RhoA和肌球蛋白轻链在肝纤维化大鼠肝组织中的表达

目的观察Rho/Rho激酶信号转导通路关键信号分子RhoA和磷酸化肌球蛋白轻链[p-MLC(Thr18/Ser19)]在大鼠肝纤维化组织中的表达规律。方法HE及Masson三色染色观察肝病理组织学变化;用Western blot检测RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白的表达;RT-PCR方法检测RhoAmRNA的表达。结果随着肝纤维化的进展,RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白表达明显增加,RhoAmRNA基因表达也逐渐加强。RhoA和p-MLC(Thr18/Ser19)分别与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)呈显著正相关。结论Rho/Rho激酶信号转导通路在肝纤维化形成过程中发生变化。

大鼠肝纤维化过程中肝组织磷酸化肌球蛋白轻链表达增加

目的观察Rho信号通路信号分子磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylated myosin light chain,p-MLC)在实验性大鼠肝纤维化组织中的表达规律。方法采用胆总管结扎(BDL)方法建立大鼠肝纤维化模型;分别于手术后1、2、3、4周麻醉动物,假手术组4周麻醉动物,留取肝组织;HE及Masson三色染色观察大鼠肝纤维化的病理组织学变化;用免疫组织化学和Western blot检测p-MLC的表达。结果免疫组织化学显示假手术组p-MLC仅在血管壁呈现弱表达;BDL组随着纤维化发展,血管壁表达增强,并在肝窦周围出现阳性表达细胞。Western blot结果显示随着肝纤维化的进展,p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白表达明显增加。p-MLC(Thr18/Ser19)表达分别与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)呈显著正相关。结论肝维化形成过程中Rho信号通路信号分子p-MLC表达增强。

法舒地尔对肝星状细胞黏附、迁移及胞浆游离钙的影响及机制研究

目的观察法舒地尔(fasudil)通过Rho/Rho激酶(ROCK)信号转导通路对肝星状细胞(HSC)黏附、迁移以及胞浆游离钙([Ca2+]i)的影响。方法将培养的HSC分为5组:对照组;fasudil 12.5μmol/L组;fasudil 25μmol/L组;fasudil 50μmol/L组;fasudil 100μmol/L组。采用甲苯胺兰染色法测定细胞黏附率,Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检验细胞[Ca2+]i,Western印迹检测HSC磷酸化肌球蛋白轻链〔phosphorylated myosin light chain,p-MLC(Thr18/Ser19)〕和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果Fasudil对HSC的黏附、迁移均具有抑制作用,随着浓度增加,抑制作用加强;fasudil与HSC共同培养后,HSC内[Ca2+]i无明显变化;fasudil抑制HSC的α-SMA表达,并且对Rho/ROCK信号转导通路关键信号分子p-MLC(Thr18/Ser19)的蛋白表达有抑制作用。结论Fasudil通过抑制Rho/ROCK信号通路对细胞骨架的调节作用抑制HSC的黏附、迁移。