p-MEK1/2与原发性高血压大鼠左心室肥厚关系的研究

目的动态观察p-MEK1/2在原发性高血压大鼠(SHR)左心室表达,进一步探讨MEK1/2-ERK1/2通路在高血压左心室重构中的作用。方法对比观察各周龄SHR大鼠与WKY大鼠血压,心脏/体重比值变化;免疫组织化学方法检测左心室p-MEK1/2的表达。结果整个实验过程中,WKY血压保持在正常水平,SHR16、SHR24组动脉收缩压均明显高于同周龄WKY组(P<0.05);与同周龄WKY相比SHR24组的心脏/体重比值增加明显(P<0.05);SHR24左心室相对壁厚度明显高于SHR8和WKY24大鼠(P<0.05);WKY和SHR大鼠左心室p-MEK1/2蛋白表达量均随着周龄的增加而增加,但SHR16、SHR24明显高于同周龄WKY(P<0.05)。结论 MEK1/2-ERK1/2通路可能有促进高血压左心室心肌肥厚发展的作用。

P-MEK在高血压大鼠肾小动脉平滑肌细胞中的表达及意义

目的探讨高血压肾细动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)中ERK1/2上游信号磷酸化MEK(p-MEK)的表达状态,为进一步阐明高血压状态下VSMCs功能状态改变的分子机制提供实验依据。方法将4、16、24周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)作为实验组,同周龄雄性Wistar大鼠(WKY)作为对照,各组5只大鼠。弹性纤维染色观察肾小动脉的结构变化,免疫组织化学分析各组动物肾小叶间动脉和入球动脉血管VSMCs中p-MEK的表达。结果 SHR肾小叶间动脉和入球动脉VSMCs增殖不明显,小叶间动脉相对内径随周龄增加逐渐减小。同级别动脉相比,SHR大鼠p-MEK阳性细胞数高于同周龄WKY大鼠。SHR组p-MEK增高的幅度高于同周龄WKY组。结论高血压状态下肾小动脉VSMCs功能状态的改变,可能与胞内MEK磷酸化活化有关。

下丘脑室旁核Epac蛋白在大鼠炎性痛调节过程中的作用及其机制研究

目的探讨下丘脑室旁核Epac在大鼠炎症性疼痛发展过程中的作用及其机制。方法健康成年♂SD大鼠,通过左侧后肢足底中心皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)建立炎症性疼痛模型,Western blot检测Epac蛋白的表达变化;室旁核给予Epac激动剂8p-CPT(8p-CPT-2'-O-Me-cAMP)后,测定大鼠热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),观察痛行为变化,并在药效发挥最大作用时,取出大鼠下丘脑室旁核,用Western blot检测Epac下游p-MEK1/2蛋白表达情况。结果与生理盐水对照组相比,CFA组大鼠炎症侧后足d 1、3、5、7、9、11的TWL明显降低(P<0.01),d 13的TWL基本恢复至正常水平;d6、8、10、12、14的机械缩足反射阈值(paw mechanical withdraw threshold,PMWT)明显降低(P<0.05)。与生理盐水对照组相比,CFA组大鼠室旁核Epac1蛋白表达在d 3开始明显降低,且在d 3和d 9均有统计学意义(P<0.05),而Epac2蛋白表达则没有明显变化,p-MEK1/2蛋白表达在d 3开始降低(P<0.05)。与室旁核微量注射生理盐水组相比,8pCPT组大鼠于给药后20 min和1 h热痛敏均明显减轻,TWL明显升高(P<0.05);室旁核p-MEK1/2蛋白在给药后30min表达明显升高(P<0.05),2 h后恢复至给药前水平。结论下丘脑室旁核Epac1-MEK1/2信号通路可能参与了CFA所致的慢性炎症性疼痛的发展过程。

雌激素及雌激素受体拮抗剂对乳腺癌信号传导通路中MEK-2和p-ERK病理形态的影响

目的:探讨乳腺癌中雌激素受体与细胞信号传导通路MAPK上游激酶MEK-2和下游激酶p-ERK的作用机制。方法:应用雌激素(雌二醇)与雌激素受体拮抗剂(三苯氧胺)诱导BCML-TA299小鼠原位移植乳腺癌组织,通过病理形态学、免疫组织化学法检测ERβ、MEK-2和p-ERK的表达。结果:雌二醇(E2)促进细胞增殖,核分裂多见,肿瘤有丰富的血管,第20天时肺组织中血管腔及心腔内可见大量瘤栓。E2可激活MEK-2,p-ERK明显上调,ERβ与其基因有协同作用;而三苯氧胺(TAM)抑制细胞增殖,癌细胞明显受到损伤,核碎裂、凋亡小体多见,可见多灶性变性坏死区。同时出现ERβ、MEK-2和p-ERK下调,亦有协同作用。三苯氧胺与环磷酰胺联合应用效应优于单药的应用(F=211.88,F=179.08,F=156.44;P<0.05)。结论:ERβ与MAPK信号途径中上游激酶MEK-2和下游激酶p-ERK关系密切,并有协同作用,是乳腺癌发展中重要的调节信号。

PTPIP51、p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨PTPIP51和p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达及对口腔鳞癌侵袭、转移的影响。方法收集32例口腔鳞状细胞癌及其配对癌旁正常口腔黏膜组织。用免疫荧光组织化学染色激光共聚焦显微镜检测PTPIP51与p-Raf-1蛋白在组织切片内表达及定位;PBS冲洗后对标本进行苏木精-伊红染色,普通光镜对比观察组织结构及细胞形态,同时用免疫组织化学方法(SP法)检测PTPIP51蛋白在组织和细胞内的定位;Rea-ltime PCR检测PT-PIP51与ERK1/2基因mRNA在肿瘤组织及癌旁正常口腔黏膜组织的表达情况。结果 PTPIP51与p-Raf-1蛋白在癌巢周围增殖旺盛的肿瘤细胞、间质免疫细胞及部分脉管壁内皮细胞表达阳性且2种蛋白在细胞中共定位表达。同时发现PTPIP51与ERK1/2基因mRNA在口腔鳞癌组织表达高于配对癌旁正常口腔黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);ERK1/2及PTPIP51基因mRNA表达呈正相关(r=0.641,P<0.05);两者的表达水平与患者的性别、年龄,病理分级无关,与肿瘤的TNM分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PTPIP51与Raf-1可能通过Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程,且2种蛋白与肿瘤的侵袭、转移有密切关系。

β片层阻断肽H102对PAP小鼠脑内ERK信号转导通路的影响

目的研究β片层阻断肽H102对PAP双转基因小鼠脑内ERK信号转导通路的激活作用。方法将PAP双转基因小鼠随机分为模型组和给药组,每组10只,设同背景C57BL/6J小鼠为对照组。给药组每日鼻腔给予H102溶液(5.8 mg/kg)5μL,对照组、模型组每日鼻腔给予等体积H102空白辅料溶液。30 d后行Morris水迷宫测试。之后采用免疫组化及免疫印迹技术观察小鼠脑组织内RAS、P-MEK及P-ERK蛋白的表达变化。结果 (1)Morris水迷宫测试。模型组小鼠学习记忆能力较对照组显著降低,给药组较模型组显著提高(均P<0.05)。(2)免疫组化及免疫印迹检测结果。模型组脑内RAS、P-MEK及P-ERK表达较对照组显著降低,给药组蛋白表达较模型组显著增高(均P<0.01)。结论β片层阻断肽H102可激活PAP双转基因小鼠脑内ERK信号转导通路,增加神经细胞PAS、P-MEK及P-ERK的含量,改善PAP小鼠学习记忆能力。