Evaluating the p-FOXO1/FOXO1 Ratio: An Alternative Strategy for Endometrial Cancer Diagnosis

Background: The FOXO subfamily of Forkhead transcription factors plays a central role in pro-moting expression of proapoptotic and cell cycle regulatory genes. FOXO1 expression has an im-portant role in human endometrium homeostasis. Therefore, reduced FOXO1 protein and its inactivation by phosphorylation might, play a role in progression of human endometrial cancer. Methods: Current study was designed to investigate the changes of the FOXO1, phosphorylated-FOXO1 (p-FOX1) proteins levels and the p-FOXO1/FOXO1 ratio in 30 patients with endometrial cancer and 20 subjects with normal endometrium, surgically using excised human endometrial tissue specimens, quantitative real time PCR and western blot methods. Results: FOXO1 protein level in patients with endometrial cancer significantly reduced in comparison with control group (0.17 ± 0.15 vs. 1 ± 0.14;

淋巴细胞微粒刺激AKT/Foxo1阻滞气道上皮细胞周期的研究

目的研究淋巴细胞微粒(lymphocyte microparticles,LMPs)作用于气道上皮细胞引起周期阻滞在G1期的机制通路。方法将人类正常气道上皮细胞培养到对数生长期时,20μg/ml的LMPs按照不同的时间0、4、8、16、20、24 h刺激气道上皮细胞,用RT-PCR方法检测P21、P27在mRNA水平的表达情况。20μg/ml的LMPs按照不同的时间0、4、8、16、24 h刺激气道上皮细胞,用Western blot方法检测P21、P27、Foxo1、p-Foxo1、AKT、p-AKT的蛋白表达情况。用免疫细胞化学技术检测Foxo1的核定位情况。结果与0 h对比,20μg/ml的LMPs作用于气道上皮细胞能使P21、P27的mRNA、蛋白水平显著升高(P<0.01),Foxo1蛋白水平无明显变化(P>0.05),p-Foxo1的蛋白水平表达减弱(P<0.01),AKT蛋白水平无明显变化(P>0.05),p-AKT蛋白水平表达减弱(P<0.01)。结论 LMPs作用于气道上皮细胞上调P21、P27蛋白的表达引起周期阻滞G1期,可能是通过AKT/Foxo1信号通路调节。

交叉反应物质197转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制

目的研究白喉毒素的无毒突变体交叉反应物质197(cross-reacting material 197,CRM197)转运大分子物质通过血肿瘤屏障的效果和机制。方法制备CRM197-HRP偶联物,建立体外血肿瘤屏障模型,给予CRM197-HRP作用2 h后,通过TMB显色法检测transwell下室中HRP活性的变化;给予CRM197作用1 h后,采用免疫组化法检测体外血肿瘤屏障内皮细胞中p-Akt的表达变化;Western blot法检测p-Akt、p-FOXO1A和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达变化。结果和对照组相比,CRM197-HRP能有效通过血肿瘤屏障,并且其转运水平呈时间依赖性增加;p-Akt主要分布在内皮细胞的胞质和胞核中,CRM197作用1 h后p-Akt的表达水平下降;同时伴有内皮细胞中p-FOXO1A表达下降和质膜微囊蛋白caveolin-1的表达上调。结论 CRM197可能通过抑制内皮细胞中p-Akt的表达,减少转录因子FOXO1A的磷酸化水平,进一步上调质膜微囊蛋白caveolin-1的表达,增加血肿瘤屏障的通透性。

FoxO1变化对糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的:观察心肌中插头转录因子O1(FoxO1)在糖尿病(DM)小鼠心肌中表达量变化及对小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响。方法:将90只健康雄性Swiss小鼠随机分为5组:假手术(Sham)组、I/R组、DM+Sham组、DM+I/R组及DM+FoxO1SiRNA+I/R组,每组18只。采用高糖高脂饮食加链脲菌素(Streptozocin,STZ)腹腔注射诱导建立DM小鼠模型。采用FoxO1SiRNA心肌点注射下调心肌FoxO1表达。心肌I/R损伤模型的建立,采用结扎心脏冠状动脉左前降支30 min后再灌注方案实施。心肌再灌注3 h后,用原位缺口末端标法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。用ELISA法检测心肌中Caspase-3的活性。用Western blot法检测心肌中FoxO1的表达量。心肌再灌注24 h后,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死(MI)的面积。结果:与Sham组比较,DM+Sham组心肌中FoxO1的表达量明显增高(P<0.01)。与I/R组比,DM+I/R组MI的面积增大(P<0.05),心肌细胞凋亡数量及Caspase-3活性明显增加(P<0.01)。与DM+I/R组相比,DM+FoxO1SiRNA+I/R组心肌FoxO1的表达量下调(P<0.05),MI面积及Caspase-3的活性减小(P<0.05),心肌细胞凋亡数量减少(P<0.01)。结论:DM小鼠心肌中FoxO1表达量的增加可加重心肌I/R损伤;而下调心肌中FoxO1的表达量后,心肌I/R损伤减轻。

补肾活血中药对SD大鼠慢性高眼压模型初级视皮质磷酸化FoxO1和IKK2表达的影响

目的观察补肾活血中药对SD大鼠慢性高眼压(EIOP)模型初级视皮质(PVC)的影响,并对其作用机理进行初步探讨。方法采用烙闭3支上巩膜静脉法,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:对照组、模型组、给药组。连续灌胃8周,并于8周末处死大鼠,观察其对大鼠眼压(IOP),PVC尼氏小体含量、PI3K/Akt通路上p-FoxO1及IKK2表达的影响。结果①造模后大鼠IOP明显升高,造模后8周(实验结束)IOP仍较高,补精益视片有轻度降IOP作用。②免疫组化检测3组大鼠PVC中p-FoxO1和IKK2表达:模型组>给药组>对照组。结论补肾活血中药可以保护SD大鼠慢性EIOP模型视功能:降低眼压,下调p-FoxO1和IKK2的表达。

补精益视片对SD大鼠慢性高眼压模型初级视皮质PI3K/Akt通路磷酸化FoxO1和IKK2表达的影响

目的观察补精益视片对SD大鼠慢性高眼压(EIOP)模型初级视皮质(PVC)的PI3K/Akt通路磷酸化FoxO1和IKK2表达的影响,并对其作用机理进行初步探讨。方法采用烙闭3支上巩膜静脉法,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:对照组、模型组、给药组。连续灌胃8周,并于8周末处死大鼠,观察其对大鼠眼压(IOP),初级视皮质PI3K/Akt通路p-FoxOl及IKK2表达的影响。结果①造模后大鼠IOP明显升高,造模后8周(实验结束时)各组IOP仍较高,说明模型成功,说明造模成功,补精益视片有降低IOP作用(P<0.05)。②造模后8周,模型组p-FoxO1 JKK2较对照组及给药组含量高,差异有统计学意义(均为P<0.05);给药组p-FoxO1 JKK2含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补精益视片可以保护SD大鼠慢性EIOP模型视功能,表现为:降低眼压,下调p-FoxO1和IKK2的表达。

头颈部横纹肌肉瘤P-cadherin和AP2β的表达与FOXO1基因分离的研究

目的以荧光原位杂交(FISH)技术检测FOXO1基因分离阳性的横纹肌肉瘤(RMS)为金标准,探讨免疫组化标志物胎盘钙黏蛋白(P-cadherin)和激活增强子结合蛋白2β(AP2β)的表达与FOXO1基因分离的相关性及两者替代检测FOXO1基因分离的可行性。方法收集2002-01-2016-03间首都医科大学附属北京同仁医院的46例RMS的临床病理资料。蜡块连续切片4张,分别用于HE染色、免疫组化标记物P-cadherin和AP2β染色及FOXO1基因分离的FISH技术检测。结果男性24例,女性22例。0.5~60岁,平均20岁。P-cadherin染色结果为阳性22例,阴性24例。AP-2β染色结果为阳性为46例,阴性0例。FOXO1基因分离阳性21例,阴性25例。结论 P-cadherin诊断FOXO1基因分离的敏感性和特异性高,其有可能代替FISH检测FOXO1基因分离结果。AP2β不能用于鉴别FOXO1基因分离需进一步讨论。

来曲唑片联合益母草颗粒对多囊卵巢综合征患者外周血FOXO1、SAP和DAPK1表达的影响研究

目的:探讨来曲唑片联合益母草颗粒对多囊卵巢综合征(PCOS)患者的治疗效果及对外周血叉头转录因子O1(FOXO1)、血清淀粉样蛋白P(SAP)和血清死亡蛋白激酶1(DAPK1)表达的影响。方法:选取2017年8月至2020年3月中国人民武装警察部队特色医学中心收治的PCOS患者154例作为研究对象,按随机数字表法分为对照组(77例)和治疗组(77例)。对照组患者于月经来潮的第5日开始口服来曲唑片,1次5 mg, 1日1次,连服5 d,此为1个疗程;治疗组患者在对照组的基础上同时口服益母草颗粒,1次15 g, 1日2次,从月经来潮第5日起连续服用至下次月经来潮,此为1个疗程;两组患者均连续治疗3个疗程。比较两组患者治疗前后的临床疗效、性激素和糖代谢水平,以及FOXO1、SAP和DAPK1的表达情况。结果:治疗组患者的总有效率为98.70%(76/77),高于对照组(90.91%,70/77),差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后性激素(血清黄体生成素、卵泡刺激素和睾酮)水平均降低,且治疗组患者治疗后性激素水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后空腹胰岛素(FINS)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均降低,且治疗组患者治疗后的FINS、IGF-1水平及HOMA-IR低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后的血清FOXO1、SAP和DAPK1表达水平低于治疗前,且治疗组患者治疗后的FOXO1、SAP、DAPK1表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:来曲唑片联合益母草颗粒治疗PCOS患者,可有效提高临床疗效,改善患者性激素水平、糖脂代谢异常和卵泡凋亡情况。

基于PI3K/AKT/FoxO1信号通路探讨湿润烧伤膏对糖尿病大鼠创面EMT过程的作用

目的探究湿润烧伤膏对糖尿病大鼠创面再上皮化过程的促进作用及其机制。方法90只Wistar雄性大鼠用随机数字法分为5组:MEBO组、rb-bFGF组、模型组、对照组、空白组,每组18只。对照组建立急性创面模型;MEBO组、rb-bFGF组、模型组建立糖尿病创面模型。对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水外敷治疗;MEBO组、rb-bFGF组分别予以MEBO和rb-bFGF外敷治疗;空白组只做备皮处理。各组创面于第3、7、14天分别随机取6只大鼠,采集创面组织标本并保存。随后进行Masson染色,观察各组胶原纤维生成及再上皮化情况。免疫荧光、蛋白印迹和qRT-PCR方法检测创面组织FoxO1、E-cadherin及Vimentin等因子表达。结果在造模第7、14天,对照组、MEBO组及rb-bFGF组创面愈合率高于模型组(P<0.05),且创面显示胶原纤维生成及再上皮化情况更好。在造模第3天,MEBO组中AKT蛋白及mRNA表达量高于模型组(P<0.05);第7天,MEBO组及rb-bFGF组中PI3K、AKT、FoxO1、Vimentin蛋白及mRNA表达量高于模型组(P<0.05),E-cadherin、Claudin1则低于模型组(P<0.05);第14天,与模型组相比,MEBO组及rb-bFGF组中AKT、FoxO1、Vimentin蛋白及mRNA表达量降低(P<0.05),E-cadherin、Claudin1表达量升高(P<0.05)。结论湿润烧伤膏能促进糖尿病大鼠创面愈合,其可能作用机制是通过激活PI3K/AKT/FoxO1通路,并影响创面组织中E-cadherin、Claudin1、Vimentin表达及EMT转化过程实现的。

肾透明细胞癌组织40例En-1相关基因表达意义

目的检测同源异型盒基因家族中En-1及其相关基因FoxO1和Sirt3在肾透明细胞癌(ccRCC)不同病理分级中的表达情况,为ccRCC的治疗提供新的思路。方法收集2017-07-01-2018-10-31宁夏医科大学总医院术后病理诊断为ccRCC组织及癌旁组织(距癌组织>2 cm)40例,根据病理Fuhrman分级分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级共3组。采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测En-1、FoxO1、Sirt3和p-FoxO1在癌组织及癌旁正常组织的表达及定位情况,以方差分析进行组间比较。结果免疫组化结果显示,癌组织中En-1、FoxO1、Sirt3和p-FoxO1阳性表达较癌旁组织中少,且随着病理分级的增加,阳性表达逐渐减少。蛋白质印迹法结果显示,En-1(H=14.749,P=0.001)、Sirt3(H=15.158,P=0.001)、FoxO1(F=177.710,P<0.001)和p-FoxO1(F=134.869,P<0.001)在癌组织中的表达低于癌旁正常肾组织;两两多重组间比较发现,不同Fuhrman分级与癌旁正常肾组织相比,En-1(P_(Ⅰ级-癌旁)=0.785,P_(Ⅱ级-癌旁)=0.022,P_(Ⅲ级-癌旁)<0.001)、Sirt3(P_(Ⅰ级-癌旁)=0.850,P_(Ⅱ级-癌旁)=0.017,P_(Ⅲ级-癌旁)<0.001)、FoxO1(P_(Ⅰ级-癌旁)=0.001,P_(Ⅱ级-癌旁)<0.001,P_(Ⅲ级-癌旁)<0.001)和p-FoxO1(P_(Ⅰ级-癌旁)<0.001,P_(Ⅱ级-癌旁)<0.001,P_(Ⅲ级-癌旁)<0.001)表达降低。结论En-1及其相关Sirt3、FoxO1和p-FoxO1基因在癌旁肾组织中呈高表达,在癌组织中呈低表达,且随着病理分级的增加表达逐渐降低。这表明其可能与ccRCC的发生有关,对En-1及其相关基因的检测可能成为ccRCC临床诊断新的标志物或新的治疗靶点。

白术提取物对db/db小鼠降血糖作用及机制研究

目的:研究白术提物对2型糖尿病db/db小鼠的治疗作用及其与GLP-1R可能的相关机制。方法:50只db/db小鼠随机分为模型对照组、白术提取物50、100、200 mg/kg组、二甲双胍150 mg/kg组,另取10只db/m小鼠作为正常对照组,各组小鼠分别灌胃给予相应的药物,给药第18 d测定口服葡萄糖耐量(OGTT),第21 d检测小鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等指标,计算血糖曲线下面积(AUC)、胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察肝脏细胞的病理改变情况,油红O染色观察肝细胞脂滴形成情况;Western blotting法检测小鼠肝组织中胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、叉头盒蛋白O1(FOXO1)与胰腺和十二指肠同源盒1(PDX-1)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠体质量增长显著增加(P<0.01),血清TG、TC、FBG、FINS、IL-1β和TNF-α含量显著升高(P<0.01),AUC和HOMA-IR显著升高而ISI显著降低(P<0.01),肝脏细胞明显病变,脂滴积聚,肝组织GLP-1R、p-PI3K和PDX-1蛋白表达显著下调,FOXO1的蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,白术提取物100、200 mg/kg组小鼠体质量增长明显降低(P<0.05或P<0.01),血清TG、TC、FBG、FINS、IL-1β和TNF-α含量显著降低(P<0.01),AUC和HOMA-IR显著降低(P<0.01),ISI显著升高(P<0.01),小鼠肝脏细胞病变程度明显改善,肝脏脂滴积聚减少,肝脏GLP-1R、p-PI3K和PDX-1蛋白表达显著上调,FOXO1的蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:白术提取物明显调节自发性2型糖尿病小鼠的糖脂代谢紊乱,增强胰岛素敏感性,改善炎症水平,缓解肝脏损伤和脂质沉积,其机制可能与上调肝组织GLP-1R的蛋白表达相关。