头穴透刺对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区P-CaMKⅡ、c-fos表达的影响

目的:观察头穴透刺对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经细胞P-CaMKⅡ、c-fos表达的影响,探讨头穴透刺抑制缺血性脑血管病细胞凋亡的机制。方法:40只SD大鼠中随机抽取8只作为正常组,其余大鼠在模型复制成功后,随机分为模型组、阿米洛利组及头针组,每组8只。阿米洛利组以阿米洛利溶液(1ml/100g)灌胃,2次/d,共7 d;头针组取双侧顶颞前斜线和顶颞后斜线,行快速捻转透刺治疗,1次/d,共7 d;治疗结束后,剥离大鼠海马组织,免疫组织化学法检测海马CA1区P-CaMKⅡ、c-fos的表达。结果:模型组大鼠海马CA1区神经细胞P-CaMKⅡ和c-fos表达较正常组显著增高(P <0. 01);头针组和药物组大鼠海马CA1区神经细胞P-CaMKⅡ和c-fos表达较模型组均明显降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论:抑制神经细胞CaMKⅡ的磷酸化,下调c-fos的表达,从而抑制神经细胞凋亡,可能是头穴透刺抗脑缺血后神经损害的作用机制之一。

热应激对睾丸钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的探讨阴囊轻度热应激对睾丸钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(p-CaMKII)表达的影响。方法将24只成年ICR雄性小鼠分为4组:对照组、热应激0.5h组热应激2 h组和热应激6h组。热应激组小鼠的处理方式为:将小鼠身体的下1/3部分浸于43℃水浴中15 min,在热应激后0.5.2.6 h取舉丸样品,分别对应为热应激0.5 h组、热应激2 h组和热应激6h组。将对照组小鼠身体下1/3部分浸人22℃水中15 min,6 h后处死并取出睾丸样品。采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)缺口末端标记法检测细胞凋亡;用Westerm blot和免疫组织化学技术检测睾丸组织组织磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白繳酶II(p-CaMKI)蛋白的表达。结果阴囊热应激能够使睾丸发生明显的病理学损伤,引起小鼠睾丸生殖细胞凋亡。Westemblot和免疫组织化学技术检测结果均表明,热应激组睾丸组织p-CaMK II、p-ERK1/2蛋白的表达水平明显高于对照组。结论单次热应激能激活睾丸CaMKII,CaMKII的激活可能在热诱导睾丸生殖细胞调亡中起重要作用且CaM-℃aMK II和ERK1/2信号通路可能参与其中。

泻根醇酸对NMDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

钙离子内流、Ca2+/钙调蛋白(Ca M)依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c AMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化是NMDA诱导细胞凋亡的重要过程。本实验探讨了泻根醇酸(BA)对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。MTT法测定细胞活力、测定LDH释放率、Fura-2/AM荧光标记法测定细胞内钙离子浓度,Western blot法测定CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB、p-CREB、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果显示,与模型组相比,BA给药组细胞活力显著升高,LDH释放减少,[Ca2+]i降低,p-CREB,Bcl-2表达上调,Bax表达下调。BA能够通过Ca2+-CaMKⅡ-CREB信号通路保护NMDA诱导的PC12细胞损伤,进而有望成为脑缺血疾病的神经保护药物。

补肾活血组方对慢性心力衰竭大鼠Wnt5a/CaMK Ⅱ信号通路调控及心肌重构的影响

目的 探讨补肾活血组方对慢性心衰大鼠Wnt5a、CaMKⅡ信号通路调控及心肌重构的影响。方法 选12周龄雄性SPF级SD大鼠40只,随机分为假手术组,模型组,中药对照组和西药对照组,每组10只。假手术组大鼠冠脉挂线不结扎,其余大鼠行左冠脉结扎,术后减少大鼠常规喂食量加力竭式游泳,最终造成慢性心力衰竭大鼠模型。成模后,假手术组与模型组用蒸馏水干预,中药和西药对照组分别采用补肾活血组方或赖诺普利干预,用药4周。应用彩色多普勒超声检测大鼠心脏形态学变化程度,酶联免疫法(ELISA)检测血清中的NT-proBNP;HE染色从形态学观察对心肌组织的影响;蛋白质印迹法(Western blot)测定大鼠心肌细胞中Wnt5a、磷酸化(p)-CaMKⅡ/CaMKⅡ的含量。结果 与假手术组相比,模型组左室内径(LVID)增高,射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)降低,血清NT-proBNP含量显著增高,大鼠心肌结构模糊或缺失,心肌细胞间质水肿,组织坏死严重,胞内线粒体呈现空泡化。心肌组织内Wnt5a, p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达均明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和西药组LVID降低,EF、FS升高,血清NT-proBNP含量显著降低,中药组和西药组大鼠心肌结构相对完整,肌纤维存在少量断裂,线粒体水肿程度和空泡化减轻。心肌组织内Wnt5a, p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 补肾活血组方具有良好的延缓心肌重构作用,推测其对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞形态有改善作用,与调控心肌组织Wnt5a/CaMKⅡ信号通路有关。

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)小鼠海马和脑皮层钙调蛋白依赖性激酶2α(CaMKⅡα)及其磷酸化表达水平的干预效应。方法:30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称体质量并按随机原则分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只为空白组。盐酸多奈哌齐组(6 g·kg-1)、黑逍遥散组(3. 25 mg·kg-1)分别连续给药90 d后,Morris水迷宫检测行为学变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马区和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化的表达。结果:干预90 d后,与空白组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期显著延长,跨原平台和有效区域次数显著减少(P <0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白表达显著减弱或降低,而p-CaMKⅡα蛋白表达显著升高(P <0. 05,P <0. 01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和黑逍遥散组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P <0. 01),小鼠海马区及脑皮层Ca MKⅡα蛋白显著增强或升高,p-CaMKⅡα蛋白表达显著降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论:黑逍遥散通过调节AD小鼠不同脑区参与细胞记忆形成机制的关键蛋白Ca MKⅡα及其磷酸化表达,进而发挥改善AD小鼠的学习记忆能力。

天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1信号通路的影响

目的:观察天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1(N-甲基-D-天冬氨酸受体1,N-methyl-D-aspartate acid receptor 1)、P-CaMKⅡ (磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ-亚基,the phosphorylation of calmodulin protein kinase Ⅱ alpha subunit)、P-CREB(磷酸化cAMP反应元件结合蛋白,the phosphorylation of cAMP response element binding protein)表达的影响,探讨天香胶囊调节晕动病模型大鼠前庭核兴奋性的内在分子机制。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药对照组(东莨菪碱)、天香胶囊低、中、高剂量组。灌胃预给药3天后,采用双轴旋转刺激法复制大鼠晕动病模型,通过Western blotting法检测各组大鼠前庭核NMDAR1、P-CaMKⅡ/CaMKⅡ、P-CREB/CREB的表达情况。结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠前庭核NMDAR1、P-CaMKⅡ、P-CREB蛋白表达水平显著增加;与模型组相比,中、高剂量天香胶囊可显著下调晕动病模型大鼠前庭核组织NMDAR1、P-CaMKⅡ、P-CREB蛋白表达。结论:天香胶囊可抑制晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1信号通路的活化,这可能是其在治疗晕动病中降低前庭核兴奋性的内在分子机制之一。