P—AKT和AgNOR在卵巢上皮性癌表达及意义

目的：探讨P—AKT和AgNOR（Nuclealar Organizer Regions）蛋白在卵巢上皮癌发生发展过程中的作用，为临床治疗提供新的靶目标。方法：对在我院住院105例患者的组织标本，采用免疫组化法和银染色法检测P—AKT和AgNOR的袁达情况。结果：P—AKT、AgNOR蛋白在在正常卵巢组织和卵巢癌两组间存在显著性差异（P〈0．05）。结论：P—AKT及AgNOR在恶性肿瘤中（尤其是晚期肿瘤）组织中的表达均明显升高，提示两者可能促进卵巢上皮性癌的发生和发展。

针刺对卵巢储备功能减退大鼠血清激素及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达的影响

目的:观察针刺对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠血清激素、卵巢形态学变化及卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达的影响,探索针刺治疗DOR的可能机制。方法:18只SPF级SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组和针刺组,每组6只;模型组、针刺组采用腹腔注射环磷酰胺制备DOR大鼠模型,空白组仅腹腔注射同等量生理盐水。造模后针刺组取肾俞、关元、中极、气海、太溪、双侧三阴交和双侧子宫穴进行针刺,每次留针20 min,1次/d,连续21 d。空白组、模型组:仅抓取不进行干预,1次/d,连续21 d。观察比较各组间大鼠的血清激素改变情况,HE染色法观察大鼠卵巢形态学改变、卵巢中各级卵泡及黄体的数目变化,颗粒细胞层厚度改变;免疫组织化学法、Western blot法检测卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组血清FSH、LH水平升高(P<0.05),血清E2、AMH水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中各级卵泡数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中PI3K、Akt及mTOR蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,针刺组血清FSH、LH水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);血清E2、AMH水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中各级卵泡数明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针刺可以有效改善DOR大鼠卵巢储备功能,促进卵泡数量增加。作用机制可能与针刺调节卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达有关。

藏红花素通过PI3K/Akt/GSK-3β通路诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究

目的:探讨藏红花素对人乳腺癌细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法:以人正常乳腺MCF-10A细胞和人乳腺癌MCF-7细胞为受试细胞,分别以不同浓度藏红花素0(空白对照组)、200、400、800 mg/L和LY294002(PI3K特异性抑制剂)15 mg/L干预对数生长期MCF-10A细胞和MCF-7细胞48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验分别检测各组细胞增殖抑制率、细胞克隆能力,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡水平,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶9(cysteine aspartic proteases-9,Caspase-9)、激活型半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(cleaved cysteine aspartate protease-3,Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 related X protein,Bax)蛋白表达。结果:与空白对照组比较,200、400、800 mg/L藏红花素组和LY294002组MCF-10A细胞增殖抑制率、克隆数目、凋亡率,差异均无统计学意义(P>0.05);400、800 mg/L藏红花素组和LY294002组MCF-7细胞增殖抑制率升高、克隆数目降低、凋亡率升高(P<0.01);p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β、Bcl-2表达下调且Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调(P<0.01),磷酸化率p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β降低(P<0.01),Bax/Bcl-2表达比值升高(P<0.01)。与LY294002组比较,800 mg/L藏红花素组MCF-7细胞增殖抑制率升高、克隆数目降低、凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调(P<0.05或P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01),其他指标两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:藏红花素具有诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。

偏痛汤1号对痛敏性偏头痛大鼠BDNF/p-Akt信号途径的影响

目的基于BDNF/p-Akt信号途径研究偏痛汤1号对硝酸甘油(NTG)致偏头痛模型大鼠作用机制的影响。方法采用随机数字表法将40只SD雄性大鼠分为空白组、假手术组、模型组、阳性药组、偏痛汤1号组,每组8只。空白组予正常饮食水饲养,假手术组予颈背部皮下注射生理盐水,其余各组大鼠予颈背部皮下注射NTG。成模后给药1周,同时检测行为学及痛阈值变化。采用ELSIA技术检测外周血浆中白细胞介素-6(IL-6)、脑神经营养因子(BDNF)、一氧化氮(NO)水平。RT-qPCR技术检测大鼠三叉神经节中降钙素基因相关肽(CGRP)、BDNF、蛋白激酶B(Akt)、Bcl-2相关死亡启动因子(BAD)及NO mRNA转录水平。Western blotting技术测定大鼠三叉神经节中BDNF、Akt及p-Akt蛋白表达。结果与模型组比较,偏痛汤1号组大鼠眼眶痛阈上调(P<0.05);血浆BDNF、NO蛋白表达水平下调(P<0.05),IL-6无显著下降趋势(P>0.05);三叉神经节中CGRP、Akt、BDNF mRNA转录水平下调(P<0.05),BAD、NO mRNA转录水平有下调趋势,但无显著差异(P>0.05),Akt、p-Akt与BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.001)。结论偏痛汤1号抑制痛敏性偏头痛的机制与调控BDNF/p-Akt信号途径,下调偏头痛相关因子CGRP、NO、IL-6等表达水平,从而减少突触递质引起的通路活化相关。

基于PI3K/Akt信号通路探讨胃复春对胃癌前病变大鼠的干预作用

目的 观察胃复春对胃癌前病变(Precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)大鼠的干预作用。方法 选取健康SPF级雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分为胃复春组、模型组、对照组,每组各10只,胃复春组给予胃复春灌胃,模型组及对照组给予生理盐水灌胃,1次/d,共灌胃16周。造模成功后,立即处死所有大鼠,按照组别取胃黏膜组织,进行病理组织学观察。其余组织应用RT-PCR法、Western Blot法检测Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2的表达情况。结果 胃复春可以有效的改善PLGC大鼠模型的一般状态、宏观表征等,还可逆转大鼠胃黏膜的病理学状态,从而降低PLGC的发生率;与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2蛋白表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,胃复春组Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2蛋白水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2 mRNA表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,胃复春组大鼠胃黏膜组织Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2 mRNA表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胃复春可通过抑制Akt、p-Akt、NF-κB、COX-2增殖,调控PI3K/Akt信号通路的异常活化,进一步阻断PLGC的发生与发展。

基于PI3K/AKT/FoxO1信号通路探讨湿润烧伤膏对糖尿病大鼠创面EMT过程的作用

目的探究湿润烧伤膏对糖尿病大鼠创面再上皮化过程的促进作用及其机制。方法90只Wistar雄性大鼠用随机数字法分为5组:MEBO组、rb-bFGF组、模型组、对照组、空白组,每组18只。对照组建立急性创面模型;MEBO组、rb-bFGF组、模型组建立糖尿病创面模型。对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水外敷治疗;MEBO组、rb-bFGF组分别予以MEBO和rb-bFGF外敷治疗;空白组只做备皮处理。各组创面于第3、7、14天分别随机取6只大鼠,采集创面组织标本并保存。随后进行Masson染色,观察各组胶原纤维生成及再上皮化情况。免疫荧光、蛋白印迹和qRT-PCR方法检测创面组织FoxO1、E-cadherin及Vimentin等因子表达。结果在造模第7、14天,对照组、MEBO组及rb-bFGF组创面愈合率高于模型组(P<0.05),且创面显示胶原纤维生成及再上皮化情况更好。在造模第3天,MEBO组中AKT蛋白及mRNA表达量高于模型组(P<0.05);第7天,MEBO组及rb-bFGF组中PI3K、AKT、FoxO1、Vimentin蛋白及mRNA表达量高于模型组(P<0.05),E-cadherin、Claudin1则低于模型组(P<0.05);第14天,与模型组相比,MEBO组及rb-bFGF组中AKT、FoxO1、Vimentin蛋白及mRNA表达量降低(P<0.05),E-cadherin、Claudin1表达量升高(P<0.05)。结论湿润烧伤膏能促进糖尿病大鼠创面愈合,其可能作用机制是通过激活PI3K/AKT/FoxO1通路,并影响创面组织中E-cadherin、Claudin1、Vimentin表达及EMT转化过程实现的。

健脾化瘀解毒法对结肠癌裸鼠模型癌及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1表达的影响研究

目的研究健脾化瘀解毒法对结肠癌原位种植瘤癌及癌旁组织中蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化真核细胞起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达的影响。方法建立裸鼠结肠癌模型,随机分为空白组、模型组、健脾益气组、化瘀解毒组、健脾化瘀解毒组、雷帕霉素组及5-氟尿嘧啶组,每组5只。干预各组4周后,检测各组癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平。结果与空白组比较,模型组癌组织与癌旁组织中AKT1、mTOR、p-4EBP1的表达均上调,差异有显著性(P<0.05),且AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平均为癌组织>癌旁组织>正常肠黏膜组织。与模型组比较,健脾化瘀解毒法能在一定程度上抑制结肠癌癌组织及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);健脾益气法、化瘀解毒法均能下调癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白,但其降低水平不如健脾化瘀解毒法。结论健脾化瘀解毒法能够降低AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白的表达,健脾益气法与化瘀解毒法协同增效,以获得最佳疗效。

中药复方金思维含药血清调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对拟阿尔茨海默病细胞模型tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨中药复方金思维含药血清对拟阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)细胞模型tau蛋白磷酸化的影响及作用机制。方法采用Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立拟AD细胞模型,CCK-8法筛选金思维含药血清、PI3K/AKT/GSK-3β通路抑制剂LY294002最佳作用浓度。将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组、金思维低剂量组、金思维中剂量组、金思维高剂量组以及LY294002组。蛋白免疫印迹法检测金思维含药血清对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化以及PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的影响。结果20μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h可建立最佳拟AD细胞模型。相对于正常组,模型组P-AKT显著降低(P<0.05),P-tau显著升高(P<0.01)。相对于模型组,金思维低剂量含药血清组PI3K的表达量显著升高(P<0.05),高剂量含药血清组GSK-3β的表达量显著降低(P<0.05),中剂量和高剂量含药血清组P-tau的表达量显著降低(P<0.01、P<0.001)。加入通路抑制剂LY294002后,P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、GSK-3β、P-tau蛋白的表达量较模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论金思维含药血清可降低拟AD细胞模型tau蛋白磷酸化水平,其机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β通路的激活有关。

乳腺组织中PTEN表达及其与PI3K/Akt信号通路的关系

目的探讨人乳腺癌及正常乳腺组织中抑癌基因PTEN的表达及其可能作用机制。方法应用免疫组化SP法、Western blot及RT-PCR法检测60例乳腺癌和30例正常乳腺组织中PTEN蛋白及mRNA的表达,进一步分析其与Akt和P-Akt表达的相关性。结果免疫组化检测结果显示,PTEN在乳腺癌中的阳性率(20%)显著低于正常乳腺(60%)(P<0.05);Western blot检测结果显示,乳腺癌及正常乳腺组织中PTEN蛋白的相对表达量分别为0.87±0.06、1.38±0.16,两组间差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测显示,乳腺癌及正常乳腺组织中PTEN mRNA的相对表达量分别为0.98±0.07、1.76±0.21,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。60例乳腺癌组织中,PTEN阳性组P-Akt的相对表达量为0.87±0.09,显著低于阴性组(1.76±0.15)(P<0.05),二者间Akt的相对表达量差异无显著性。结论乳腺癌中PTEN表达缺失,可能与PI3K/Akt信号通路相关。

蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低。结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。

磷酸化AKT及Cyclin D1、MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的分析磷酸化AKT(p-AKT)及其下游分子Cyclin D1、MMP-9在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,探讨p-AKT及其下游分子在肺癌发病机制中的作用。方法应用免疫组化的方法,检测80例NSCLC组织及35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT、Cyclin D1和MMP-9的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果p-AKT、Cyclin D1和MMP-9在NSCLC中高表达,阳性率分别为78.8%、76.3%和72.5%,显著高于非肿瘤性肺组织中阳性表达0、0和11.4%(P<0.05)。p-AKT在高中分化腺癌中阳性表达(95.0%)显著高于低分化腺癌的表达(50.0%)(P<0.05),而与患者年龄、性别、组织学类型及鳞癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。CyclinD1、MMP-9表达与淋巴结转移、鳞癌的分化程度有关(P<0.05),MMP-9还与TNM分期有关(P<0.05),p-AKT的表达与Cyclin D1呈正相关(rs=0.787,P<0.01),与MMP-9蛋白表达无关(rs=0.022,P>0.05)。结论在NSCLC中存在AKT的活化,Cyclin D1的高表达可能与AKT的活化有关,MMP-9可能通过其他的调控机制参与了肺癌的发生发展。在NSCLC组织中存在着AKT信号转导通路的激活。

PI3K/Akt信号通路及HIF-1α在胃癌中的表达

目的:探讨PI3K、p-Akt及低氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1a,HIF-1α)在胃癌、癌旁和远癌组织中的表达。方法:收集胃癌切除术患者胃癌、癌旁及远癌组织标本,应用免疫组化法检测PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白的表达。结果:PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白在胃癌组织中表达最强(其灰度值分别为176.3±11.3,158.6±20.1,157.5±12.3),在远癌组表达最弱(196.9±7.4,192.3±8.3,194.2±5.3),在癌旁组表达介于上述两组之间(187.9±5.1,173.9±14.3,176.0±7.4),三组间差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α的表达与PI3K、p-Akt呈正相关(r=0.662,0.674)(P<0.05)。结论:PI3K、p-Akt、HIF-1α在胃癌组织中高表达,且HIF-1α表达与PI3K、p-Akt表达呈正相关。

缺血后适应对糖尿病大鼠再灌注心肌的保护作用及其与P—Akt的关系

目的探讨缺血后适应对糖尿病大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制。方法2周龄健康sD大鼠60只，雌雄不拘，体重250～300g，随机分为6组：空白对照组（N组）；缺血再灌注组（IR组）；缺血后适应组（Post组）；糖尿病大鼠后适应组（Dpost组）；糖尿病大鼠缺血再灌注组（DIR组）；糖尿病大鼠空白组（DN组）。将链脲酶素（STZ，美国Sigma公司）按65nag／kg经大鼠腹腔注射，48h后断尾法连续两次测血糖≥16．65mmol／L，并出现多饮、多食、多尿、体重减轻，脱毛等表现确定糖尿病模型成功。糖尿病模型制作成功后建立离体心脏Langendorff灌注模型，观测心脏冠状动脉灌流量、心肌梗死范围，免疫印迹（westernblot）对P—Akt测定、电镜下观察心肌和线粒体改变。结果糖尿病大鼠血糖浓度平均为（23．15±2．16）mmol／L，非糖尿病大鼠为（4．16±0．31）mmol／L。两组大鼠血糖浓度差异有统计学意义（P〈0．01）。缺血后适应组（Post组、DPost组）较缺血再灌注组（IR组、DIR组）冠状动脉流量（ml／min）明显增加（6．54±1．2、5．6±1．0对3．4±1．0、2．0±1．3），心肌梗死范围（％）明显减少（25．2±2．1、34．2±3．6对47．5±3．5、65．2±4．5），P—Akt的表达明显增强，心肌纤维和线粒体的完整程度明显较好。结论缺血后适应在糖尿病大鼠离体心脏具有显著的保护作用，这一作用可能与Akt激活有关。

PI3K和p-Akt在尖锐湿疣和生殖器鳞癌中的表达

目的:检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/Akt信号转导通路中PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣(CA)和生殖器鳞癌(SCC)组织中的表达。方法:应用免疫组化EnVision二步法对30例CA皮损、30例生殖器SCC和20例健康正常包皮组织中PI3K和p-Akt蛋白表达及分布进行检测。结果:PI3K蛋白在正常组织仅在基底层细胞表达;在CA皮损中颗粒层、棘细胞层和基底层细胞胞质呈不同程度阳性表达;在生殖器鳞癌细胞中呈不同程度阳性表达。p-Akt蛋白在正常组织仅在基底层细胞表达;在CA皮损中仅基底层散在树突状细胞呈阳性表达;在生殖器鳞癌肿瘤细胞中呈不同程度阳性表达。结论:PI3K/p-Akt该信号转导通路可能参与了鳞癌和CA的发生发展。

甲状腺滤泡癌P—AKT表达异常与血管生成的关系

目的探讨P—AKT异常表达与甲状腺滤泡癌血管生成之间的关系。方法采用免疫组织化学PV-6000两步法检测甲状腺滤泡癌、甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿标本中P—AKT、VEGF及CD34的表达。结果P—AKT在甲状腺滤泡癌中的表达较甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中显著增高（P〈0．001）。甲状腺滤泡癌组织中，P—AKT、VEGF蛋白表达均与微血管密度（MVD）相关（P〈0．05），P—AKT阳性标本的MVD值高于P—AKT阴性标本（P〈0．05），VEGF阳性标本的MVD值亦高于VEGF阴性标本（P〈0．05）。P-AKT表达与VEGF表达的相关性有统计学意义（P〈0．05）。结论P-AKT在甲状腺滤泡癌中的高表达在甲状腺滤泡癌的发生发展及继发转移过程中发挥着重要作用。甲状腺滤泡癌中可能存在AKT／VEGF通路，AKT是调控VEGF表达通路的关键因子。

腹部推拿对UC模型大鼠背根神经节PLC/IP3R/Ca2+信号通路及AKT、p-AKT蛋白表达的影响

目的:观察腹部推拿干预溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠后,对大鼠背根神经节PLC/IP3R/Ca^(2+)信号通路及AKT、p-AKT蛋白表达的影响,从而探讨腹部推拿对溃疡性结肠炎内脏高敏感的作用机制。方法:将36只SPF级大鼠分成空白组、模型组、推拿组、美沙拉嗪组4组,除空白组自由饮用蒸馏水外,其余各组采用自由饮5%葡聚糖硫酸钠溶液(DSS)的方法制备大鼠UC模型。造模第2日起推拿组采用腹部推拿进行干预,美沙拉嗪组进行美沙拉嗪溶液进行灌胃,空白组、模型组仅俯卧位束缚固定于固定器中。干预15日后,采用邻-甲酚酞络合铜比色法检测背根神经节(DRG)细胞钙离子浓度;ELISA法检测DRG组织中磷脂酶C(PLC)、肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)、肌醇1,4,5-三磷酸受体(IP3R)的表达,WesternBlot检测DRG组织中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果:与模型组比较,推拿组大鼠DRG细胞Ca^(2+)浓度和DRG组织中IP3、IP3R含量呈降低趋势,其中DRG细胞Ca^(2+)浓度有显著差异(P<0.01),其他指标的组间差异无统计学意义(P>0.05);推拿组DRG组织中PLC含量及AKT、p-AKT蛋白表达呈增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腹部推拿抑制UC内脏高敏感性,其作用机制可能与抑制PLC-IP3R-Ca^(2+)信号通路和促进UC大鼠背根神经节AKT激活有关。

Lewis y抗原对人卵巢癌细胞RMG-Ⅰ裸鼠移植瘤p-Akt蛋白表达的影响

目的:探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对人卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤中磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达的影响。方法:利用已经建立的Lewis y抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学染色法检测基因转染前后裸鼠移植瘤组织中Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达。结果:基因转染后的裸鼠移植瘤组织细胞表面Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达均明显增加,转染组与非转染组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Lewis y抗原明显促进卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤p-Akt蛋白的表达。

P-AKT和AgNOR表达在卵巢上皮性癌表达及意义

目的:探讨P-AKT和AgNOR(Nuclealar Organizer Regions)蛋白在卵巢上皮癌发生发展过程中的作用,为临床治疗提供新的靶目标。方法:对2003年1月—2006年11月在我院住院105例患者的组织标本,采用免疫组化法和银染色法检测P-AKT和AgNOR的表达情况。结果:P-AKT、AgNOR蛋白在在正常卵巢组织和卵巢癌两组间存在显著性差异(P<0.05)。结论:P-AKT及AgNOR在恶性肿瘤中(尤其是晚期肿瘤)组织中的表达均明显升高,提示两者可能促进卵巢上皮性癌的发生和发展。

雷公藤红素下调HL-60细胞P-Akt与Cyclin D1蛋白表达及其诱导细胞凋亡的效应

本研究探讨雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡及其可能的作用机制。以不同浓度雷公藤红素(0.25-8.0μmol/L)分别作用于HL-60细胞24-72小时,采用MTT法检测细胞增殖活性;TUNEL荧光染色、流式细胞术观察雷公藤红素对HL-60细胞凋亡及周期的影响;Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对HL-60细胞内Akt(P-Akt)及其下游分子Cyclin D1的蛋白、基因的表达水平。结果表明,雷公藤红素能明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变。雷公藤红素的凋亡诱导可能与其诱导HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对P-Akt及CyclinD1蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效和时效关系。结论:雷公藤红素明显抑制HL-60细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与其下调P-Akt和Cyclin D1蛋白表达有关。

PTEN,P-AKT,P-ERK蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的:检测PTEN和P-AKT,P-ERK蛋白在胃癌中的表达,并探讨其相互关系。方法:应用免疫组织化学方法检测65例胃癌及癌旁组织中PTEN和P-AKT,P-ERK蛋白的表达情况。结果:PTEN蛋白在胃癌中表达的阳性率(58.46%)明显低于相应正常组织(100%)(P<0.01),其表达水平与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。P-AKT蛋白在胃癌中表达的阳性率(67.69%)明显高于相应正常组织(26.15%)(P<0.01),其表达与淋巴结转移有关(P<0.01),与浸润深度、分化程度和TNM分期无关(P>0.05)。P-ERK蛋白在胃癌中表达的阳性率(86.15%)明显高于相应正常组织(16.92%)(P<0.01),其表达水平与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),与分化程度无关(P>0.05)。胃癌组织中PTEN和P-AKT、PTEN和P-ERK蛋白表达之间呈明显负相关(P<0.01)。结论:PTEN的低表达或失表达,可能与P-AKT、P-ERK的异常激活有一定联系,从而对胃癌的发生、发展起重要作用。