取率为4.80mg/g,白藜芦醇纯度达99.90%。白藜芦醇为2.5和0.5mg/mL时,DPPH和羟自由基清除率最高,分别为94.92%和94.65%,IC_(50)分别为0.926和0.165mg/mL。白藜芦醇能显著降低紫外照射皮肤成纤维细胞内SOD、CAT、GSH和MDA。

白藜芦醇通过SIRT1/PGC-1α影响牛肌管细胞线粒体生物发生和肌纤维类型转化

以牛肌管细胞为研究对象,通过添加白藜芦醇探究其对牛肌管细胞肌纤维类型转化的影响及其作用机制。通过噻唑蓝法和比色法对细胞活力和相关代谢酶活力进行测定,对成肌调节因子、肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)以及线粒体生物发生相关分子的基因和蛋白表达量进行测定。结果表明,白藜芦醇处理显著提高了Myf5、Myf6、MyoG和MyoD的基因表达水平(P<0.05),促进了牛肌管细胞分化。白藜芦醇处理显著提高了慢肌纤维蛋白(slow MyHC)的表达,降低了快肌纤维蛋白(fast MyHC)表达,同时上调了MyHC I和MyHC IIa基因表达水平,下调了MyHC IIx和MyHC IIb基因表达水平(P<0.05)。白藜芦醇还能显著提高牛肌管细胞中的琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性,降低乳酸脱氢酶活性(P<0.05),此外,白藜芦醇显著提高了沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子(nucleus respiratory factors,NRF)-1、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。添加SIRT1抑制剂6-氯-2,3,4,9-四氢-1H-咔唑-1-甲酰胺(1H-carbazole-1-carboxam,EX527)后,显著削弱了白藜芦醇诱导的肌纤维类型转化(P<0.05),白藜芦醇对SIRT1、PGC-1α、NRF-1和TFAM的基因和蛋白表达的促进作用被EX527显著削弱(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进线粒体生物发生,进而促进牛肌管肌纤维类型的转化。