胰岛、肝细胞水平胰岛素抵抗与系统胰岛素抵抗关系的研究

目的通过观察酪氨酸磷酸化的胰岛素受体底物(P-Ikbα)在胰岛素抵抗小鼠肝脏、胰腺的表达随时间变化的差异性,了解细胞水平胰岛素抵抗与系统胰岛素抵抗的关系。方法 C57小鼠随机分为高脂组、胰岛素兴奋组和对照组,均尾静脉监测血糖、体重及胰岛素水平变化。取肝脏、胰腺应用Western Blot方法检测P-Ikbα的表达。结果与对照组相比,高脂组和胰岛素兴奋组肝脏、胰腺P-Ikbα蛋白表达随时间延长而减少。血清胰岛素水平在造模第7天升高,而肝脏的IRS-1酪氨酸磷酸化在第14天末低于正常对照组,胰腺在第21天末低于正常组。结论肝脏IRS-1酪氨酸磷酸化水平的降低早于胰腺;血清胰岛素升高发生时间早于细胞水平胰岛素抵抗发生时间。

金匮肾气丸联合玉屏风散补肾益气对慢阻肺大鼠IL-8、TNF-α、MMP-9、P-P65和IKB-α的影响

目的:探讨金匮肾气丸联合玉屏风散补肾益气对烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病大鼠IL-8、TNF-α、P-P65、MMP-9和IKB-α表达的影响。方法:采用香烟烟雾暴露法建立大鼠COPD模型,实验随机分为4组:正常对照组、COPD组、COPD+补肾益气组、COPD+地塞米松组,电镜下观察大鼠肺组织的病理变化,WB检测法测定大鼠肺组织P-P65及IKB-α表达变化,ELISA检测IL-8、MMP-9和TNF-α的变化。结果:模型组气道狭窄、肺泡囊状扩张,符合COPD病理改变,补肾益气组和地塞米松组有所改善;WB检测显示模型组IKB-α表达明显降低,补肾益气组和地塞米松组表达低于模型组(P<0.05);模型组P-P65表达明显升高,补肾益气组和地塞米松组表达有所下降(P<0.05);补肾益气组与地塞米松组无统计学差异(P>0.05)。ELISA结果显示模型组IL-8、MMP-9和TNF-α明显升高(P<0.05),补肾益气组和地塞米松组大鼠表达比模型组下降(P<0.05);补肾益气组与地塞米松组无统计学差异(P>0.05)。结论:补肾益气治疗可抑制P-P65蛋白激活,升高IKB-α,减少IL-8、MMP-9、TNF-α等转录产物的生成,从而减轻气道炎症反应。

龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

该文为观察龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）致人脐静脉内皮细胞（EAhy．926细胞）损伤的保护作用。采用氧化低密度脂蛋白（100mg·L^-1）损伤建立体外人脐静脉内皮细胞损伤模型方法，MTT法检测龙血通络胶囊对正常细胞生长影响及对损伤细胞的保护作用，酶联免疫吸附法检测龙血通络胶囊对内皮细胞损伤后乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响，蛋白质印迹（WB）法检测细胞间黏附分子-1（ICAM-1），血管细胞黏附分子-1（VCAM-1），p65，p-p65，IKB，p-IKB的表达水平。结果显示，与正常对照组比较，OX-LDL损伤后EAhy．926细胞活力显著降低，细胞LDH漏出量增加（P〈0．01），NO含量、SOD活力均显著降低（P〈0．0l，P〈0．05），细胞中MDA含量升高（P〈0．05），ICAM-1，VCAM-1，p-p65／r,65，p-IKB／IKB等蛋白的表达量均显著升高（P〈0．01）；与模型对照组比较，龙血通络胶囊（1，2mg·L^-1）对正常细胞生长无显著影响，可促进OX-LDL损伤的血管内皮细胞增殖（P〈0．05，P〈0．01），降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量（P〈0．05），提高SOD活力及NO含量（P〈0．0l，P〈0．05）；可降低ICAM-1，VCAM-1，p-p65／p65，p-IKB／IKB的表达（P〈0．01）。结果提示龙血通络胶囊对OX-LDL所致的人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用，说明龙血通络胶囊对动脉粥样硬化具有一定治疗作用。

硼替佐米作用不同时间对K562耐药细胞株核因子-κB途径的影响

目的观察硼替佐米（商品名：万珂，PS-341）对柔红霉素（DNR）诱导的K562耐药细胞株（K562／DNR）核因子-KB（NF-kB）、抑制蛋白KB（IKB）及P-糖蛋白（P-gP）表达的影响，探讨PS-341逆转耐药的分子机制。方法以100txg／mlDNR单用或联合应用4Pμg／LPS-341分别作用于K562／DNR12、24及36h，检测不同时间点各组NF-KB、IKB及P-gP表达情况，同时测定NF-KBp65活性，检测各组细胞凋亡率。结果Westernblot结果显示：与阴性对照组相比，DNR可诱导NF-kB表达上调及活性增强、IKB表达下调、P-gP表达上调；加用PS-341可显著抑制DNR诱导的NF-kB及P．gP表达，使IKB表达增加。加用PS-341后，NF．KB活性12h为（15．3±1．87）％[DNR组为（23．8±2．27）％]，24h为（10．2±1．69）％[DNR组为（25．4±1．98）％1，36h为（6．08±-2．53）％[DNR组为（26．9±2．58）％]，与相应单用DNR组相比均有明显下降，差异有统计学意义（P值均〈0．05）。DNR与PS-341联用后，细胞凋亡率12h为（35．23±5．15）％[DNR组为（15．56±4．12）％]，24h为（40．26±6．89）％[DNR组为（17．25±2．89）％]，36h为（43．58±7．69）％[DNR组为（22．47±4．58）％]，与DNR组相比，细胞凋亡率均明显增加，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。上述作用呈时间依赖性。结论PS-341可减少K562／DNR细胞NF-KB的活化，降低P-gP表达，逆转细胞耐药，促进细胞凋亡。

胰岛素的抗炎作用及其机制的研究

目的观察不同浓度胰岛素干预对脂多糖刺激的单个核细胞核因子抑制蛋白(IκB)、核转录因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的影响,同时在细胞水平对PI3K/Akt信号通路上关键分子P-Akt进行监测,探讨胰岛素的抗炎作用及可能机制。方法收集30例T2DM患者外周血各10ml,密度梯度法分离单核细胞,随机分5组进行干预培养,对照(Con)组、低浓度胰岛素100mU/L(L-Ins)组、低浓度胰岛素联合LY-294002 10μmol/L(L-Ins+LY)组、高浓度胰岛素1000mU/L(H-Ins)组、高浓度胰岛素联合LY-294002 10μmol/L(H-Ins+LY)组,每组设两个亚组。24h后加脂多糖100ng/ml继续培养,其中一个亚组采用Western blot测定P-Akt、IκBα、NF-κB蛋白的表达情况,另一亚组采用RT-PCR检测TNF-αmRNA水平。结果 L-Ins组、H-Ins组与Con组比较,P-Akt、IκB含量增加,NF-κB、TNF-αmRNA水平下降(P<0.05);H-Ins组较L-Ins组作用更明显(P<0.05);L-Ins组较低浓度L-Ins+LY组、H-Ins组较H-Ins+LY组P-Akt、IκB含量升高,NF-κB、TNF-αmRNA降低(P<0.05);L-Ins+LY组、H-Ins+LY组与Con组P-Akt、IκB、NF-κB比较,差异无统计学意义(P>0.05),TNF-αmRNA水平高(P<0.05),L-Ins+LY组和H-Ins+LY组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论胰岛素有直接抗炎作用,其效应呈剂量相关性;胰岛素可能通过激活PI3K/Akt通路,增加IκB,影响NF-κB的状态,从而对炎性因子合成和分泌进行调节;在PI3K/Akt通路受阻时,胰岛素可能通过其他通路增加炎症因子的合成和分泌。