长链非编码RNA BC002811对胃癌细胞活性、细胞间质转化及p27kip1活化的影响

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA) BC002811对胃癌细胞活性、细胞间质转化及p27kip1活化的影响。方法 :收集本院原发性胃癌手术切除样本50例,采用TaqMan RNA试剂盒检测BC002811的相对表达量。将胃癌细胞株HGC-27细胞培养及转染后分为HGC-27组(无转染的HGC-27细胞)、BC002811-NC组(HGC-27细胞+BC002811 siRNA-NC)、BC002811组(HGC-27细胞+BC002811 siRNA);HGC-27组、空载体组(HGC-27细胞+p27kip1空质粒)、p27kip1组(HGC-27细胞+p27kip1质粒);HGC-27组、BC002811+空载体组(HGC-27细胞转染BC002811+p27kip1空质粒)、BC002811+p27kip1组(HGC-27细胞转染BC002811+p27kip1)。Transwell分别检测各组HGC-27细胞侵袭、转移能力,采用免疫印迹检测HGC-27细胞vimentin、E-cadherin蛋白表达,采用qRT-PCR检测HGC-27细胞BC002811、p27kip1表达。结果 :与胃癌组织比较,癌旁组织BC002811的表达显著降低。与HGC-27组比较,BC002811组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高,HGC-27组与BC002811-NC组差异无统计学意义。与HGC-27组比较,p27kip1组HGC-27细胞的侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高,HGC-27组与空载体组差异无统计学意义。与HGC-27组比较,BC002811+空载体组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高;与BC002811+空载体组比较,BC002811+p27kip1组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高。Pearson相关分析结果显示,在HGC-27细胞侵袭、迁移中,BC002811与vimentin水平呈负相关性,与E-cadherin水平呈正相关;vimentin与E-cadherin水平呈负相关性。结论 :在胃癌细胞中BC002811-siRNA激活p27kip1水平、抑制胃癌细胞的迁移及侵袭,其作用机制可能与调控胃癌细胞间质转化蛋白表达相关。

SPY1和p27^(kip1)在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:探讨SPY1(Speedy A1)和p27^(kip1)(cyclin-dependent kinase inhibitor 1B,p27)在子宫内膜癌中的表达情况及其临床意义。方法:采用生物医学信息数据库分析子宫内膜癌中SPY1、p27^(kip1) mRNA表达水平;采用免疫组织化学染色法及蛋白质印迹法检测子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中SPY1、p27^(kip1)蛋白的表达水平,并分析其表达与患者临床病理参数、激素受体、癌症基因组图谱分子分型的关系,以及两者之间的相关性。通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线,应用Cox比例风险模型分析影响子宫内膜癌患者的预后因素。结果:SPY1在子宫内膜癌组织中的蛋白质表达水平显著高于不典型增生的子宫内膜及正常子宫内膜组织(P=0.009),p27kip1在子宫内膜癌组织中的蛋白质表达水平显著低于不典型增生的子宫内膜及正常子宫内膜组织(P=0.001);SPY1蛋白表达与肿瘤病理分级(P=0.023)、国际妇产科协会(The International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)癌分期(P=0.003),肌层浸润深度(P=0.010)及淋巴结转移(P<0.001)有关,p27kip1蛋白表达与肿瘤病理分级(P=0.001)、FIGO癌分期(P=0.001)及淋巴结转移(P<0.001)有关;SPY1与p27kip1表达呈负相关(r=−0.563,P<0.001);Kaplan-Meier预后分析表明SPY1高表达患者生存率低于低表达患者(P<0.05),p27kip1高表达患者的生存率高于低表达患者(P<0.05)。Cox单因素及多因素分析表明FIGO癌分期(P=0.023)、病理分级(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.001)及p27kip1表达(P<0.001)可作为子宫内膜癌患者的独立预后指标。结论:子宫内膜癌组织中SPY1蛋白呈高表达,p27kip1蛋白呈低表达,且两者之间呈负相关,可用于评估子宫内膜癌的发生和发展。

2β(3羟丙氧基)骨化三醇对人肝癌细胞周期阻滞及P^(27kip1)蛋白的诱导表达

目的探讨2β(3羟丙氧基)骨化三醇(ED-71)诱导人肝癌细胞HepG2生长抑制和细胞周期G1阻滞,及对抑癌基因P27kip1表达的影响。方法培养HepG2,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察ED-71对HepG2的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,以Western-blot检测HepG2细胞中P27kip1蛋白的表达水平。结果ED-71处理后HepG2的生长缓慢,细胞生长受到明显抑制。细胞阻滞于G1期(80.6±2.6,48.7±3.0,P<0.05),P27kip1蛋白表达水平增强(0.11±0.06,0.67±0.08,P<0.05)。结论ED-71抑制人肝癌细胞株HepG2的生长,诱导人肝癌细胞分化,使细胞阻滞于G1期,可能与ED-71诱导人肝癌细胞中抑癌基因P27kip1蛋白的表达有关。

抑癌基因P^(27kipl)蛋白、癌基因P185蛋白及肿瘤相关抗原SC3A在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨抑癌基因P27kipl蛋白、癌基因P185及肿瘤相关抗原SC3A联合标记在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP方法对66例子宫内膜癌中的P27、P185和SC3A进行检测。结果P27、P185及SC3A在66例子宫内膜癌中的阳性表达率分别为53%、833%及818%。阳性程度与细胞的异型性显著相关,P27蛋白表达与细胞异型性呈负相关。P185与SC3A与细胞的异型性呈正相关。结论同时检测P27、P185及SC3A对提高子宫内膜癌的检出率、判断预后有重要的指导意义。

skp2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系

目的探讨细胞S期激酶相关蛋白(skp)2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系。方法选取2013年5月至2015年1月开滦点医院林西医院收治130例晚期胃癌患者,免疫组化法检测skp2和p27Kip1蛋白表达水平,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨skp2和p27Kip1蛋白表达与晚期胃癌临床预后的关系。结果晚期胃癌组织skp2和p27Kip1阳性表达在不同卡氏功能状态(KPS)评分、肿瘤直径、手术、腹腔淋巴结转移、肝转移、临床分期及组织学分化患者中差异存在统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、化疗、放疗及腹水等指标差异未见统计学意义(P>0.05)。年龄、KPS评分、肿瘤直径、手术、化疗、放疗、腹腔淋巴结转移、肝转移、腹水、临床分期、组织学分级、skp2蛋白表达和p27Kip1蛋白表达水平是晚期胃癌患者5年存活的影响因素。Cox回归分析结果显示,KPS评分(≤60分)、组织学分级(低分化)、腹腔淋巴结转移、skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论晚期胃癌组织中skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌临床预后差的独立危险因素,可作为晚期胃癌治疗方案、预后评估等方面的有效指标。

p27^(Kip1)的生物学功能及其在肿瘤中作用的研究进展

p27^(Kip1)的经典生物学功能是作为细胞周期的关键调控因子,通过结合并抑制细胞周期素-细胞周期素依赖性激酶复合物,控制细胞周期进程。近年来研究发现,p27^(Kip1)参与了许多其它细胞过程的调控,包括转录、细胞迁移与运动及自噬等。研究显示,在儿童多发性内分泌肿瘤、白血病、乳腺癌及儿童神经母细胞瘤中存在p27^(Kip1)编码基因CDKN1B突变或多态性;作为肿瘤抑制因子,儿童急性髓细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤及乳腺癌等肿瘤中p27^(Kip1)表达水平明显下降,并与肿瘤发生、发展、预后相关;而在儿童急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、结肠癌、肺癌等肿瘤中,异常定位于胞浆的p27^(Kip1)则具有促癌功能,促进肿瘤的侵袭和转移。本文综述了p27^(Kip1)的多种生物学功能,并重点阐述其在肿瘤中的重要作用及机制研究进展。

Skp2及p27kip1在原发性胃癌组织的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)及细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物(Cyclin dependent protein kinase inhibitor,p27kip1)在原发性胃癌组织的表达及si-Skp2对胃癌细胞增殖、凋亡和p27Kip1表达的影响。方法组织学实验:临床入组2018年12月~2021年12月唐山市开滦总医院林西医院归档的资料齐全完整的63例原发性胃癌患者,获得患者的癌组织和癌旁组织,通过qPCR对两组患者胃癌组织和胃癌旁组织Skp2和p27Kip1mRNA表达水平进行检测。细胞学实验,将人胃癌细胞SGC-7901分为对照组和si-Skp2组,对照组转染NC质粒,si-Skp2组转染si-Skp2质粒,CCK8法检测各组细胞24 h、48 h和72 h增殖能力,流式细胞分别分析两组细胞细胞存活、早期凋亡和晚期凋亡,Western blot检测两组细胞Skp2和p27kip1蛋白表达水平。结果组织学实验表明,相比于癌旁组织,癌组织中Skp2mRNA表达显著上升,p27Kip1表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞学实验表明,与对照组相比,si-Skp2组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖能力显著降低;细胞存活显著降低、细胞晚期凋亡显著增加(P<0.01),细胞早期凋亡没有显著的统计学差异(P>0.05);Western blot实验表明si-Skp2组细胞Skp2表达显著降低,p27Kip1蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论原发性胃癌组织中Skp2表达显著高表达,p27Kip1显著低表达,si-Skp2具有显著抑制胃癌细胞增殖,促进细胞晚期凋亡的作用,其机制与p27Kip1的调控相关。

Skp2-siRNA对Eca-109食管癌细胞系p^(27kip1)蛋白表达的影响

目的观察通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)使Skp2基因沉默转染后对食管癌Eca-109细胞株中p27kip1表达的影响。方法以Eca-109食管癌细胞系作为实验对象,设计合成针对Skp2的siRNA并进行转染。实验分为转染组、空白对照组、转染对照组、阴性对照组。采用免疫组化方法(SP法)检测各组Eca-109食管癌细胞系p27kip1蛋白表达的情况,采用Imageproplus(IPP)测定累积光密度值(IOD)。每张切片选5个视野,求IOD均值。采用方差分析进行组间均数比较,以p<0.05表示差异有统计学意义。结果①RNAi-Mate转染Eca-109细胞6 h后用荧光显微镜检测,计数转染Eca-109细胞的效率>80%,本实验选此比例作为实验浓度。②经过转染后24 h的细胞开始变圆,生长比同时间正常培养的对照组细胞缓慢,48 h后细胞出现凋亡,有部分细胞脱落,72 h后细胞脱落变多。③免疫组化检测结果显示:转染24 h后p27kip1蛋白表达开始上升IOD值为7.295±0.277、48 h后上升最明显IOD值为9.075±0.880、72 h后p27kip1蛋白表达开始下降IOD值为3.506±0.160,与空白对照组相比较,差异有显著统计学意义(P<0.01,psiRNA=0.000),转染组24 h、48 h、72 h之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论将人Skp2-siRNA转染入Eca-109食管癌细胞系后,能有效通过下调Skp2的表达,而上调p27kip1蛋白的表达。说明Skp2在Eca-109食管癌细胞增殖调控中起到重要作用,RNAi技术有可能作为抑制肿瘤细胞生长的一种手段。

Skp2-P^27kip1通路及其相关凋亡基因在结肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨Skp2和P27kip1蛋白在结肠癌中的表达及其相关性,阐明两者在结肠癌的发生和发展中的作用。方法:应用免疫组织化学SABC法检测50例结肠癌患者癌组织和20例正常结肠组织中Skp2、P27kip1、P53和Bcl-2蛋白的表达,比较不同组织中阳性细胞表达百分比,分析其与结肠癌临床病理参数的相关性。结果:与正常组织比较,结肠癌组织中Skp2蛋白阳性表达率增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率降低(P<0.05)。Skp2蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期C和D期结肠癌、低分化结肠癌及伴有淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期A和B期结肠癌、高分化结肠癌及无淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05)。P53和Bcl-2蛋白在低分化结肠癌组织中均高表达(P<0.05)。结肠癌中Skp2与P27kip1的表达率呈负相关关系(r=-0.282,P<0.05),与P53及Bcl-2蛋白阳性表达率分别呈正相关关系(r1=0.345,r2=0.231,P<0.01)。结论:Skp2和P27kip1蛋白的异常表达参与了结肠癌组织的分化、浸润和转移,相关凋亡基因P53及Bcl-2蛋白表达上调可能是其作用机制之一。

S相激酶相关蛋白和P27kip1蛋白表达与胃癌临床病理特征的相关性研究

在本次研究中主要分析细胞5相激酶相关蛋白以及P27kip1与胃癌的临床关系。方法 本次研究中针对67例临床诊断为胃癌的患者,利用免疫组化S-P法检测Skp2和P27kip1蛋白的表达情况,结果 在胃癌患者中Skp2蛋白表达率达33.33%,而对于正常患者来说,胃组织Skp2蛋白表达率为10.73%,两组数据具有明显统计差异。除此之外,根据研究发现Skp2蛋白阳性表达率与患者的肿瘤大小、年龄,性别以及病灶位置无明显关系,但与患者的肿瘤分化程度具有紧密联系。Skp2与P27kip1的表达是呈现负相关关系的。结论 临床上Skp2异常表达会从一定程度上加速细胞周期转化,以促进胃癌症状发生,在胃癌发生中,泛素-蛋白酶体途径发挥重要作用。

胃癌组织中p27^(KIP1)和MMP-9的表达及其临床意义

目的 :探讨 p2 7KIP1和MMP 9在胃癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 5 6例胃癌中 p2 7KIP1和MMP 9蛋白的表达。结果 :p2 7KIP1和MMP 9蛋白在胃癌中的阳性率分别为 4 6 4 %和 5 3 6 %。p2 7KIP1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴结转移和浸润深度有关 (P <0 0 5 ) ,MMP 9的表达只与胃癌的Lauren分型、淋巴结转移和浸润深度有关 (P <0 0 5 ) ,而与分化程度无关 (P >0 0 5 )。结论 :p2 7KIP1蛋白低表达参与了胃癌的发展 ,MMP 9可能在胃癌的侵袭和转移中发挥作用。

p27^(kip1)真核表达载体的构建及其对人胆管癌细胞生长的影响

目的：构建p27^(kip1)真核表达载体并进行基因转染，研究其对人胆管癌细胞生长特性的影响。方法：将人p^(27kip1) cDNA克隆至真核表达载体pClneo的Not I酶切位点中，然后应用DOTAP脂质体将重组质粒转染人胆管癌QBC939细胞中，用G418筛选抗性细胞克隆，采用PCR、RT－PCR和Western印迹法检测外源性目的基因在靶细胞基因组中的整合及表达，以及转基因细胞对裸鼠致瘤性能力的改变。结果：成功构建p^(27kip1)基因真核表达载体，并将其导入QBC939细胞中。经G418筛选得到稳定表达p^(27kip1)基因的细胞株，p^(27kip1)基因转染细胞生长速度明显减慢，并出现分化的迹象，其裸鼠致瘤性能力明显降低。结论：p^(27kip1)基因具有抑癌基因的作用，在未来胆管癌的基因治疗中可能具有应用前景。

AKT-p27^(Kip1)-Cyclin E在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨AKT、p27Kip1与CyclinE表达在胃癌发生发展中的意义.方法:收集2008-01/2010-01湘潭市第一人民医院和南华大学附属南华医院的活检标本和胃癌手术切除标本,包括正常胃黏膜组织14例(胃镜活检标本)、非典型增生胃组织10例(胃镜活检标本)、胃癌组织94例、癌旁组织49例,淋巴结转移胃癌组织35例,制作成组织芯片,每个蜡块设计5×10点阵,阵列的最后一排的最后一孔为空白标记,确定方位顺序.采用免疫组织化学染色,检测胃组织芯片中AKT蛋白、p27Kip1蛋白磷酸化及CyclinE蛋白表达.方向.结果:与正常胃黏膜、癌旁和非典型增生组织相比,AKT蛋白磷酸化和CyclinE蛋白在原发癌、淋巴结转移癌中表达升高(AKT:85.1%,85.7%vs14.3%,26.5%,30.0%;CyclinE:85.1%,82.9%vs14.3%,34.7%,20.0%,均P<0.01),而p27Kip1蛋白磷酸化水平降低(22.3%,17.1%vs71.4%,44.9%,40.0%,P<0.01);与正常胃黏膜组织比较,AKT蛋白磷酸化在非典型增生组织中表达上调(P=0.26).结论:AKT、p27Kip1蛋白磷酸化及CyclinE蛋白表达与胃癌的发生发展有关,随着AKT蛋白磷酸化及CyclinE蛋白表达水平的升高,p27Kip1蛋白磷酸化水平降低.

ERCC1、P27^(kip1)、CyclinE在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察ERCC1、P27kip1、CyclinE在胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生、发展中可能的作用及临床意义。方法采用免疫组织化学方法 (EliVisionTM二步法)检测手术切除的45例胃癌组织和10例正常胃组织中ERCC1、P27kip1、CyclinE的表达情况,并采用χ2检验和Pearson列联相关方法 ,分析ERCC1、P27kip1、CyclinE这三个指标与胃癌临床病理参数的关系及其三个指标的相关性。结果胃癌组织中ER-CC1、P27kip1、CyclinE阳性率分别为31.1%、35.6%、55.6%,ERCC1在胃癌组织中阳性率显著低于对照组(P<0.05);P27kip1在正常胃组织表达高于胃癌组、CyclinE在胃癌组表达高于正常对照组,两者差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌中ERCC1、P27kip1、CyclinE表达与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、临床病理分期有关(P<0.05),但与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度无关(P>0.05);P27kip1、CyclinE之间存在负相关。结论 ERCC1、P27kip1的低表达、CyclinE的高表达与胃癌的发生、发展密切相关;ERCC1、P27kip1、CyclinE的表达水平可用于胃癌的诊断、鉴别及预后的判断;P27kip1与CyclinE蛋白在胃癌组织中表达成负相关,ERCC1与P27kip1、CyclinE蛋白的表达无相关性。

p27kip1复制缺陷腺病毒重组体的构建与鉴定

目的 :构建含人细胞周期依赖激酶抑制剂p2 7kip1基因的重组腺病毒载体 ,为采用p2 7kip1cDNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法 :将人p2 7kip1cDNA插入到穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下 ,即pAd p2 7kip1。后者与pJM17通过脂质体共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒Ad p2 7kip1。结果 :p2 7kip1cDNA成功地插入了pACCMVPLPA载体 ,以重组病毒基因组DNA为模板 ,同时扩增出了 2 75bp的p2 7kip1基因片段和 86 0bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了Ad p2 7kip1的正确性。病毒滴度为 1.2 4× 10 1 2 pfu ml。结论 :成功构建了携带人p2 7kip1基因的腺病毒Ad p2 7kip1,为采用p2 7kip1cDNA途径防治消化道肿瘤的在体。

p27Kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究

目的构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响。方法设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照。转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK。转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞。转染后48h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况。结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功。3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖。结论成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体。

胶质瘤组织中EGFR、p27^(kip1)的表达变化及意义

目的观察胶质瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)和p27kip1的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测60例胶质瘤组织、5例正常脑组织中EGFR和p27kip1。结果 60例胶质瘤患者中有39例表达EGFR,20例表达p27kip1。EGFR在正常脑组织中无表达,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为52.4%、60.9%、87.5%(P<0.05);p27kip1在正常脑组织中表达率为80.0%,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为57.1%、26.1%、12.5%(P<0.05)。EGFR表达与胶质瘤病理分级呈正相关(r=0.426,P<0.05),p27kip1表达与胶质瘤病理分级呈负相关(r=-0.325,P<0.05)。结论 EGFR、p27kip1表达与胶质瘤的恶性程度有关,其表达异常可能在肿瘤形成中起促进作用。

胶质瘤组织中CTGF mRNA和p27 kip1 mRNA的表达及意义

目的观察人脑胶质瘤组织中结缔组织生长因子(CTGF)和p27 kip1的表达变化,探讨其与胶质瘤发生发展的关系。方法采用荧光实时定量PCR技术检测47例脑胶质瘤组织(Ⅰ～Ⅱ级23例,Ⅲ～Ⅳ级24例)和25例正常脑组织中CTGF mRNA和p27 kip1 mRNA,分析其表达水平和肿瘤级别的关系。结果胶质瘤组织中CTGFmRNA的表达均明显高于、p27 kip1 mRNA的表达明显低于正常脑组织(P均<0.01),Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中CTGF mRNA的的表达显著高于、p27 kip1 mRNA的表达显著低于Ⅰ～Ⅱ级(P均<0.01),胶质瘤组织CTGF mR-NA与p27 kip1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.281,P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中CTGF mRNA和p27 kip1mRNA的表达异常,且两者呈负相关关系,这可能与胶质瘤的发生发展有关。

p27^(Kip1)基因启动子区的生物信息学分析

目的生物信息学的发展为通过在线软件预测基因启动子的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学在线软件预测p27Kip1基因启动子功能。方法获取细胞周期调控因子人p27Kip1启动子全长序列,利用多种在线相关软件预测出甲基化部位和转录因子结合部位。结果该基因启动子序列全长为3568 bp,核苷酸数据库(Gen-Bank)登录号为E26053。p27Kip1启动子序列中CpG岛存在于2544~2845 bp、2876~3511 bp处,CpG岛的存在会抑制p27Kip1启动子的转录。p27Kip1启动子共有16个转录因子。结论基因启动子相关生物信息学的研究,提高了针对启动子的研究效率,并为预测基因启动子的功能研究提供了重要信息。

昆布多糖硫酸酯对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响

目的:研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3的作用,以及对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、50、100、200μg/ml浓度的LAMS作用于PC-3细胞,用WST-8法检测其对细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察PC-3细胞形态的变化,RT-PCR和Western印迹检测细胞增殖、凋亡相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达。结果:LAMS能抑制PC-3细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同浓度LAMS诱导PC-3细胞出现剂量依赖性S期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后凋亡率增加,并出现凋亡的形态学改变,相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达呈剂量依赖性增加。结论:LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S期阻滞和凋亡,PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达明显增加,可能是其抑制前列腺癌生长的机制之一。