p-ERK-1及相关因子在子宫内膜癌中的表达及意义

目的检测子宫内膜癌组织中p-ERK-1、p-p38和ERK-1 mRNA表达情况并探讨其意义。方法采用原位分子杂交方法和免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中三者的表达情况。结果子宫内膜癌组织中p-ERK-1和p-p38表达定位于细胞核,ERK-1 mRNA的表达于细胞浆,其阳性表达率分别为68.33%(41/60)、55.00%(33/60)和78.33%(47/60),明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05)。p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA的表达与淋巴结转移、临床分期及病理分期有关(P<0.05);在子宫内膜癌组织中p-ERK-1蛋白和ERK-1 mRNA表达存在一致性(P<0.05),三者之间表达呈正相关(P<0.05)。结论 p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

培美曲塞联合顺铂治疗非小细胞肺癌疗效及对患者细胞角质抗原21-1、磷酸化细胞外信号调节激酶水平的影响研究

目的研究了培美曲塞联合顺铂对非小细胞癌的治疗效果及对患者细胞角质抗原21-1(CYFRA21-1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)水平的影响。方法:纳入收治的非小细胞肺癌(NSCLC)患者94例,随机分为对照组和观察组,各47例。对照组使用多西他赛联合顺铂进行化疗,观察组使用培美曲塞联合顺铂进行治疗。比较两组的近期疗效、安全性和1年生存率,比较两组以及不同病理分型治疗前后的CYFRA21-1、糖类抗原125(CA125)、p-ERK水平。结果:对照组的治疗有效率明显低于观察组(P<0.05)。两组的1年生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组的CYFRA21-1、CA125、p-ERK水平均明显降低(P<0.05),其中对照组CYFRA21-1、CA125、p-ERK水平均明显高于观察组(P<0.05)。治疗后,NSCLC不同病理分型患者CYFRA21-1、CA125、p-ERK水平均明显下降(P<0.05),其中鳞癌患者CYFRA21-1、CA125、p-ERK水平均明显高于腺癌和鳞腺癌患者(P<0.05)。对照组恶心呕吐、肝功能损害和白细胞计数减少的发生率明显高于观察组(P<0.05)。结论:培美曲塞联合顺铂治疗NSCLC的疗效和安全性均较好,CYFRA21-1、CA125、p-ERK的水平经治疗后在不同病理分期患者中均明显下降,可作为评价NSCLC化疗效果的有效指标。

Fascin1和p-ERK表达与神经胶质瘤侵袭性的相关性研究

目的探讨肌成束蛋白(Fascin-1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)与神经胶质瘤侵袭性的相关性。方法选取2016年6月-2018年11月期间,到我院神经外科手术治疗的94例神经胶质瘤患者手术标本,其中有Ⅰ级32例、Ⅱ级28例、Ⅲ级22例、Ⅳ级12例。选取同期正常脑组织标本30例作为对照组。比较各组间血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平以及Fascin1、p-ERK的组织表达情况。结果神经胶质瘤患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于对照组(P<0.05);Ⅳ级患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级(P<0.05);Ⅲ级患者血清Fascin1、p-ERK、TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9水平显著高于Ⅰ级、Ⅱ级(P<0.05)。神经胶质瘤Fascin1、p-ERK表达明显高于对照组(P<0.05);Ⅲ级~Ⅳ级神经胶质瘤中Fascin1、p-ERK表达明显高于Ⅰ~Ⅱ级(P<0.05)。经过Pearson相关性分析,Fascin1、p-ERK与TIMP-1、MMP-9、TIMP-1/MMP-9均呈正相关(P<0.05)。结论Fascin1、p-ERK与神经胶质瘤侵袭性有密切关系,可能成为反映神经胶质瘤侵袭能力的敏感指标。

抑制NKCC1减轻小鼠创伤性脑损伤的研究

目的探讨钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)抑制剂布美他尼处理(BT)对小鼠创伤性脑损伤(TBI)早期的脑保护作用及可能分子信号调控机制。方法成年雄性BALB/c小鼠54只,随机分为对照组,颅脑创伤组(TBI组)和布美他尼治疗组(BTT组)各18只,采用Mamarou加速性颅脑损伤方法制备小鼠TBI模型。采用HE染色法观察各组小鼠皮层损伤程度;利用神经功能学评分(NSS)进行神经功能学评分;干湿重法检测脑组织含水量;同时,Western blot法检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白的表达变化。结果与TBI组比较,BTT组皮层神经元损伤减轻,同时,BTT组小鼠神经功能学评分优于TBI组(P<0.05);TBI后12 h,BTT组p-ERK的蛋白表达水平低于TBI组(P<0.01)。结论抑制NKCC1的表达可能发挥重要的脑保护作用,而p-ERK可能参与NKCC1的信号调控机制。

外源性BDNF对急性高眼压后大鼠视网膜EIK-1磷酸化的影响

为了研究脑源性神经营养因子(BDNF)干预对急性高眼压(HIOP)后大鼠视网膜EIK-1磷酸化的影响,本实验将72只成年大鼠随机分为单纯高眼压组、BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组。BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组动物左眼于加压前2d分别给予BDNF预处理或溶媒,右眼设为正常对照。各组动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压并维持60min,动物分别存活1、3、7、14d后处死,冰冻切片行p-EIK-1的免疫组织化学染色。结果显示:单纯高眼压组急性高眼压后大鼠视网膜节细胞层p-EIK-1阳性细胞数较正常对照组下调(P<0.05);溶媒预处理高眼压组实验结果与单纯急性高眼压组相似。BDNF预处理高眼压组急性高眼压后1、3、7d组大鼠视网膜节细胞层p-EIK-1阳性细胞数与正常对照组相似,14d组下调(P<0.05)。此结果提示外源性BDNF促进了急性高眼压后视网膜节细胞层EIK-1的活化,节细胞层EIK-1的磷酸化对受损的视网膜有保护作用。

PTPIP51、p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨PTPIP51和p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达及对口腔鳞癌侵袭、转移的影响。方法收集32例口腔鳞状细胞癌及其配对癌旁正常口腔黏膜组织。用免疫荧光组织化学染色激光共聚焦显微镜检测PTPIP51与p-Raf-1蛋白在组织切片内表达及定位;PBS冲洗后对标本进行苏木精-伊红染色,普通光镜对比观察组织结构及细胞形态,同时用免疫组织化学方法(SP法)检测PTPIP51蛋白在组织和细胞内的定位;Rea-ltime PCR检测PT-PIP51与ERK1/2基因mRNA在肿瘤组织及癌旁正常口腔黏膜组织的表达情况。结果 PTPIP51与p-Raf-1蛋白在癌巢周围增殖旺盛的肿瘤细胞、间质免疫细胞及部分脉管壁内皮细胞表达阳性且2种蛋白在细胞中共定位表达。同时发现PTPIP51与ERK1/2基因mRNA在口腔鳞癌组织表达高于配对癌旁正常口腔黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);ERK1/2及PTPIP51基因mRNA表达呈正相关(r=0.641,P<0.05);两者的表达水平与患者的性别、年龄,病理分级无关,与肿瘤的TNM分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PTPIP51与Raf-1可能通过Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程,且2种蛋白与肿瘤的侵袭、转移有密切关系。

罗红霉素经caveolin-1-p-ERK1/2对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞cyclinD1表达的影响

目的探讨罗红霉素(RXM)经caveolin-1-p-ERK1/2对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)cyclinD1表达的影响。方法将30只SPF级雄性SD大鼠随机均分为对照组和哮喘组,以卵白蛋白致敏和激发复制哮喘气道重塑模型;采用Image-Pro Plus Version 6.0图像分析软件测定支气管壁和支气管平滑肌层厚度;透射电镜观察两组大鼠ASMCs微囊表达情况;CCK-8检测不同浓度RXM[A组(只含0.1%DMSO)、R10组(含RXM10μg/ml+0.1%DMSO)、R25组(含RXM 25μg/ml+0.1%DMSO)、R50组(含RXM50μg/ml+0.1%DMSO)、R100组(含RXM 100μg/ml+0.1%DMSO)]干预哮喘ASMCs后细胞的增殖情况。Western blot测定caveolin-1、p-ERK、cyclinD1的蛋白表达。结果哮喘组支气管壁和支气管平滑肌层明显增厚。而微囊表达匮乏。哮喘组大鼠支气管壁与平滑肌层厚度均高于对照组(均P<0.01)。各RXM干预组ASMCs A值均低于A组。其中R100组明显低于A组(P<0.05)。R100组caveolin-1表达明显高于A组及R10组,cyclinD1表达明显低于A组及R10组,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01);R25、R50、R100组P-ERK表达均明显低于A组.差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。哮喘ASMCs增殖活性与caveolin-1蛋白表达呈负相关(P<0.05),与P-ERK及cyclinD1蛋白表达呈正相关(P<0.05或0.01);caveolin-1与p-ERK蛋白表达呈负相关(P<0.01),与cyclinD1蛋白表达呈正相关(P<0.01);P-ERK与cyclinD1蛋白表达呈正相关(P<0.01)。结论 RXM可能通过上调caveolin-1表达、抑制ERK1/2活化。进而影响cyclinD1的表达.从而抑制哮喘大鼠ASMCs增殖。

磷酸化ERK-1及磷酸化AKT在子宫内膜癌中表达及意义

目的观察子宫内膜癌组织中磷酸化ERK-1（P-ERK-1）及磷酸化AKT（PAKT）表达情况。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例子宫内膜癌组织、40例正常子宫内膜组织中P-ERK-1和P-AKT的表达情况。结果子宫内膜癌组织中P-ERK-1和P-AKT表达定位于细胞核和细胞膜,其表达率分别为74%（58/78）和77%（60/78）,明显高于正常子宫内膜组织（P均〈0.05）;子宫内膜癌组织中,P-ERK-1和P-AKT蛋白在组织学分级G2、G3级及病理分期Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ期的表达率分别高于G1级和Ⅰ期（P均〈0.05）,与肌层浸润程度有关（P〈0.05）;P-ERK-1表达与无淋巴结转移、病理组织类型无关（P均〉0.05）;P-AKT与有无淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与病理组织类型无关（P〉0.05）;相关性分析显示,二者之间呈正相关（P〈0.05）。结论 P-ERK-1和P-AKT在子宫内膜癌组织中过度表达,与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

脑源性神经营养因子对实验性大鼠高眼压视网膜节细胞EIK-1磷酸化水平的作用

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)干预对急性高眼压(HIOP)后大鼠视网膜EIK-1磷酸化水平的影响,以了解BDNF抗高眼压损伤的机制。方法:成年大鼠72只随机分为HIOP组、BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组(n=24),每组又根据4个时间点细分为4个亚组(n=6)。BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组大鼠左眼于加压前2 d分别给予BDNF预处理或等量溶媒剂,右眼作为正常对照。用生理盐水升高各组大鼠左侧眼压,至眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压时停止注射,并维持60 min。大鼠分别存活1、3、7、14 d后处死,冰冻切片行p-EIK-1的免疫组织化学染色。结果:与正常对照比较,急性高眼压后,HIOP和溶媒预处理高眼压视网膜节细胞层p-EIK-1阳性细胞数明显减少(P<0.01);BDNF预处理高眼压组急性高眼压后1d和3d节细胞层p-EIK-1阳性细胞数与正常对照组相似,7d和14 d时有轻度减少(P<0.05)。结论:外源性BDNF可以促进实验大鼠急性高眼压后视网膜节细胞层EIK-1活化,提示节细胞层EIK-1的磷酸化介导了BDNF对受损的视网膜的保护作用。

蒙花散对急性心肌梗死大鼠心功能及心肌CyPA、XBP1、p-ERK、HO-1蛋白表达的影响

目的:探索蒙花散对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能及心肌CyPA、XBP1、p-ERK、HO-1蛋白表达的影响。方法:80只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组及蒙花散低、中、高剂量组,戊巴比妥钠麻醉后,采用左冠状动脉前降支穿线并结扎的方式制备AMI大鼠模型,蒙花散各剂量组灌胃相应剂量蒙花散,假手术组和模型组灌胃相应体积生理盐水,连续给药6 w后,比较各组大鼠心脏功能指标,血清SOD、MDA、CK-MB、cTnⅠ水平,炎性因子、凝血因子,心脏组织CyPA、XBP1、p-ERK、HO-1蛋白表达,心肌组织氧化应激指标SOD、MDA。结果:与模型组比较,蒙花散各剂量组SBP、DBP、LVSP、LVFS、LVEF、±dp/dt_(max)、AT-Ⅲ及血清SOD、HMGB1和心肌组织p-ERK、HO-1显著升高,LVEDD、LVESD、QT间期、T波幅度、ST段抬高幅度显著降低,心肌组织MDA水平及CyPA、XBP1蛋白表达显著降低,血清MDA、CK-MB、cTnⅠ、TGF-β、TNF-α、IL-1、IL-6、MMP-9、β-TG、FPA、DD、GMP-140、BNP水平显著降低(P<0.05)。结论:蒙花散对AMI大鼠的心脏功能和心肌CyPA、XBP1、p-ERK、HO-1蛋白表达具有较好的改善作用,可减轻机体氧化应激水平和心肌损伤程度。

茶多酚对谷氨酸介导的大鼠海马神经元损伤的影响及可能机制

目的探讨茶多酚(tea polyphenols,TP)对谷氨酸(Glutamate,Glu)介导的神经元毒性损伤的影响及可能机制。方法运用大鼠乳鼠海马神经元原代培养细胞,Glu诱导建立细胞损伤模型。实验分6组:对照组、Glu模型组、抑制剂+Glu模型组、TP+Glu组、TP+抑制剂+Glu组和TP组。神经细胞标记微管蛋白β-tubulinⅢ染色和DAPI细胞核染色鉴定神经元的纯度和细胞骨架结构形态;MTT法测定细胞活性;Western blot检测细胞中p-Akt和p-Erk 1/2蛋白的表达。结果β-tubulinⅢ和DAPI染色结果显示,培养的海马神经元生长良好,纯度>90%;β-tubulinⅢ染色结果显示Glu模型组表现出典型的神经细胞骨架结构损伤的形态特征,TP可拮抗Glu诱导的神经元凋亡的形态学改变;MTT结果显示TP+Glu组细胞存活率明显高于Glu模型组(P<0.001);与TP+Glu组(1.190±0.2072)相比,TP+LY29004+Glu组神经元存活率明显减少(P<0.01);与TP+Glu组(1.861±0.1804)比较,TP+PD098059+Glu组神经元存活率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示,与Glu模型组相比,TP+Glu组p-Akt和p-Erk 1/2蛋白表达量均明显升高(P<0.01;P<0.001)。结论茶多酚对Glu介导的海马神经元损伤具有保护作用,其可能通过上调p-Akt和p-Erk 1/2的表达抑制Glu介导的海马神经元损伤。

大蒜素对KG-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

大蒜素是大蒜中主要的生物活性物质,具有抗菌、降血脂等多种药理作用。该研究通过凋亡相关指标的检测,来探讨大蒜素对KG-1细胞增殖抑制的分子生物学机制。采用流式细胞术检测大蒜素诱导KG-1细胞的凋亡率;采用RT-q PCR法检测大蒜素对KG-1细胞Bax,Bcl-2,survivin,ERK基因mRNA表达水平的影响;通过Western blot法检测大蒜素对KG-1细胞caspase 3,cleaved caspase 3,ERK1/2,p-ERK1/2,survivin蛋白表达水平的变化。结果表明,与对照组相比,大蒜素能够显著抑制KG-1细胞的增值活性,并且呈显著浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞术检测显示大蒜素能够诱导KG-1细胞的凋亡,并且主要是晚期凋亡。RT-q PCR结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后,与凋亡相关的基因Bax的mRNA表达升高,Bcl-2,survivin,ERK基因的mRNA表达降低;Western blot法结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后执行凋亡的蛋白caspase 3及其活性形式cleaved caspase 3升高,促生存的相关蛋白survivin,ERK1/2和其活性形式p-ERK1/2表达下降,其中p-ERK1/2的下调呈剂量依赖性。以上结果提示,大蒜素主要通过诱导KG-1细胞的晚期凋亡来抑制其增殖;凋亡的执行有cleaved caspase 3的参与;凋亡的诱导涉及到蛋白水平,ERK1/2,survivin表达的降低和p-ERK1/2剂量依赖性的减弱;mRNA水平涉及到Bax的升高,survivin,Bcl-2,ERK1/2的下调。

PARP-1、P21Ras及pERK在子宫内膜腺癌中的表达

目的探究子宫内膜腺癌组织中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)与Ras-MEK-ERK信号通路相关分子的表达及临床意义。方法选取2012年6月至2015年6月于徐州医科大学附属医院妇科行手术治疗且术后病理证实为子宫内膜腺癌的78例、子宫内膜非典型增生的20例及正常子宫内膜的30例患者的组织蜡块。采用免疫组化法检测PARP-1、pERK及P21Ras在各内膜组织中的表达情况;分析三者与子宫内膜腺癌患者临床病理参数的相关性。采用Cox比例风险回归模型分析三者的表达水平与患者预后的关系。结果三组子宫内膜组织PARP-1、P21Ras、pERK蛋白阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),均为子宫内膜腺癌组织最高。相关性分析显示,PARP-1、P21Ras与pERK在子宫内膜腺癌组织中的表达两两呈正相关关系(P<0.05)。在子宫内膜腺癌组织中,PARP-1阳性表达在临床分期、组织分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);pERK阳性表达在临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度比较差异有统计学意义(P<0.05);P21Ras阳性表达在组织分化程度比较差异有统计学意义(P<0.01)。PARP-1、P21Ras、pERK蛋白阳性表达者5年累积生存率低于阴性表达者(P<0.05)。多因素分析结果显示,组织分化程度、肌层浸润深度、PARP-1和P21Ras为患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论子宫内膜腺癌组织中PARP-1可能通过参与Ras-MEK-ERK信号通路影响子宫内膜癌的发生、发展,PARP-1、P21Ras可能是子宫内膜腺癌的潜在预后指标。

电针对慢性痛大鼠痛感觉和情绪成分相关杏仁核内μ-阿片受体等蛋白表达的影响

目的:观察电针对慢性神经痛负性情绪(NA)大鼠痛感觉和情绪成分相关杏仁核内μ-阿片受体(MOR)等蛋白表达变化的影响,探讨电针镇痛的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、麻醉电针组,每组8只。结扎大鼠左侧坐骨神经结合足底反复电刺激造成慢性神经痛NA模型。电针双侧"足三里"-"阳陵泉",每日1次,共7d。测量大鼠双侧足底热痛阈(缩足反应潜伏期,PWL),计算其差值(PWLD)及在条件控制箱停留时间;采用免疫荧光、免疫印迹技术检测中央杏仁核及右侧杏仁核内MOR、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)、α-氨基羟甲基异噁唑丙酸受体亚单位GluR 1(GluA 1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1和2(p-ERK 1/2)的表达。结果:与正常组比较,模型组PWLD显著增加(P<0.001),条件箱停留时间显著减少(P<0.001);电针7d后,电针组或麻醉电针组PWLD明显降低(P<0.05),电针组在条件箱停留时间显著增加(P<0.05),而麻醉电针组条件箱停留时间无明显变化(P>0.05),说明电针干预提高痛阈、减轻NA,麻醉电针组则抑制了电针改善NA的作用。此外,与正常组比较,模型组杏仁核MOR蛋白表达显著增加(P<0.05),GluA 1、p-ERK 2、p-CREB蛋白表达显著降低(均P<0.05)。电针7d后,电针组该4个蛋白,麻醉电针组MOR、p-ERK 2及p-CREB蛋白表达均显著上调(P<0.001,P<0.01,P<0.05);与电针组比,麻醉电针组GluA 1表达明显降低(P<0.05),而MOR、pERK 2、p-CREB的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重复电针可明显改善慢性痛大鼠痛感觉成分和情感成分,其改善痛情感成分的效应可能与上调大鼠杏仁核GluA 1蛋白表达相关,而杏仁核内MOR、ERK 2、CREB参与痛的感觉和情感成分的作用有待进一步探讨。