复合酶解提取牡蛎糖胺聚糖及其降血糖活性

以福建牡蛎为原料,采用单因素试验和响应面法优化试验确定牡蛎糖胺聚糖复合酶解提取的工艺条件,并对其α-葡萄糖苷酶抑制活性进行研究。结果显示,当料液比为1∶15(g/mL)、起始pH8.0、复合酶添加量2.20%、复合酶质量比(中性蛋白酶∶胰蛋白酶)1∶1.20、酶解温度50℃、酶解时间4 h时,可以达到对牡蛎糖胺聚糖最佳的提取效果,提取率为(0.71±0.02)%。体外α-葡萄糖苷酶的抑制结果显示,牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用在0.2~1.0 mg/mL时呈正相关,当牡蛎糖胺聚糖样品浓度为1.0 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率可达到42.65%,表明其具有一定的降血糖功效。

牡蛎糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨牡蛎糖胺聚糖(O-GAG)对Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。方法:采用巨噬细胞体外培养的方法,观察每组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、胸腺指数和脾指数。结果:随O-GAG浓度的增加,腹腔巨噬细胞吞噬能力显著增强,与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。胸腺指数ACV和O-GAG低、中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。脾脏指数O-GAG中、高剂量组与正常对照组比较,差异有显著意义(P<0.05或0.01),O-GAG高剂量组与病毒组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论:牡蛎糖胺聚糖能显著提高Ⅰ-型单纯疱疹病毒感染小鼠胸腺指数和脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力,具有免疫增强作用。

牡蛎糖胺聚糖对H_2O_2所致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的了解牡蛎糖胺聚糖（O-GAG）对过氧化氢所致血管内皮细胞（VECs）氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,建立H2O2诱导的血管内皮细胞损伤模型,实验分为正常对照组、损伤模型组（过氧化氢50 mg/L）、肝素组（肝素200 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG保护组（O-GAG 10、50、100、200、400、800 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG对照组（O-GAG 100、200、400 mg/L）。采用噻唑蓝（MTT）比色法观察O-GAG对血管内皮细胞增殖活性的影响,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与正常对照组相比,损伤模型组细胞的增殖活性和SOD的活活性均明显降低（F=137.23、135.40,q=5.26、5.34,P〈0.01）,而O-GAG对照组（100、200 mg/L）的细胞增殖活性明显增高（q=3.40、3.81,P〈0.05）。与损伤模型组相比,O-GAG各保护组（50-800 mg/L）细胞增殖活性明显增加（q=3.40-5.23,P〈0.05、0.01）,SOD活性明显升高（q=4.46-5.07,P〈0.01）。结论O-GAG对过氧化氢所致血管内皮细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与增加细胞内SOD活性有关。

近江牡蛎糖胺聚糖的免疫调节活性研究

以近江牡蛎全脏器为原料提取近江牡蛎糖胺聚糖,对其理化性质和免疫调节活性进行研究。采用柱层析法分离纯化近江牡蛎糖胺聚糖得到纯化级分;用高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)分析其理化性质;采用小鼠体内注射环磷酰胺(CTX)法建立免疫抑制动物模型,测试其对小鼠的非特异性免疫、体液免疫的影响;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞免疫和自然杀伤细胞(NK细胞)活性;采用ELISA法检测肿瘤坏死因子TNF-α、干扰素IFN-γ、小鼠白细胞介素IL-2的含量;Griess法测定NO含量。结果表明近江牡蛎糖胺聚糖纯化级分CGIa、CGIIa是由糖醛酸、氨基葡萄糖按一定比例构成,含有硫酸基,相对分子量分别为5.17×105 Da、2.64×105 Da,IR分析显示,CGIa和CGIIa都具有糖胺聚糖的特征吸收。牡蛎糖胺聚糖对正常小鼠免疫器官指数、抗体生成数和血清溶血素、细胞免疫、单核巨噬细胞、NK细胞杀伤活性的影响均为阳性,表明其具有免疫增强功能。CGIa和CGIIa能促进正常小鼠免疫细胞分泌TNF-α、IFN-γ、IL-2和NO细胞因子。免疫功能的增强可能是通过促进细胞因子的分泌实现的。

近江牡蛎糖胺聚糖降血糖及抗凝血活性研究

以近江牡蛎糖为原料,经酶解制得牡蛎糖胺聚糖粗制品,进行体外降血糖及抗凝血活性研究。根据不同浓度牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用效果,选出抑制作用效果最佳的浓度,测定在不同反应时间的抑制作用效果以及对酶的动力学测定;采用鲫鱼血作为血浆,以体外抗凝血原时间和抗凝血复钙时间来进行牡蛎糖胺聚糖的体外抗凝血评价。结果表明:牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶活性具有一定抑制作用,最佳浓度为0.4 mg/mL,抑制率最高达到43.68%;作用时间10min抑制率达到最大,抑制率为66.7%;由动力学试验判断出牡蛎糖胺聚糖对α-葡萄糖苷酶的抑制类型为反竞争性抑制;牡蛎糖胺聚糖浓度为1 mg/mL时,抗凝血原时间与阳性对照肝素钠(0.1 mg/mL)的抗凝血原时间等效,同时使凝血的复钙时间的增加,呈现出非常好的抗凝血效果及性能。