丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调p^21WAF1基因mRNA的表达

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病急变期细胞株(K562细胞)细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法:利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况;利用RT-PCR方法检测p21WAF1基因的mRNA的表达。结果:VPA引起K562细胞凋亡增加[(11.47±0.25)%vs(4.77±0.40)%,(P<0.05)]和细胞周期阻滞在G0/G1期[(82.30±9.41)%vs(40.13±2.12)%,(P<0.05)]。同时处理后的细胞中p21WAF1基因mRNA的表达增加[(1.65±0.91)vs(0.25±0.04),P<0.05]。结论:VPA可能通过上调p21WAF1基因,导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。

人脑星形细胞瘤P^(21WAF1)/CIP1的表达与P^(53)、MDM2及细胞增殖指数间的关系

目的 探讨P^(21)、P^(53)和MDM2表达与人脑星形细胞瘤发生、发展及与细胞增殖指数间的关系。方法 用免疫组化技术检查41例石蜡包埋的人脑星形细胞瘤标本P^(21)、P^(53)和MDM2蛋白的表达和由增殖细胞核抗原（PCNA）反映的细胞增殖程度，同时用RNA原位杂交技术检测24例新鲜人脑星形细胞瘤标本的p21 mRNA表达情况。结果p21 mRNA原位杂交检查中无论是高级别肿瘤组或低级别肿瘤组，表达均有明显的差异。免疫组化检查中P^(21)、P^(53)、 MDM2和PCNA的阳性率分别为75．6%、68．3%、65．9%和100%。P21蛋白表达在高级别肿瘤中较高(P ＝ 0．001)，且与细胞增殖指数明显相关，但与P^(53)表达和MDM2表达无明显相关。P^(53)表达与肿瘤组织学分级无关(P ＝0．424)，但与细胞增殖指数明显相关。MDM2表达与肿瘤组织学分级无关(P ＝ 0．812)，与细胞增殖指数亦无明显相关性。多元线性逐步回归分析表明，细胞增殖指数(PCNALI)和P21标记指数与肿瘤组织学分级有密切关系(P ＝ 0．000和P ＝ 0．001)。结论 （1）p21 mRNA和P21蛋白在人脑星形细胞瘤中过度表达,其与细胞增殖指数相关,但与P^(53)表达无关,表明可能有不依赖于P^(53)的通路诱导P^(21)表达。仅有P^(21)过度表达对抑制肿瘤生长是不够的,还需要PCNA参与；（2）P^(53)?

P^(21)WAF1/CIP_1、CyclinE、PCNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达与临床意义

目的 :探讨P2 1WAF1/CIP1、CyclinE、PCNA在恶性卵巢上皮性肿瘤发生、发展中的作用。方法 :应用免疫组化S P法检测P2 1WAF1/CIP1、CyclinE、PCNA在 2 0例良性、10例交界性、5 5例恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达 ,并分析它们与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理指标的关系。结果 :(1)P2 1WAF1/CIP1在良性、交界性至恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达逐渐降低 (P <0 .0 1) ;CyclinE、PCNA的表达结果则相反 (P <0 .0 1,P <0 .0 1) ;(2 )在卵巢上皮癌中P2 1WAF1/CIP1与CyclinE、PCNA的表达呈负相关 (P <0 .0 5 ,r =- 0 .196;P <0 .0 0 1,r=- 0 .2 6) ;CyclinE与PCNA的表达呈正相关 (P <0 .0 5 ,r =0 .13) ;(3)P2 1WAF1/CIP1表达与卵巢上皮癌的早期、高中分化、无淋巴转移、无腹水均有关 (P <0 .0 5 ) ;CyclinE则相反 (P <0 .0 5 ) ;PCNA的表达阳性率与低分化、有淋巴转移均有关系 (P <0 .0 5 ) ,而与临床分期、有无腹水无关 (P >0 .0 5 ) ,但强阳性率在晚期、有腹水组明显高于早期、无腹水组 (P <0 .0 5 )。结论 :P2 1WAF1/CIP1低表达。

cyclinE、P^(21WAF1/CIP1)及MMP-2蛋白在甲状腺癌中的表达及意义

甲状腺癌是临床上常见的内分泌性恶性肿瘤,占全身恶性肿瘤的1%～2%,其发病率呈上升趋势.甲状腺癌的组织类型较多,但其生物学行为及预后不一,因而寻找一些能反映甲状腺癌的发生及其生物学行为的指标,可提高临床诊疗水平,判断预后.

结节性甲状腺肿与甲状腺癌P^(21WAF1)蛋白和层粘连蛋白的表达

目的研究P21WAF1蛋白和层粘连蛋白(LN)在结节性甲状腺肿中的表达水平及意义。方法应用免疫组化SP法检测50例结节性甲状腺肿、40例正常甲状腺组织、40例甲状腺癌标本中P21WAF1蛋白和LN的表达。结果P21WAF1蛋白和LN表达阳性率在结节性甲状腺肿分别为(52.14±29.02)%,(26.45±15.89)%;正常甲状腺组织为(87.01±7.21)%,(20.45±10.2)%;甲状腺癌为(14.20±12.04)%,(60.12±23.77)%;三者比较差异有显著性(P<0.01)。甲状腺癌P21WAF1和LN的表达呈负相关(r=-0.610,P<0.05)。结论P21WAF1和LN联合测定对鉴别良恶性甲状腺肿瘤有一定的临床价值。

p^(21)/waf1调节血管紧张素Ⅱ的抗增生作用

为了研究血管紧张素 (Ang )的抗内皮细胞增生作用及其分子生物学调节机制 ,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第 3代 ,用 Ang 培养并在不同时间计数细胞密度。用 TUNEL 或 EL ISA方法证明 Ang 或 CGP42 112 A诱导内皮细胞凋亡。用 RT- PCR和 Western Blot检测 p2 1 / waf1m RNA和 P2 1 蛋白的表达并测定条带的光密度。结果表明 ,在 Ang 培养后不同时间 ,细胞密度比对照减少 30 %左右 (P<0 .0 1)。Ang 作用后可以诱导典型的凋亡 ,阳性率极显著高于阴性对照组并具有剂量依赖性。Ang 组或 CGP42 112 A组的 p2 1 / waf1m RNA表达分别是对照组的 (4 73.6 9± 39.97) %和 (391.5 8± 48.2 4) %(P<0 .0 1)。Ang 组的 P2 1 蛋白表达比对照组极显著地增加并具有时间依赖性。认为 Ang 具有抗内皮细胞增生作用 ,其细胞内机制是同时诱导凋亡和 p2 1 / waf1m RNA与 P2 1 蛋白的高表达 ,使细胞发生 G1 期阻滞 ,增殖受抑。

电磁脉冲对犬晶状体上皮细胞P^(21WAF1)表达的影响

目的 观察电磁脉冲 (Electromagneticpulse ,EMP)对犬晶状体上皮细胞P2 1WAF1表达水平的影响。方法 6× 10 4V/m场强的EMP辐射家犬 1～ 10次 ,应用免疫组化、原位杂交和图像分析技术对晶状体上皮细胞P2 1WAF1蛋白及mRNA表达水平进行检测。结果 EMP辐射可抑制晶状体上皮细胞的正常分裂 ,抑制作用随照射次数的增加而加强。辐射 10次组P2 1WAF1表达明显升高 (P <0 0 5 ) ,导致上皮细胞增殖延缓。P2 1WAF1蛋白与mRNA表达同步且一致。结论 高场强大剂量的EMP辐射可抑制晶状体上皮细胞的正常增殖。

P^(21/waf1/cip1)在U937细胞分化过程中的表达

目的 :探讨 P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化中表达情况。方法 :用佛波脂 ( PMA)诱导 U937细胞向单核 -巨噬细胞分化 ,经流式细胞术测定细胞 P2 1/ waf1/ cip1基因表达及细胞周期的变化。用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化。结果 :U937细胞向单核 -巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁 ,呈现了 P2 1/ waf1/ cip1高度表达 ,同时细胞周期停滞于 G1和 G2 /M期 ,无细胞凋亡。结论 :P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化过程中有高表达 ,并伴随细胞周期变化。

人脑胶质瘤组织中P^(21WAF/CIP1)的异常表达及其病理学意义

目的探讨人脑胶质瘤组织P21WAF/CIP1的表达水平与胶质瘤恶性度的关系。方法免疫组化方法检测人脑胶质瘤标本41例,并对其表达水平进行评价。结果P21WAF/CIP1表达水平随胶质瘤恶性程度的升高呈下降趋势,但与组织学分级无相关性,全部受检标本P21WAF/CIP1染色强度无差异。结论胶质瘤组织P21WAF/CIP1表达呈异质性,与胶质瘤分级无相关性,但可参与胶质瘤的发生、发展。

口腔粘膜白斑发生发展中bcl-2、P^(21 wafl)蛋白的表达

目的 :探讨口腔粘膜白斑发生发展中bcl 2及P2 1wafl蛋白的表达。方法 :利用免疫组织化学技术对 13例正常口腔糊膜、39例口腔粘膜白斑及 46例不同分级鳞癌的bcl 2、P2 1wafl蛋白表达进行研究。结果 :正常口腔粘膜bcl 2均呈阴性 ,不典型增生性白斑bcl 2蛋白阳性表达率为 5 2 .17% ,显著高于单纯增生性白斑 (18.75 % )及Ⅰ、Ⅱ级口腔鳞状细胞癌 (18.18% ,2 2 .2 2 % ,P <0 .0 5 )。正常口腔粘膜P2 1waf1蛋白表达均呈阳性。单纯增生性白斑P2 1waf1蛋白阳性表达率为 75 .0 0 % ,显著高于不典型增生性白斑 (2 6 .0 9% ) (P <0 .0 5 )及口腔鳞状细胞癌 (2 8.2 6 % )(P <0 .0 5 ) ,而P2 1wafl蛋白表达率在不典型增生性白斑和鳞癌之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。P2 1wafl阳性标本阳性细胞计数随组织恶性程度增加而有增高趋势。结论 :bcl 2蛋白表达在口腔粘膜恶性变的较早阶段起主要作用。P2 1waf1表达的下调是口腔白斑发生发展中的较早期事件 ,P2 1waf1表达率综合P2 1waf1阳性细胞计数在口腔粘膜白斑恶变潜能评价方面是一项有用的指标。

转染P21 WAF1基因对BT-325细胞端粒酶表达的影响

目的 :观察外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞的作用 ,探讨p2 1WAF1表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 :经脂质体介导的方法将PCEP -WAF1质粒导入BT - 32 5细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TRAP -PCR -ELISA、TUNEL和电镜等技术检测外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞端粒酶活性和细胞凋亡的作用。结果 :较对照组相比 ,转染外源性p2 1WAF1基因的BT - 32 5细胞端粒酶表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象。结论 :外源性p2 1WAF1基因的表达可促进BT - 32 5细胞端粒酶活性降低 ,诱发细胞显著凋亡。提示端粒酶的活性表达可能与细胞周期调控存在密切联系。

高功率微波对兔眼晶状体上皮细胞P^(21WAF1)及Cyclin E表达的影响

目的 观察高功率微波 (highpowermicrowave ,HPM)对实验动物兔眼晶状体上皮细胞P2 1WAF1 、CyclinE表达水平的影响 ,以探讨防护HPM眼损伤的机理及方法。方法 采用功率密度为 80 0mW cm2 的微波持续照射青紫兰兔眼组织 2 0min ,并于微波照射后 3 0d ,90d ,180d及 3 60d时应用免疫组化、原位杂交及图像分析技术对兔眼晶状体上皮细胞P2 1WAF1 、CyclinE蛋白及其mRNA表达水平进行检测。结果 HPM照射可影响晶状体上皮细胞的正常增殖过程 ;当HPM照射后 3 0d时 ,P2 1WAF1 表达明显升高 ,对细胞增殖周期抑制作用增强 ;CyclinE表达则明显降低 ,其正性调节细胞生长作用减弱 ;当HPM照射后 90 ,180及 3 60d时 ,微波照射组上述各指标与对照组比较 ,差异均无显著性意义 ,而且各项指标的mRNA表达均与其蛋白表达同步且一致。结论 HPM照射可干扰细胞正常的生长增殖周期进程 ,而晶状体上皮细胞增殖异常可能是导致白内障的重要原因之一。

p21^(WAF1)和p53基因在胆管癌组织中的表达研究

目的 探讨p2 1WAF1、p5 3基因与胆管癌发生发展的关系。方法 采用免疫组化方法 ,检测 48例胆管癌和 8例伴慢性炎症的胆管壁组织中p2 1WAF1、p5 3蛋白表达情况。结果 胆管癌中p2 1WAF1、p5 3阳性表达率分别为 2 5 %和 5 4% ,而伴炎症的胆管组织阳性表达率分别为 88%和 0。p2 1WAF1蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结转移或远处转移以及TNM分期呈显著相关性 ;而p5 3则与这些指标无关 ,与p2 1WAF1蛋白表达无相关性。结论 胆管癌的发生发展可能与p2 1WAF1、p5 3等多基因表达异常有关 ,p2

周期蛋白依赖激酶抑制因子p21^(WAF1/CIP1)在银屑病表皮中高表达

目的探讨 p21~与银屑病发病的关系。方法通过核酸杂交和免疫组织化学的方法检测了12例斑块型银屑病和5例正常人表皮中 p21~的表达。结果银屑病表皮中 p21~的表达位于表皮全层,较正常表皮明显增强,正常人表皮中其表达位于表皮上部。结论 p21~可能与正常表皮细胞的分化关系更密切,在银屑病表皮细胞的异常分化调节中可能发挥作用。

大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化

目的观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点。方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SA-β-gal染色,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测p21WAF1/CIP1/SDI1基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达与定位。结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SA-β-gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05)。免疫荧光结果示p21WAF1/CIP1/SDI1主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强(P<0.05)。结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型。